一种琼脂糖凝胶电泳分离质粒DNA的方法

分子无性繁殖已成为扩增特定 DNA 片段的广为使用的技术,而细菌质粒是很多无性繁殖工作中所选用的载体。近年来分离载体的方法,大多是根据载体 DNA 的共价闭合环状(CCC—DNA)性质及其对变性的抗性.在氯化铯—溴化乙锭梯度中,CCC—DNA 密度大,比线状 DNA 沉降快,所以用密度梯度超离心方法可获得高纯度的 CCC—DNA。但超离心方法在时间上、材料上都不够经济,在     

琼脂糖凝胶电泳分离纯化和制备质粒DNA

分离纯化质粒DNA,在遗传工程和质粒的 分子遗传学研究中是重要的一环。分离和制备 质粒DNA的方法很多,有：澳化乙锭密度梯度 祛^[2-5]、两相法^[6]、酸酚法^[7][碱变性法^[8]p、甲基化 白蛋白（MAK）柱层析法^[9]硝酸纤维素法^[10]、电 泳法^[11]等,这些方法都各有所长。根据质粒的超 卷曲结构、开环结构和线状结构的不同,各个质 粒分子量大小的不同,以及质粒DNA与RNA 和染色体DNA在电泳中迁移率的不同,在我 们实验室的条件下,研制了一种琼脂糖凝胶电 泳分离纯化和制备质粒DNA装置。运用这种 装置,纯化制备了以下质粒： pBR322, pASI, pUB110、F}lac+proA+B+, pVA517A, pVA517B, pVA517C, pVA517D, pVA517E, pVA517F, pVA517G和pVA517H。并且对它们进行了电 镜观察,对其中纯化过的pBR322和pASI质粒 进行了转化实验,证明它们有生物活性。同时, 应用这种装置,可以一次分离具有不同分子量 大小的几种质粒,回收率约为85多。结果表明, 这种装置结构简单,操作方便,是纯化制备质粒 DNA的一种可用工具。     

一种提高质粒DNA凝胶电泳检测灵敏度的方法

比较了凝胶电泳示检测质粒ＤＮＡ时不同激发波长对ＤＮＡ－ＥＢ荧光强度的影响,发现短波长激发光可增加ＤＮＡ的探测灵敏度。采用２６０ｎｍ作为激光光时可探测到少至０．７ｎｇ的线性ＤＮＡ。且在很广的ＤＮＡ的质量范围内,ＤＮＡ－ＥＢ荧光强度 与ＤＮＡ量或正比。以此改进方法检测电离辐射诱导的ＤＮＡ单、双链断裂岢得到与其它研究结果相一致的Ｇ（ＳＳＢ）和Ｇ（ＤＳＢ）值。     

无需凝胶电泳的DNA快速分析仪器——WAVE DNA片段分析系统

随着基因组计划的深入进行 ,对ＤＮＡ的分析技术提出了更高要求。目前分离和分析ＤＮＡ片段的标准方法是聚丙烯酰胺和琼脂糖凝胶电泳 ,这种现代电泳技术仍然是一个繁琐冗长的程序 ,不易自动化 ,难于提高分析效率。而且 ,用于检测ＤＮＡ序列变异的基于凝胶的方法 ,其重复性和精密度都不理想。最近 ,出现了一种自动化的可用于检查ＤＮＡ序列改变和ＤＮＡ片段分析的工具 ,其名称为转基因组ＷＡＶＥＤＮＡ片段分析系统。这个系统是第一个商用的ＤＮＡ序列变异检测和ＤＮＡ片段分析的自动化技术。其特点是高通量筛选单核苷酸多态 (ＳＮＰ)和短串…     

体外建成带有λ噬菌体DNA片段的重组质粒

将大肠杆菌抗四环素及抗氨苄青霉素的质粒pBR322的DNA、大肠杆菌λ噬菌体DNA在体外经限制性核酸内切酶Hind Ⅲ切割,并用T4DNA连接酶连接后,以大肠杆菌K12HB101(recA~-r(?)m(?))为受体进行转化,采用插入钝化(insertional inactivation)方法选择重组质粒。利用环丝氨酸浓缩Ap~rTc~3转化体。在648株Ap~r转化体中选出120株无性繁殖系为Ap~rTc~s。随机挑出3株含有重组质粒的无性繁殖系进行大肠杆菌素El(colicin El)免疫特性测定及显微镜观察,证明为大肠杆菌素El敏感,并为典型的大肠杆菌形态。随机挑出一株含有重组质粒pAG-5的无性繁殖系,采用Zasloff等酸酚法进行重组质粒DNA提取,用Hind Ⅲ消化重组质粒DNA后进行琼脂糖凝胶电泳分析,观察到重组质粒pAG-5除pBR322质粒DNA带外含有λ-Hind Ⅲ的第5 DNA带。用重组质粒DNA再次对HB101(recA~-r(?)m(?))及K12 802(Su_(11)~+m_K~+)受体进行转化,转化体在含氨苄青霉素培养基平皿上生长,但在含四环素培养基平皿上不生长,再次证明为Ap~rTc~5.每微克重组质粒DNA Ap~r转化体为4.0—4.6×10~3。     

用凝胶电泳纯化具有生物学活性的质粒DNA

采用一般柱电泳装置,在琼脂糖凝胶上将质粒ColEl、pBR322、pSC101、pCRI的DNA与染色体DNA及小分子核酸杂质分开,切出含有质粒的凝胶薄片,电洗脱回收质粒DNA,产物可被限制酶Eco RI酶解;将pBR 322、PSC 101、pCRI DNA转化大肠杆菌C_(600),每微克DNA可产生10~4个转化子;从pSC 101、pCRI转化子细胞中再抽提出相应质粒,它们同样具有亲本质粒的遗传特性和分子特性。     

快速检查寡聚DNA片段序列的方法

以质粒为模板,用待测寡聚DNA片段和通用测序引物进行PCR（聚合酶链式反应）,PCR片段经纯化后插入到pUC－18或pUC－19的多克隆位点中,然后用通用测序引物测定重组质粒上待测寡聚DNA片段,即可清晰、正确地知道它的序列．     

质粒DNA制备方法的改进

目的：改进碱裂解制备质粒ＤＮＡ的方法。方法：在小规模制备中,采用７．５ｍｏｌ／Ｌ ＢＨ４Ａｃ中和碱溶液及室温下异丙醇沉淀;在中规模制备中,采用三步沉淀将质粒分离纯化;在大规模制备中,用两步清洗弃去由于量大而不宜除掉的杂物（碎屑物、杂蛋白等）。结果：建立了一套快速、高效、无毒、经济的方法。     

DNA片段的高效克隆

用Taq酶进行PCR扩增时,其PCR产物的3末端有一个附加的A碱基。因此,目前在克隆PCR产物时一般使用T－VCctor。但T—Vector的价格比较昂贵,而使用本试剂盒也可在短时间内使PCR产物与平滑末端载体进行高效连接。PCR产物与平滑末端的载体连接时,有必要除去3廉端的附加碱基,并使其5末端磷酸化。使用TaKaRaBKLKit（BllllltillgKillstiollLigstiollKit）可使这一连串的反应在短时间内完成。PCR产物的末端平滑化与磷酸化反应在一个反应体系内同时进行,一次反应后便可得到能够用于连接的DNA片段。用于连接反应的PCR产物无需进…     

快速鉴定和大量纯化质粒DNA的方法

为了快速鉴定重组质粒DNA, Birnboim等 人^[1]建立了快速碱性抽提法。在此基础上,我 们作了某些修改,不仅较有效地防止了质粒 DNA变性形式的出现,而且可以用来大量抽提 质粒DNA。若再协同轻基磷灰石柱层析121和酸 酚法^[6]处理,可获得纯度较高的质粒DNA。我 们用修改法提取了分子量从2.6X10^[6]-26X10^[6] 道尔顿的4种不同质粒DNA,均收到了比较理 想的结果,特别对于难于抽提的或大质粒DNA 更为有效。     

一个新的泥鳅雄性特异DNA片段（简报）

世界上现存鱼类多达24000余种．是脊椎动物中分布最广,种类最多的类群．具有多种多样的生物学特性和重大的经济价值。与高等脊椎动物相比．其性别决定具有多样性和可塑性。大多数鱼类的性别决定机制很原始。性染色体的分化处于萌芽状态。在已进行细胞遗传学研究的1700多种鱼类中．大约有176种（占10．4％）发现有明显的异型性染色体。     

一种有效回收小分子DNA片段的方法

介绍了一种有效回收小于200bp DNA片段的方法。用改进的冻融-离心回收法对155bp的DNA片段进行回收,并且与常规冻融-离心回收、TaKaRa回收试剂盒的结果做对比,用琼脂糖凝胶电泳检测回收结果,紫外吸收法定量分析。结果证明:改进的方法是一种经济、方便、可靠的回收小分子DNA片段的方法。     

简便实用的琼脂糖凝胶回收DNA片段方法

介绍一种简便实用的DNA片段回收方法,与以前所报道的DEAE-纤维素膜电泳法、透析袋电洗脱法、低融点琼脂糖凝胶法、凝胶冻融法等相比,所需器材简单、操作简便、回收率高、成本低。回收的DNA片段在进一步克隆和测序中表现出较好的效果,是一种适合于科研和教学的实验方法。     

具有真细菌基因启动子活性的盐生盐杆菌质粒DNA片段

利用大肠杆菌启动子探测质粒ｐＫＫ２３２－８为载体、用两组限制性内切酶ＢａｍＨＩ－ＳａｌＩ和ＨｉｎｄⅢ－ＳａｌＩ分别消化盐生盐杆菌Ｊ７（Ｈａｌｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｈａｌｏｂｉｕｍ）的质粒ｐＨＨ２０５,在体外进行重组,转化Ｅ．ｃｏｌｉＨＢ１０１感受态细胞,在含氨苄青霉素和氯霉素的选择平板上筛选转化子,并从随机挑选的２０株转化子中,获得抗氯霉素水平达到１１０μｇ／ｍｌ的转化子Ｔ１和Ｔ２,所含重组质粒分别被命名为ｐＪＨ和ｐＪＢ。经限制性酶切分析及杂交分析表明,ｐＪＨ质粒上插入了一段来源于ｐＨＨ２０５质粒的ＤＮＡ片段,其大小为８００ｂｐ左右。通过重新转化实验进一步表明,该ＤＮＡ片段在大肠杆菌中具有启动子功能,从而证明,在古细菌（盐生盐杆菌）的质粒ＤＮＡ中存在具有真细菌（大肠杆菌）基因启动子活性的ＤＮＡ片段。     

琼脂糖凝胶电泳中DNA回收方法的比较

实验采用直接切取琼脂糖凝胶,进行Lambda DNA/EcoRI HindIII Marker的回收,将其与试剂盒回收进行比较,并对比切下的凝胶立即回收和在-20℃冰冻数小时回收的效果,结果表明实验采用的方法与试剂盒的比较产量相当,且重复性好,达到了分子生物学实验的要求.尤其实验方法在大片段的回收(21226bp)平均回收率是43.5956%与试剂盒的回收率:38.9761%相比有明显的优势,非常适合大多数实验室使用.     

质粒和λ噬菌体DNA简便的分离纯化方法

用甲酯化白蛋白硅藻土(MAK)柱层析方法分离纯化的质粒pBR322,ColE_1,pSC101,pCRl 和λDNA,经EcoR_1限制性内切酶作用,琼脂糖凝胶电泳分析,抗药因子转化,结果表明这些材料可以用作DNA 重组体的载体和限制性内切酶的底物。     

质粒和λ噬菌体DNA简便的分离纯化方法

用甲酯化白蛋白硅藻土(MAK)柱层析方法分离纯化的质粒pBR322,ColE_1,pSC101,pCR1和λDNA,经EcoR_1限制性内切酶作用,琼脂糖凝胶电泳分析,抗药因子转化,结果表明这些材料可以用作DNA重组体的载体和限制性内切酶的底物。     

安捷伦和Caliper联手推出DNA1000芯片实验室(LabChip)试剂盒快速准确地测定DNA片段的大小和含量

安捷伦科技和Ｃａｌｉｐｅｒ公司日前宣布 ,推出ＤＮＡ 10 0 0芯片实验室 (ＬａｂＣｈｉｐ)试剂盒 ,用于ＤＮＡ片段的自动分析 ,测定片段大小及浓度。作为芯片实验室 (ＬａｂＣｈｉｐ)系列试剂盒中的新成员 ,可以让分子生物学研究人员使用Ｃａｌｉｐｅｒ科技公司开发的独特的芯片实验室技术 ,快速精确地分析ＰＣＲ产物和小片段限制性酶解产物。快速、简便、洁净ＤＮＡ 10 0 0芯片实验室 (ＬａｂＣｈｉｐ)试剂盒不仅是有ＤＮＡ 5 0 0芯片实验室 (ＬａｂＣｈｉｐ)试剂盒的分辨率 ,而且片段大小范围也适合于大多数ＰＣＲ片段 ( 2 5到 10 0 0个…     

蓝藻质粒DNA提取方法的改进

以含pMD-489-TNF重组质粒的丝状体鱼腥藻7120和单细胞聚球藻7002为材料,比较了SDS-碱裂解法和SDS法在蓝藻质粒提取中的效果,并对SDS-碱裂解法应用于蓝藻质粒提取作了一些改进和实验条件的优化。