金黄色葡萄球菌通过NF-κB信号对破骨细胞分化的影响及作用

为探讨金黄色葡萄球菌对破骨细胞分化的影响和可能的作用机制,本研究采用活的金黄色葡萄球菌、灭活的金黄色葡萄球菌和金黄色葡萄球菌滤液处理RAW 264.7细胞5 d。观察破骨细胞样细胞和吸收凹坑的形成,并通过实时定量PCR检测破骨细胞特异性基因(TRAP, MMP-9,组织蛋白酶K, CTR和Atp6v0d2)的表达。此外,用蛋白质印迹法检测了与破骨细胞分化有关的信号通路中的关键蛋白。结果显示,灭活的金黄色葡萄球菌的感染复数和金黄色葡萄球菌滤液以及活的金黄色葡萄球菌(MOI为10∶1 CFU)对RAW 264.7细胞没有明显的细胞毒性。当没有RANKL时,活的金黄色葡萄球菌、灭活的金黄色葡萄球菌和金黄色葡萄球菌滤液以剂量依赖性方式促进破骨细胞样细胞的形成及再吸收凹坑的诱导形成;当用JSH-23预处理时,活的金黄色葡萄球菌、灭活的金黄色葡萄球菌和金黄色葡萄球菌滤液诱导的破骨细胞样细胞的形成明显减少,再吸收的凹坑诱导形成明显降低(p0.05)。RT-PCR结果显示,活的金黄色葡萄球菌、灭活的金黄色葡萄球菌和金黄色葡萄球菌滤液以剂量依赖性方式增加了RAW 264.7细胞中破骨细胞特异性基因的mRNA表达;当用JSH-23预处理时,活的金黄色葡萄球菌、灭活的金黄色葡萄球菌和金黄色葡萄球菌滤液诱导的破骨细胞特异性基因的表达明显降低(p0.05)。蛋白印迹检测结果显示,活的金黄色葡萄球菌处理后10 min,IκBα发生降解,而NF-κBp65的磷酸化在5 min和10 min时显著上升(p0.05),而Akt和MAPKs信号通路中的蛋白质没有明显变化。本研究结果可为理解金黄色葡萄球菌介导的骨髓炎的发病机理提供了分子基础。     

PCR技术在检测鼠金黄色葡萄球菌中的应用研究

目的　建立实验大小鼠金黄色葡萄球菌的快速检测方法———PCR法。方法　根据已公布的金黄色葡萄球菌耐热核酸酶nuc基因的序列 ,设计并合成一对特异性的引物 ,利用PCR技术扩增nuc基因片段。对金黄色葡萄球菌和其他非金黄色葡萄球菌菌株抽提的DNA进行扩增。结果　金黄色葡萄球菌PCR产物出现 6 6 8bp的特异性DNA扩增片段 ,而其他非金黄色葡萄球菌未出现扩增片段 ,证实了合成的引物对金黄色葡萄球菌具有特异性。将抽提的金黄色葡萄球菌DNA进行系列稀释 ,测定此PCR体系的敏感性 ,结果显示 ,该PCR体系能检出 3pg金黄色葡萄球菌DNA ,且从抽提DNA到PCR扩增及电泳结束仅需 4h。结论　本研究所建立的扩增耐热核酸酶nuc基因检测鼠金黄色葡萄球菌的PCR方法 ,具有快速、可靠、敏感和特异的特点 ,可用于临床样品和金黄色葡萄球菌感染时的检测 ,适合应用于实验大小鼠的监测。     

食源性金黄色葡萄球菌脉冲场凝胶电泳分型分析

对石家庄地区食源性金黄色葡萄球菌进行脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型,建立石家庄市金黄色葡萄球菌PFGE分型的数据库,探讨引起食物中毒金黄色葡萄球菌菌株和其他食源性金黄色葡萄球菌的分子特征。利用PFGE分型技术对2010至2012年石家庄市的75株食源性金黄色葡萄球菌进行全基因组分析,DNA酶切图谱用BioNumerics软件进行聚类分析。75株食源性金黄色葡萄球菌的PFGE图谱的相似性系数在54%～100%之间,经聚类分析得到45个PFGE型别,6起食物中毒的金黄色葡萄球菌分别由PFGE01型、PFGE02型、PFGE11型、PFGE12型、PFGE15型和PFGE45型引起。建立的金黄色葡萄球菌PFGE分型数据库分子型别较多,且存在差异明显的多个克隆系,对石家庄地区金黄色葡萄球菌引起食物中毒的防控和溯源工作有重要意义。     

金黄色葡萄球菌荚膜多糖研究进展

金黄色葡萄球菌作为引起人和动物发病的一种主要的致病菌,已严重影响到人们的身体健康和畜牧业的发展。致病性金黄色葡萄球菌多数含有荚膜成分,并且这种荚膜成分与金黄色葡萄球菌的毒力和抗噬菌作用有关。主要从金黄色葡萄球菌荚膜多糖的5型和8型血清学分类、分子结构、影响因素、表达调控等方面简要介绍了目前国内外关于金黄色葡萄球菌荚膜多糖的研究进展。     

耐万古霉素的金黄色葡萄球菌

目前认为万古霉素中度耐药的金黄色葡萄球菌菌株一般从苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌转变而来。万古霉素中度耐药的金黄色葡萄球菌感染患者往往长期使用万古霉素或有慢性疾病。目前还没有系统检测万古霉素中度耐药的金黄色葡萄球菌的试验。如果用万古霉素治疗苯唑西林耐药的金黄色葡萄球菌感染失败,临床医生应警觉是否为万古霉素中度耐药的金黄色葡萄球菌感染。     

金黄色葡萄球菌耐药基因及新型抗菌药物的研究进展

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus),简称金葡菌,是一种临床常见致病菌,可引起皮肤化脓性感染、肺炎、心包炎、败血症及脓毒血症等多种疾病。目前临床上金黄色葡萄球菌的多重耐药情况已十分严峻,特别是耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus,MRSA)的出现,已成为临床抗感染治疗的棘手难题,严重危害人类健康。本文主要介绍金黄色葡萄球菌基因水平的耐药性、新型抗菌药物的研发及临床治疗金黄色葡萄球菌感染三方面的进展,为金黄色葡萄球菌的耐药性研究及耐药菌株的临床有效治疗提供科学依据。     

银白色葡萄球菌的发现、分布与致病性

银白色葡萄球菌(Staphylococcus argenteus)是金黄色葡萄球菌(S. aureus)的近缘新种,于2015年正式被鉴定、命名。在此之前,银白色葡萄球菌一直被认为是金黄色葡萄球菌种内的一个远源支系。该物种绝大多数菌株分离自人体,基因组上含有大量与金黄色葡萄球菌同源的毒力基因,可导致与金黄色葡萄球菌类似的临床感染和食物中毒症状。因为与人类健康相关,银白色葡萄球菌受到了越来越多的关注,目前已在20多个国家被报道。但是由于出现较晚,与金黄色葡萄球菌难以区分,银白色葡萄球菌的全球分布状况、原始生境和传播过程尚不清楚。本文从发现过程、分布、致病性和鉴定方法等方面综述了银白色葡萄球菌的最新研究进展。     

重症监护病房金黄色葡萄球菌耐药性与流行病学分析

为了解重症监护病房感染金黄色葡萄球菌的耐药性及流行状况,收集重症监护病房2007年9～12月临床分离的金黄色萄萄球菌42株,纸片扩散法检测其对10种抗生素的耐药率,随机引物扩增PCR(Ran- dom amplified polymorphic DNA,RAPD)检测其流行状况。42株金黄色葡萄球菌对氨苄西林的耐药率最高,没有检测到对万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌。35株金黄色葡萄球菌为耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌(MR- SA),7株为甲氧西林敏感的葡萄球菌(MSSA),除万古霉素外,MRSA对其他9种抗生素的耐药率比MSSA高,42株金黄色葡萄球菌经RAPD分型分为5个基因型,其中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ型分别占31.0%、38.1%、14.3%、9.5%、7.1%。重症监护病房临床金黄色葡萄球菌分离株对多种抗生素具有高耐药性,其感染基因型以Ⅰ、Ⅱ型为主。     

金黄色葡萄球菌预防及治疗研究进展

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)是院内获得性感染的主要病原体之一,金黄色葡萄球菌会引起患者的严重感染,对患者的治疗和预后产生不良影响。现今临床预防和治疗金黄色葡萄球菌感染主要依赖抗生素。近年来,随着金黄色葡萄球菌耐药性的增强,万古霉素(Vancomycin)成为治疗其感染的最后一道抗生素防线。目前迫切需要探寻新的治疗方法来代替抗生素治疗。现归纳针对金黄色葡萄球菌耐药性的最新疗法,旨在为预防和治疗金黄色葡萄球菌感染提供新的思考。     

金黄色葡萄球菌蛋白质相互作用网络及功能

【目的】金黄色葡萄球菌是一种革兰氏阳性菌,是目前最难以对付的病菌之一。它能引起多种感染,特别是在医院环境中。近年来,抗药性金黄色葡萄球菌传染更加严重,已成为公共卫生威胁。由于以前对于金黄色葡萄球菌的实验性研究大都是基于单个基因或者蛋白进行的,为了更好的研究这个物种,有必要从整体上把握金黄色葡萄球菌的蛋白作用机理。【方法】采用系统发生谱、操纵子法、基因融合法、基因邻近法、同源映射法等五种计算方法预测金黄色葡萄球菌蛋白质相互作用网络。【结果】从蛋白组的角度构建了金黄色葡萄球菌蛋白相互作用网络,并对网络进行功能分析。【结论】网络的分析表明金黄色葡萄球菌的蛋白质相互作用网络也服从scale-free属性,发现了SA0939、SA0868、rplD等重要的蛋白。通过对金黄色葡萄球菌的重要的细胞壁合成和信号转导调控蛋白局部网络分析,发现了一些对这两个系统十分重要的蛋白分子,这些信息将为更好的了解金黄色葡萄球菌的致病机理和开发新的药物靶点提供指导。     

金黄色葡萄球菌一氧化氮合酶基因(nos)缺失突变株的构建

目的：构建金黄色葡萄球菌一氧化氮合酶基因（nos）缺失突变株。方法从金黄色葡萄球菌RN6390的基因组DNA中扩增了nos基因的上、下游片段;以大肠杆菌和金黄色葡萄球菌穿梭质粒pMAD（含有温度敏感性的复制起点,红霉素抗性基因（erm）和B．半乳糖苷酶基因（bgaB）为筛选标记）为骨架,构建基于nos基因位点的同源重组载体pMADAnos,该载体经金黄色葡萄球菌RN4220修饰后再转入金黄色葡萄球菌RN6390。经过在30℃和42℃交替培养,通过抗生素抗性和β-半乳糖苷酶活性筛选nos基因缺失突变株。结果筛选得到的突变菌株,经基因组PCR、定量PCR及序列分析表明,金黄色葡萄球菌RN6390基因组中的nos基因被成功地敲除。结论利用同源重组的方法构建了金黄色葡萄球菌RN6390nos缺失突变株,为金黄色葡萄球菌nos基因功能的研究奠定了基础,     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌及其肠毒素的检测和耐药性分析

目的评价乳胶结合试验检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)及其肠毒素(SE),并进行耐药性分析.方法收集130株金黄色葡萄球菌临床分离株,通过药敏试验将其分为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),用反向间接血凝试验(RPHA)检测金黄色葡萄球菌肠毒素.结果67株MR-SA产肠毒素,19株MSSA产肠毒素,MRSA产肠毒素率为100%,MSSA产肠毒素率为30%.结论实验室应重视金黄色葡萄球菌肠毒素的检测.     

连翘对金黄色葡萄球菌的抑菌作用及机制的试验研究

探讨连翘对金黄色葡萄球菌的抑菌作用及机制。根据2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法测定连翘对金黄色葡萄球菌的最低抑菌浓度(MIC)。用连翘的MIC浓度的处理金黄色葡萄球菌,分别在0、4 h、8h、12 h、16 h、20 h、24 h、28 h、32 h取样测定光密度值(OD值),绘制其生长曲线。用MIC的连翘处理金黄色葡萄球菌24 h,检测琥珀酸脱氢酶(SDH)和苹果酸脱氢酶(MDH)活性。用MIC的连翘作用于金黄色葡萄球菌,电导仪检测0、2 h、4 h、6 h、8 h、10 h时上清液稀释20倍的电导率,紫外分光光度计检测DNA、RNA等大分子物质的外渗水平。连翘对金黄色葡萄球菌的MIC为0.12 mg/m L。连翘作用后的金黄色葡萄球菌生长明显受到抑制并且提前4 h进入衰亡期。连翘作用后的金黄色葡萄球菌中SDH和MDH活性显著下降,而培养基上清的电导率明显升高,DNA、RNA等大分子物质外渗水平明显增多。连翘能抑制金黄色葡萄球菌的生长,作用机制可能与细胞膜通透性及SDH和MDH代谢酶活性有关。     

产SEB金黄色葡萄球菌α-溶血毒素基因缺失菌株的构建

构建产肠毒素B(Staphylococcal enterotoxin B ,SEB)的金黄色葡萄球菌α-溶血毒素（α-hemolysin, α-HL)缺失菌株。首先构建用于α-HL基因敲除的同源重组质粒pMHL-α,经金黄色葡萄球菌RN4220修饰后再通过原生质体转入金黄色葡萄球菌SM-01。含重组质粒pMHL-α的金黄色葡萄球菌SM-01在42℃诱导条件下培养多代,最终筛选出α-溶血毒素基因缺失菌株。经序列分析和血平板溶血实验结果证明最终获得产SEB金黄色葡萄球菌α-HL缺失菌株。为野生型金黄色葡萄球菌的体内遗传操作及构建产超抗原药物金黄色葡萄球菌基因工程菌株提供了一定的理论基础和方法。     

葡萄球菌自溶素的研究进展

葡萄球菌是人和动物皮肤黏膜的专性寄生菌,目前临床常见的致病菌种主要有金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌。金黄色葡萄球菌可引起局部化脓感染,也可引起败血症、脓毒血症等全身感染。表皮葡萄球菌主要引起心内膜炎、败血症等,     

金黄色葡萄球菌生物膜形成机制研究进展

金黄色葡萄球菌是医院和社区获得性感染最常见的病原菌之一,而且可形成生物膜,从而导致生物膜相关疾病的产生。患者一旦发生金黄色葡萄球菌生物膜感染,难以彻底治愈。深入研究金黄色葡萄球菌生物膜形成的分子机制和调控网络,对寻找有效的防治、治疗药物和手段具有重要意义。我们就金黄色葡萄球菌生物膜形成过程和调控机制的研究近况做一综述。     

牛奶中金黄色葡萄球菌PCR检测方法的建立与应用

目的:建立一种直接从牛奶中检测金黄色葡萄球菌的PCR快速诊断方法.方法:根据已发表的金黄色葡萄球菌16-23SrRNA特异性序列设计并合成一对引物,通过优化反应条件建立从牛奶中直接检测金黄色葡萄球菌的PCR方法.结果:与细菌的常规分离方法相比,PCR法敏感性高,与其它型葡萄球菌无交叉反应,特异性迭100%,检测细菌基因组DNA最低浓度为35ng/μL,能在5h内对送检的牛奶样品直接进行金黄色葡萄球菌的测定,可用于乳制品中金黄色葡萄球菌的检测.结论:成功建立了快速检测牛奶中金黄色葡萄球菌PCR方法.     

安徽不同地区奶站牛奶中金黄色葡萄球菌及其肠毒素污染状况评估

目的评定安徽地区各奶站牛奶中金黄色葡萄球菌以及肠毒素的污染情况。方法通过从安徽省不同地区30所奶站采集乳样,进行乳源性金黄色葡萄球菌的分离与生化鉴定,并采用PCR技术对分离出的菌株进行金黄色葡萄球菌肠毒素血清型鉴定。结果安徽省30个奶站中有4个地区奶站的牛奶中污染金黄色葡萄球菌;从污染牛奶中共分离出5株金黄色葡萄球菌,检出率为16.7%。经鉴定,所分离出的金黄色葡萄球菌中2株为肠毒素A型,1株为肠毒素C型,2株为同时产肠毒素A和肠毒素C。结论安徽省不同地区奶站中的牛奶污染的金黄色葡萄球菌产肠毒素类型以肠毒素A为主。     

S.aureus对PMN粘弹性和细胞骨架影响的研究

利用微管吸吮技术和免疫组化染色,研究了在不同浓度金黄色葡萄球菌及其代谢液作用下多形核中性粒白细胞粘弹性的变化,以及在金黄色葡萄球菌作用下PMN细胞骨架的改变。结果发现金黄色葡萄球菌代谢液对PMN粘弹性无显著影响,而金黄色葡萄球菌悬液则对PMN的粘弹性有显著影响。各参数值随金黄色葡萄球菌浓度的增加而显著递增,至金黄色葡萄球菌浓度达10倍PMN浓度时趋于稳定;微丝和微管的免疫组化染色发现其细胞骨架形态发生改变,定量分析其光密度有显著增加。这些结果表明：PMN受金黄色葡萄球菌刺激后,细胞骨架发生了重新组装和骨架蛋白的表达,使PMN刚性和粘性均增加,促进在局部微循环中滞留粘附,发生炎性反应。     

快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素A基因方法的建立与应用

目的建立一种快速准确定量检测金黄色葡萄球菌肠毒素A的方法。方法以femB、SEA基因分别作为金黄色葡萄球菌菌株、肠毒素A的靶序列,设计合成引物和TaqM an探针;收集腹泻患者大便标本分离的金黄色葡萄球菌68株,并定量检测其肠毒素A。结果TaqM an探针荧光聚合酶链反应检测金黄色葡萄球和肠毒素A的灵敏度均为1.0×102拷贝。68株金黄色葡萄球菌中检出产肠毒素A菌株11例(16.2%,11/68),CT值为13.5~20.6。结论TaqM an探针荧光聚合酶链反应能够准确快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素A。