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从土壤中分离出一株卡那霉素链霉菌噬菌体SKJl,该噬菌体在卡那霉素链霉菌及林肯链霉菌菌苔上产生混浊的噬菌斑。从噬斑中长出的菌落后代对SKJl噬菌体的感染产生了抗性。单株传代未见自发释放游离噬菌体。紫外线照射亦未发现诱导现象。抗性菌株经10ug/ml丝裂霉素C处理后,其中一株能释放出约5.9×103pfu/ml游离噬菌体颗粒,推测这些抗性菌株可能是溶源性菌株。菌落原位杂交实验证实抗性菌株的DNA与SKJl噬菌体DNA有同源性,说明这些抗性菌株已被SKjL噬菌体溶源化,从而确证SKJl噬菌体为一温和性噬菌体。 相似文献
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变铅青链霉菌ZX1,是由变铅青链霉菌JT46经NTG诱变后产生的一株修饰基因突变株,与其亲本JT46相比,ZX1除了与DNA降解有关的基因发生了突变(Dnd-,即该突变株的DNA在含有Fe2+的缓冲液中电泳不受到降解,而野生型变铅青链霉菌在同样条件下则遭到降解)以外,对噬菌体 HAU3的抗性也随之消失,这项特征主要表现在噬菌斑大小和成斑单位(效价)上的显著变化。研究结果表明,噬菌体 HAU3以同等的频率吸附野生型变铅青链霉菌及其突变菌株ZX1,从 HAU3基因组中没有克隆到被变铅青链霉菌识别的特异性靶位点;噬菌体HAU3的DNA也可以转染野生型变铅青链霉菌原生质,但其释放的噬菌体粒子只能感染突变菌株ZX1,而不能感染野生型变铅青链霉菌。噬菌体HAU3在突变株ZX1中的繁殖遵循一步生长曲线,单菌释放量大约为100,而 HAU3感染野生型变铅青链霉菌后,则检测不到噬菌体的释放。 相似文献
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变铅青链霉菌对噬菌体ψHAU3抗性与异常修饰之间的相互关系 总被引:1,自引:0,他引:1
变铅青链霉菌异常修饰突发菌株ZX1同时丧失了对噬菌体ψHAU3的抗性。遗传学杂交结果揭示,DNA降解和对ψHAU3抗性这两种表型从不发生分离。以ZX1为宿主和链霉菌低拷贝质粒SCP2衍生的载体pIJ922为载体,构建了变铅青链霉菌JT46的基因组文库。在8000多个转化子中获得了一个能使ZX1对ψHAU3显示抗性的杂合质粒,命名为pIJ8310。它除了含有完整的pIJ922外,还携带了大约11kb 相似文献
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从成都制药四厂卡那霉素链霉菌异常发酵液中分离出四株噬菌体φSK_1,φSK_2、φSK_3和φSK_4经形态特征比较和一些生物学性质的研究,证明它们彼此存在着差异,属同一血清型的不同噬菌体株,与国内外已知的某些卡那霉素链霉菌噬菌体也不相同。 相似文献
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变铅青链霉菌异常修饰突变菌株ZXl同时丧失了对噬菌体HAU3的抗性,遗传学杂交结果揭示,DNA降解和对HAU3抗性这两种表型从不发生分离。以ZXl为宿主和链霉菌低拷贝质粒SCP2衍生的载体pIJ922为载体,构建了变铅青链霉菌JT46的基因组文库。在8000多个转化子中获得了一个能使ZX1对HAU3显示抗性的杂合质粒,命名为pIJ8310。它除了含有完整的pIJ922外,还携带了大约11kb的外源片段。Southern杂交证实,这个外源片段来源于JT46,但在ZX1中完全消失。利用转座子Tn4560对该克隆进行诱变定位,获得了中断噬菌体抗性基因表达的衍生质粒,并已证实Tn4560插入在一个2.5kb的BdmHI一EcoRI片段上。 相似文献
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柱晶白霉素产生菌──北里链霉菌(Strepomyces.Kitasatonesis),通过紫外线处理和高浓度磷酸盐平板上选择分离到突变株UDP1-2,在正常发酵培养基条件下摇瓶发酵柱晶白霉素超产可达18.6%。而且变株的菌落形态与亲本菌株差异较大。 相似文献
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用启动子探针质粒pIJ486从麦迪霉素产生菌(S.mycarofaciens)中克隆到1个具启动功能的HindIII-HindIII2.0kb片段,含该片段的重组质粒p4H2转化子在MM基本培养基上对卡那霉素(Km)抗性可达500μg/ml以上。亚克隆缺失分析结果表明,该片段不同部分的缺失对启动活性有不同程度的影响,说明它具有较复杂的转录调控机制。DNA序列分析结果显示,该片段含有1984个核苷酸,其G+C%为47.7%,不存在典型的链霉菌的可读框;进一步的分析发现,其650bp、1150bp和1500bp区域分别与麦迪霉素酮基还原酶基因等链霉菌基因的启动子序列具有同源性;在520-570bp区域与大肠杆菌tRNA基因上游激活序列(UAS)有较好的同源性,提示链霉菌中可能存在可增强基因转录的DNA元件。 相似文献
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抗人AFP抗体噬菌体呈现文库的构建筛选及基因序列测定 总被引:3,自引:0,他引:3
从人AFP免疫小鼠脾细胞mRNA中扩增出全套抗体V区基因并随机拼接为ScFv,构建全套ScFv基因噬菌体呈现文库,经两轮panning筛选富集,一次从94个单个重组噬菌体克隆中筛选到14个具有AFP结合活性的克隆,测定两个阳性克隆中ScFv基因的核苷酸序列,获得一个VH基因和两个VK基因,其基因序列分别与鼠Ig VHjJ558,VK-OX1和VK4/5家族同源性最高,推导出的氨基酸序列中均含有抗体 相似文献
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研究了苎麻疫霉菌株JS-5自交S1代单卵孢株的菌落形态和生长速率在其单游动孢子无性系后代的遗传与变异。结果表明,亲本菌株JS-5的菌落形态和生长速率在连续4代单游动孢子无性系后代稳定遗传,而该菌株的自交S1代的约2/3单卵孢株的上述性状在其单孢无性后代中发生分离,且上述性状的分离在无性单孢后代中至少可连续保持3 ̄4代。本研究结果提示,苎麻疫霉有性生殖导致上述性状的变异,除有性生殖过程中的基因重组外 相似文献
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在万古霉素的生产过程中,发现菌丝体突然自溶,经噬菌斑检查,证明是噬菌体侵染所引起的。用噬菌体或噬菌体、紫外线复合处理敏感菌株东方链霉菌(Streptomycesortentalis) 3746,得到抗噬菌体突变株72-4-863、72-5-1077和72-6-1306,产万古霉素的单位也较敏感株3746提高500一1000单位/毫升。 相似文献
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杂合质粒pIJ8310是链霉菌低拷贝质粒pIJ9221携带了10.8kb来自变铅青链霉菌JT46菌株,编码对噬菌体ΦHAU3抗性的DNA片段。已知Tn4560插到该克隆中3kb的EcoRI或3.3kb的BamHI片段(这两个片段之间有2.5kb的重叠区)上,中断了ΦHAU3抗性基因的表达。已将3.0kb的BcoAI片段分别以两种不同的取向克隆到pBluescriptSK(+)上。核苷酸序列分析揭示出一个1.3kb的ORF的存在,其所编码的478个氨基酸组成的蛋白与λ噬菌体的ea59基因所编码的氨基酸序列显示了高度的同源性,其氨基酸序列的同一性高达37%,相似性达58%,而λ噬菌体的ea59基因是编码赖ATP和单键DNA的核酸内切酶I的,该区域与λ的复制无关。此外,这段具有高度同源性的DNA区域的G+C%只有60%,低于变铅青霉菌DNAG+C%的平均值(74%)。 相似文献
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《生物技术通讯》2016,(6)
目的:利用Red重组系统敲除肠出血性大肠杆菌O157∶H7前噬菌体片段CP-933Y,进而构建CP-933Y缺失突变株。方法:以肠出血性大肠杆菌O157∶H7菌株为模板,加入酶切位点PCR扩增前噬菌体CP-933Y上、下游各600 bp的同源臂序列;酶切后分别连接到p UC19-kan质粒的卡那霉素(包含FRT位点)抗性基因两侧,构建中间是卡那霉素抗性基因标记含有目的基因上、下游同源序列的线性片段;导入含有p KD46质粒的O157∶H7菌株中,利用Red编码的同源重组酶使该片段与目的基因上、下游发生同源重组,卡那霉素抗性基因置换菌株中CP-933Y前噬菌体片段,最后导入p CP20质粒去除卡那霉素抗性标记基因。结果:经PCR及测序验证,O157∶H7菌株中前噬菌体片段CP-933Y被敲除,敲除株与野生株具有相似的生长曲线。结论:构建了大肠杆菌O157∶H7前噬菌体CP-933Y缺失株,为进一步研究前噬菌体CP-933Y的功能奠定了基础。 相似文献
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在含克林达霉素10,ug/ml(无乙酸钠)的Balch 1号培养基中重复转种后,从甲烷短杆菌Hx菌株中选择出稳定的抗克林述霉素的自然突变株。在含克林达霉素的斜面上,抗性突变株细胞连成长链。在含克林述霉素的滚管中,抗性菌落的颤色为深灰色。在有和无克林达霉素的培养基中培养21天后,抗性突变株的甲烷产量相差不大。突变株对红霉素和卡那霉素呈交叉抗性。 相似文献
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在红霉素生产过程中,曾多次出现噬菌体的感染。我们从被感染的发酵自溶液中分离出7株噬菌体,并用电子显微镜观察了P1、P3、P6的形态。以不同类型的噬菌体选育出抗噬菌体菌株,其中一些抗性菌株的抗菌素产量,比敏感的出发菌株高,曾先后用于生产。用噬菌体处理得到的抗性菌株的产量,比用物理或化学诱变因素处理得到的菌株提高幅度大。 相似文献
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噬菌体ψHAU3的cos位点及其与寄主相互作用的功能位点attP和attB的… 总被引:1,自引:0,他引:1
ψHAU3是寄主范围很广的放线菌噬菌体。Southern杂交实验表明,ψHAU3可以整合到吸水链霉菌应城变种10-22和变铅青链霉菌66的突变体ZX1的染色体中,形成溶原,其溶原菌自发释放ψHAU3,不受热激和紫外线照射的诱导。通过比较ψHAU3衍生噬粒PIJ8300的DNA酶切片段的中热前、后电泳带谱的区别,将ψHAU3的cos位点在PIJ8300的图谱上得到了定位。还利用Southern杂交的 相似文献
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以质粒pIJ486为载体,将来源于质粒pHT1的肿瘤坏死坏因子(TNF-a)cDNA克隆至变铅青链霉菌,以新霉素(30μg/ml)为选择标记,获得了数百转化子,实验表明No.7转化子s.lividans TK54-HT所含重组质粒pIJT7已克隆有TNFcDNA。L929细胞毒实验结果表明该转化子TNF表达量可达10^8活性单位/升以上,中和实验确证其表达产物为人TNF-a,SDS-PAGE表明克 相似文献