蝎毒对癫痫敏感性和海马GFAP释放的影响

目的和方法 :本工作用海人酸癫痫模型 ,通过对癫痫大鼠蝎毒治疗后行为变化及脑内胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫反应活性的检测 ,对蝎毒抗癫痫反复发作的相关脑区及其机制做以初步探讨。结果 :癫痫大鼠蝎毒治疗三周后 ,能明显减少癫痫发作的例数 ,减轻癫痫发作的程度 ,使发作的潜伏期延长 (P <0 .0 5 )。免疫细胞化学的实验显示 ,蝎毒抗癫痫反复发作的相关脑区是海马。 8例蝎毒治疗的大鼠与实验对照组相比 ,有 6例背侧海马GFAP免疫染色明显减轻 ,未见星形胶质细胞增生 ;CA1区无明显神经元缺失 ;而且与空白对照组相比无显著差异。结论 :癫痫大鼠蝎毒治疗三周后 ,能明显减轻癫痫发作的行为 ,抑制海马星形胶质细胞的增生肥大 ,减轻海马神经元受损的程度。蝎毒抑制海马星形胶质细胞增生很可能是蝎毒抗癫痫反复发作的重要机制之一。     

蝎毒诱导红藻氨酸癫痫大鼠海马内胆囊收缩素原mRNA的表达

目的和方法：本工作用红藻氨酸（ＫＡ）癫痫模型,对用蝎毒处理住房第马内胆囊收缩素原ｍＲＮＡ（ＰＣＣＫ ｍＲＮＡ）表达进行原位杂交观察,并对国产东亚钳蝎粗毒抗癫痫反复发作的机制做了初步探讨。结果：原位杂交的实验显示,三周ＫＡ后,实验对照组与空白对照组相比,腹侧海马是海马门区ＰＣＣＫ ｍＲＮＡ阳性神经元数目明显减少（Ｐ〈０．０５）;实验给药组大鼠８例,其中有６例腹侧海马门区ＰＣＣＫ ｍＲＮＡ阳性神经元数     

蝎毒抗癫痫反复发作的GFAP基因调控机制

已有的资料证实红藻氨酸 (Ｋａｉｎｉｃａｃｉｄ ,ＫＡ)癫痫模型具有癫痫发作敏感性长期增强的特征 ,伴有海马结构胶质原纤维酸性蛋白 (ｇｌｉａｌｆｉｂｒｉｌｌａｒｙａｃｉｄｐｒｏｔｅｉｎ ,ＧＦＡＰ)的大量表达 ,其为海马结构反应性胶质化的神经病理学基础 ;用反义ＧＦＡＰｍＲＮＡ转染的星形胶质细胞的细胞株内不再表达ＧＦＡＰ。新近 ,我们从ＫＡ癫痫大鼠海马结构中发现调控ＧＦＡＰ基因表达的序列特异的ＤＮＡ结合蛋白。我们从前的工作已证实蝎毒具有明显的抗癫痫反复发作的作用 ,抑制癫痫大鼠海马结构ＧＦＡＰ的过量表达 ,但蝎毒阻…     

蝎毒诱导红藻氨酸癫痫大鼠海马内GABA释放的免疫组化观察

本工作用红藻氨酸癫痫模型,经蝎毒处理后观察大鼠癫痫发作的行为变化并检测大鼠海马内ＧＡＢＡ免疫反应样物质对国产钳蝎粗毒抗癫痫反复发作的细胞机制进行初步探讨。ＫＡ癫痫大鼠经蝎毒处理３周后,与实验对照组相比,能明显减轻发作行为。ＧＡＢＡ免疫组化的实验显示,用ＫＡ３周后,实验对照组大鼠与空白对照组腹侧海马尤其是海马门区ＧＡＢＡ免疫反应阳性神经元数目明显减少,免疫染色强度明显降低。实验给药组大鼠８例中,有６     

胃扩张刺激对大鼠大脑皮层及海马CCK mRNA表达的影响

胆囊收缩素（ｃｈｏｌｅｃｙｓｔｏｋｉｎｉｎ,ＣＣＫ）是脑肠肽中的一种,被认为是饱因子。本实验采用以地高辛标记的ＣＣＫ ｃＤＮＡ为探针的原位杂交和半定量ＲＴ－ＰＣＲ技术。用水囊扩张胃作为对胃壁的机械刺激模拟食物对胃的充盈作用,观察大鼠大脑皮层和海马内含ＣＣＫ神经元ＣＣＫ ｍＲＮＡ表达的变化情况。     

红藻氨酸癫痫大鼠海马GFAP基因调控蛋白表达的变化

目的和方法：用Southwestern印迹从红藻氨酸（KA）癫痫大鼠海马结构中筛选调控胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）基因表达的DNA结合蛋白;并观察其在海马内表达变化的规律,旨在从基因调控水平深入探讨癫痫反复发作形成的神经病理学机制。结果：Southwestern印迹的实验显示海马结构内有两种调控GFAP基因表达的序列特异的DNA结合蛋白,分子量分别为39kDa和35.5kDa;KA后1d,两种调控蛋白的表达即开始增加,5－7d时表达显著增加,3周时表达最多,3个月时表达仍很高。结论：KA通过上调调控GFAP基因表达的转录因子,使海马GFAP过量表达,提示该转录调控因子很可能参与一次KA后癫痫反复发作的形成。     

吗啡对福尔马林引起大鼠海马内IL-2RβmRNA表达的影响

本实验采用原位杂交法观察足底注射福尔马林（Ｆｏｒ）痛敏对海马内白细胞介素２受体βｍＲＮＡ（ＩＬ－２ＲβｍＲＮＡ）生成的影响及其与吗啡、促肾上腺皮质激素（ＡＣＴＨ）的关系。结果表明：正常大鼠海马有ＩＬ－２ＲβｍＲＮＡ表达,集中分布于ＣＡ１－ＣＡ４区神经元、齿状回颗粒细胞。足底注射Ｆｏｒ后６ｈ双侧海马ＩＬ－２ＲβｍＲＮＡ表达均增加（Ｐ〈０．０５）,１２ｈ达高峰,２４ｈ仍高于正常。在６ｈ时,腹腔注射吗啡     

蝎毒耐热蛋白对大鼠急性分离海马神经元兴奋性的影响

应用全细胞膜片钳记录技术在电流钳模式下观察经持续高温等特殊处理后分离纯化的30～50 kDa蝎毒耐热蛋白(scorpion venom heat resistant protein,SVHRP)(国家发明专利,专利号ZL01 106166.92)对急性分离大鼠海马神经元兴奋性的影响.结果发现SVHRP可致海马神经元兴奋性降低.神经元经1×10-2 μg/mL SVHRP处理后动作电位发放模式改变,发放频率减少.在52个受检细胞中,有45个细胞产生位相放电(占86.54%);7个细胞产生重复放电(占13.46%).在产生位相放电的45个细胞中,有8个细胞在SVHRP处理后仍可以诱发出位相放电(占17.78%);37个细胞在SVHRP处理后无法诱导出位相放电(占82.22%),SVHRP处理后动作电位的产生与处理前相比,有显著差异(P＜0.01,n=45);在产生重复放电的7个细胞中,在1×10-2μg/mL SVHRP作用后均不能再次诱发出重复放电,而是产生一个动作电位或不再产生动作电位,药物处理前产生的动作电位个数为14.57±1.00,SVHRP处理后产生动作电位的个数为0.57±0.20,二者之间有显著性差异(P＜0.01,n=7).1×10-4 μg/mLSVHRP处理后,诱发动作电位产生的基强度由(75.10±8.99)pA增加到(119.85±12.73)pA(P＜0.01,n=8);阈电位由(-41.17±2.15)mV升至(-32.40±1.48)mV(P＜0.01,n=8);动作电位峰值由(68.49±2.33)mV下降至(54.71±0.81)mV(P＜0.01,n=8).由于神经元超兴奋性被认为是癫痫发作的基本机制之一,因此上述结果表明SVHRP有可能通过降低海马神经元兴奋性发挥其抗癫痫作用,这为蝎毒药物的进一步开发提供理论依据.     

蝎毒耐热蛋白对大鼠海马神经元钠通道的抑制作用

应用全细胞膜片钳技术观察蝎毒耐热蛋白（scorpion venom heat resistant protein,SVHRP）对急性分离大鼠海马神经元电压依赖性钠通道的影响。结果表明,急性分离大鼠海马神经元产生的河豚毒素（tetrodotoxin,TTX）敏感的电压依赖性钠电流被SVHRP浓度依赖性地抑制,半数抑制浓度为（0．0034±0．0004）μg／mL,Hill常数为0．4361±0．0318;SVHRP可使钠通道稳态激活曲线向电压的正方向移动,正常TTX敏感的钠通道的半数激活电压（V1/2）为（-34．38±0．62）mV（n=16）,给予0．1μg／mL的SVHRP后V1/2为（-23．96±0．41）mV（n=8,P〈0．05）,斜坡因子（κ）由正常的4．52±0．52变为3．73±0．08（n=8,P〈0．05）。SVHRP亦能改变电压依赖性钠通道的稳态失活曲线,使其向电位的负方向移动,SVHRP处理前钠通道半数失活电压（V1/2）为（-32．60±1．52）mV,κ为6．73±0．51（n=16）;0．1μg／mL的SVHRP处理后V1/2变为（-50．69±2．55）mV（n=8,P〈0．01）,κ为5．49±0．72（n=8,P〈0．05）。结果提示,SVHRP能抑制电压依赖性钠电流,改变钠通道的动力学特性,抑制其激活,促进其失活,从而影响神经元的兴奋性,这可能是其抗癫痫的机制之一。     

慢性束缚应激大鼠海马脑啡肽mRNA和前强啡肽mRNA 表达及中药复方的影响

目的:研究慢性束缚应激时大鼠海马脑啡肽和前强啡肽mRNA基因表达的变化以及逍遥散、四君子汤、金匮肾气丸三种中药复方对其的影响.方法:用特制束缚架连续束缚7 d与21 d,每天3 h的方法制作大鼠束缚应激模型;以RT-PCR反应,扩增脑啡肽和前强啡肽基因,同时以β-actin作为内对照,用凝胶图像分析系统进行扫描并分析,把目的基因的光密度与内参照条带的光密度进行比较后进行半定量分析.结果:7 d模型组大鼠海马前强啡肽mRNA的表达明显增强(P＜0.01),21 d模型组海马脑啡呔mRNA和前强啡肽mRNA的表达明显增强(P＜0.01);三个复方均能降低海马内前强啡肽mRNA的表达(P＜0.01),逍遥散和四君子汤能降低脑啡呔mRNA的表达(P＜0.01).结论:逍遥散对脑啡呔mRNA前强啡肽mRNA的基因表达的改善作用明显优于金匮肾气丸组.     

海马胆囊收缩素对大鼠癫痫发作的影响及其机制

目的和方法：采用原位杂交技术,观察遗传性听源性癫痫易感大鼠海马内ＣＣＫｍＲＮＡ表达的改变及少我注射ＣＣＫ３及其受体阻断剂对大鼠癫痫发作的影响。结果：（１）癫痫发作大鼠海马内ＣＣＫｍＲＮＡ表达明显增强（Ｐ〈０．０５－０．０１）,但癫痫反复发作的大嫌海马内ＣＣＫｍＲＮＡ表达的较癫痫发作一次大鼠明显减少（Ｐ〈０．０５）,海马ＣＡ主射Ｌ３６５后,ＣＣＫ８压抑癫痫发作的作用消失（Ｐ〈０．０１）。结论：ＣＣＫ     

糖皮质激素对癫痫大鼠海马c-fos表达的影响

用免疫组织化学方法观察了糖皮质激素对马桑内酯致痫大鼠海马c-fos的影响。侧脑室注射马桑内酯2h后。导致动物急性癫痫样发作。海马内出现c-fos的高度表达。单纯向侧脑室注射糖皮质激素100μg以后,动物不出现癫痫行为。海马内也几科无c-fos表达,但先向侧脑室注射糖皮质激素100μg1h,再向侧脑室内注射马桑丙酯2h后,海马内c-fos表达明显减少。除双侧肾上腺一周,再向侧脑室注射马桑内酯2h后,动物癫痫发作更明显,海马内c-fos表达较单纯且马桑内酯致痫动物更强。结果提示：糖皮质激素对马桑内酯致痫有明显的抑制作用,为临床应用糖皮质激素治疗癫痫提供了形态学参考。     

胚胎海马伞移植物对成年大鼠海马胆碱能纤维生长的引导效应

在胚胎和新生的中枢神经系统(CNS)内,发育中的纤维束通道能引导轴突的生长。为了了解发育中的纤维束通道能否引导成年CNS轴突的生长,将胚胎海马伞移植到成年大鼠的海马,两周后,用AChE组织化学方法检查移植物内的胆碱能纤维。结果如下:在胚胎的海马伞移植物内出现大量的胆碱能纤维,但在成年的海马伞移植物内没有宿主的胆碱能纤维长入;如果在移植胚胎海马伞的同时,切断宿主的海马伞-穹窿通路,则在胚胎移植物和宿主海马内均无胆碱能纤维;将胚胎海马伞作成悬浮液进行移植,在移植部位,仅能看到少数长的胆碱能纤维;但是若把胚胎海马伞的组织碎片粘附在硝化纤维素滤纸条周围,再移植到成年大鼠海马内,来自宿主海马的大量胆碱能纤维被吸引围绕着滤纸条并沿其表面生长。结果似乎表明:胚胎海马伞或胚胎海马伞碎片都能有效引导宿主海马胆碱能纤维的生长。因此,胚胎海马伞和其它发育中的CNS纤维束通道可能是引导成年CNS轴突生长的良好天然基质。     

海马内生长抑素与γ－氨基丁酸在大鼠穿梭箱主动回避反应中的作用

本实验以大鼠穿梭箱主动回避反应（ＡＡＲ）的习得和消退为学习记忆的指标,研究了海马内生长抑素（ＳＳ）和γ－氨基丁酸（ＧＡＢＡ）在学习记忆中的作用。结果如下：（１）经训练而建立了ＡＡＲ的大鼠,其海马内ＳＳ较对照组显著增高,而海马内ＧＡＢＡ含量却明显降低;（２）海马内注入ＳＳ的耗竭剂半胱胺（Ｃｙｓ,２０ｇ／Ｌ）使大鼠ＡＡＲ的习得受到明显损害,ＡＡＲ的消退显著加速,海马内ＳＳ明显降低,而ＧＡＢＡ含量却显著升高;（３）海马内注入ＧＡＢＡ（２００ｇ／Ｌ）使大鼠ＡＡＲ的消退显著加速的同时,其海马内ＳＳ含量亦显著降低。由此表明,海马内ＳＳ可能有促进学习记忆的作用,而海马内ＧＡＢＡ升高则有相反的效应;二者在海马调控学习记忆过程中具有重要作用。     

一次给予红藻氨酸对大鼠脑内细胞信息传递通路及癫痫敏感性的作用

本实验给大鼠皮下注射红藻氨酸（ＫＡ,１０ｍｇ／ｋｇ）诱发癫痫活动,７２ｄ后进行深部前梨状皮层（ｄｅｅｐ ｐｒｅｐｙｒｉｆｏｒｍ ｃｏｒｔｅｘ,ＤＰＣ）电点燃刺激（ｋｉｎｄｌｉｎｇ）,该组动物点燃形成加速,或再给予同样剂量ＫＡ,其再次诱发的癫痫活动明显加重。ｃ－Ｆｏｓ免疫反应活性（ｃ－Ｆｏｓ－ｉｒ）作为神经元兴奋的标志,标绘再次诱发癫痫活动时大鼠脑内细胞信息传递通路,并与对照组,即７２ｄ前给予生理盐     

全蝎抗癫痫发作敏感性的阿片肽机制

红藻氨酸（ＫａｉｎｉｃＡｃｉｄ,ＫＡ）癫痫模型,探讨全蝎抗癫痫发作敏感性长期增强的阿片肽机制。本实验选用ＳＤ大鼠,随机分为两组,分别给予生理盐水（ＮＳ）和全蝎粗提液灌胃１０天,１０天后两组均分别颈部皮下注射ＮＳ和惊厥剂量（１０ｍｇ／ｋｇ）的ＫＡ,再分别继续给予ＮＳ和全蝎粗提液灌胃１０天后,用阈下剂量（５ｍｇ／ｋｇ）的ＫＡ检测癫痫敏感性;用Ｆｏｓ免疫反应活性检测海马结构中神经元的兴奋性;用原位杂交技术检测海马脑啡肽原（ＰＥＮＫ）ｍＲＮＡ的动态变化过程。结果显示：实验对照组大鼠癫痫行为敏感性明显增强,脑内癫痫敏感性相关脑区海马齿状回颗粒细胞（ＤＧＣｓ）ｃ－Ｆｏｓ免疫反应阳性细胞数目明显增加,同时海马内具有致癫痫作用的脑啡肽原（ＰＥＮＫ）ｍＲＮＡ表达也明显增加;而实验组动物未见上述改变。本工作证实中药全蝎有明显降低海马神经元兴奋性及抗癫痫发作敏感性形成的作用,并提示这很可能与其抑制ＰＥＮＫｍＲＮＡ表达增加有关     

脑电超慢涨落图技术在癫痫研究中的应用

目的：观察脑内多种神经递质对癫痫发作的影响。方法：以癫痫患者和ＳＤ大鼠为实验对象,用脑功能检测的最新脑电超电涨落图分析仪（ｅｎｃｅｐｈａｌｏｆｌｕｃｔｕｏｇｒａｍ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ,ＥＴ）长时程采集脑电信号,提取在脑电中载有脑神经递质调节系统的震荡信息（即Ｓ谱线）,分析癫痫发作时的脑神经递质的变化。结果：患儿癫痫发作时,Ｓ谱线中Ｓ２（谷氨酸）增高;Ｓ１（γ－氨基丁酸）降低,造成Ｓ１＜Ｓ２。Ｓ５     

大鼠中脑腹侧被盖区在睡眠－觉醒调节中的作用

本实验在３１只清醒自由行动的雄性ＳＤ大鼠进行。结果如下：（１）双侧中脑腹侧被盖区（ＶＴＡ）微量注射３．３ｎｍｏｌ溴隐亭后第２—３ｈ觉醒时间显著增加（Ｐ＜０．０１）;６．６ｎｍｏｌ溴隐亭有类似效果;０．６６和１．３３ｎｍｏｌ溴隐亭无明显作用。（２）同样方法ＶＴＡ微量注射２ｎｍｏｌ和４ｎｍｏｌＳＣＨ２３３９０后第２—３ｈ觉醒时间明显减少（分别为Ｐ＜０．０１和Ｐ＜０．０５）,但注射３．４ｎｍｏｌ舒必利则无效。（３）红藻氨酸（０．３μｇ）双侧ＶＴＡ注后一周,大鼠白天觉醒减少,夜间无明显变化。以上结果表明溴隐亭微量注射到ＶＴＡ可能通过Ｄ１受体使多巴胺神经元活动增加而产生致觉醒作用;另外ＶＴＡ中ＤＡ神经元对于维持日间的觉醒可能有紧张性作用。