几种担子菌胞外漆酶同工酶谱的研究

从猴头(Hericium erinaceus)、亚侧耳(Hohenbuehelia serotina)、毛柄金钱菌(Co-llybia velutipes)、多脂鳞伞(Pholiota adiposa)、香菇(Lentinus edodes)、黑木耳(Auriculariaauricula)、草菇(Volvaria volpacea)二孢蘑菇(Agaricus bisporus)和紫孢侧耳(Pleurotussapidus)、侧耳(Pleurotus ostreatus)风尾菇(P.sajor-caju)、金顶侧耳(P.citrinopileatus)、鲍鱼菇(P.cystidiosus)、佛罗里达侧耳(P.florida)、爪哇漏斗状侧耳(P.sajor-caju var.javanicus)商品化菌种的培养滤液里所得到的胞外漆酶(LC),采用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦盘状电泳方法,分析比较了它们的胞外漆酶同工酶。经多批次比较试验,获得了侧耳属七个种和八个不同属间各自恒定的漆酶同工酶谱。在这些酶谱中,分别包含了 A 组(pH3—5)和 B 组(pH5—8)的谱带。而且,所有菌种间漆酶带的等电点值(pI)各有异同。没有测定菌种间各漆酶带含量差别。讨论了漆酶同工酶谱用于分类研究的可能性。     

野油菜黄单胞菌分泌组双向电泳样品制备方法的建立

野油菜黄单胞菌野油菜致病变种(Xanthomonas campestris pv.campestris,Xcc)是十字花科植物黑腐病的病原细菌。我们建立了Xcc的蛋白质组学研究平台,用于分离、鉴定该菌的致病相关蛋白。为了减少胞外多糖(exopolysaccharide,EPS)对蛋白材料质量的影响,我们构建了EPS缺陷的Xcc8004ΔgumB突变体。本研究以Xcc8004ΔgumB出发菌株,用诱导培养液培养,取细胞上清通过超滤浓缩得到蛋白质粗提物,分别采用丙酮沉淀法、试剂盒纯化法和丙酮沉淀-试剂盒联用法来纯化蛋白质粗提物,通过比较双向电泳的结果优选最佳的样品制备方法。结果证明丙酮沉淀-试剂盒联用法较为理想,所得双向电泳图片清晰,分辨率高。因此,此方法可以用于制备野油菜黄单胞菌分泌组双向电泳样品,并可以满足进一步研究的需要。     

电泳滴定曲线及其应用

电泳滴定曲线法是一种双向电泳法,第一向等电聚焦,以获得固定的pH梯度;然后加样,进行第二向电泳,得到的电泳滴定曲线图,直接反映了在各种pH下,各蛋白质组分之间在迁移率上的差异。该法在选择蛋白质分离纯化的最佳条件;研究蛋白质的突变;研究分子间相互作用等领域,已表现出广阔的应用前景。     

一个用于黄单胞菌核开关筛选鉴定的GUS报告载体的构建

核开关(riboswitch)是存在于信使RNA(messenger RNA, mRNA)分子的5′非翻译区(5′-untranslated region, 5′UTR)的一段具有调控功能的RNA片段,它通过与特定的代谢物分子直接结合来调控所在mRNA自身的表达。核开关广泛存在于细菌中,在调控细菌的基础代谢以及致病等生理过程中发挥非常重要的作用。尽管目前在大肠杆菌(Escherichia coli)等模式细菌中已经鉴定了许多核开关,然而,至今在重要的植物病原细菌黄单胞菌属(Xanthomonas)细菌中只鉴定了1个核开关。为了实现在全基因组水平上对黄单胞菌的核开关进行高通量筛选鉴定,本研究设计和构建了1个β-葡萄糖苷酸酶(β-glucuronidase, GUS)报告载体pL3-SD⁺gusA。该载体既适用于在黄单胞菌属细菌中对候选的核开关进行验证,也可以通过构建基因组DNA表达文库而实现对黄单胞菌核开关的高通量筛选鉴定。     

一种简便的薄层等电聚焦分析电泳装置

薄层等电聚焦分析电泳是近年来发展起来的一种高分辨率的蛋白质分析技术。等电聚焦是利用两性载体电解质,在外加电场的作用下,形成稳定的pH梯度,使得蛋白质、酶及多肽按其各自不同的等电点聚焦在相应的pH位置上,以便达到分离的目的。薄层等电聚焦分析电泳可以在一块薄层胶片上分析多个样品,操作方便、分辨率高,所以被人们广泛地采用。本文介绍一种简便的薄层等电聚焦分析电泳装置,它适用于我们现有的一般实验室条件,勿需进口成套贵重设备,同样能得到满意的分析结果。 1.电泳装置的配备我们自制了简易的电极架(图1)。上架用     

一种新的细菌多糖——SMI多糖

细菌多糖产生菌种类很多如黄单胞菌、产碱杆菌、明串珠菌、贝耶林克氏菌、假单胞菌以及其他土壤细菌等等,其中黄单胞菌产生的多糖黄原胶(xanthan),已工业化生产,在工农业上已得到广泛应用。目前,开辟新的胞外多糖来源也引起科学工作者的重视。     

黄单胞菌属的分类研究进展

引起植物病害的细菌约有300多种,广义的细菌是原核生物界中引起各种植物病害的一类最大的群体。黄单胞菌属的所有种都是植物病原细菌,引起植物病害症状多为叶斑、叶枯,少数为萎蔫、溃疡。黄单胞菌属（Xanthomonas）属于薄壁菌门、假单胞菌科,菌体短杯状,0．4－1．0×1．2－3．0μm,根极生鞭毛,严格好气性,革兰氏染色阴性,DNA中的G＋C含量为63－71mol％。细菌的分类地位和分类系统曾有过多次变动,迄今仍不完善。过去,黄单胞菌属的分类单一利用奇主的专化性划分种,即从一株寄主植物上分离到新的黄单胞菌菌株,使定为一个种,由…     

膜翅目昆虫酯酶同工酶的比较研究

用聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳分析了膜翅目七个总科、蜜蜂总科9个属, 蜜蜂属6个种和西方蜜蜂4个宗样品的酯酶同工酶.总科代表之间酶谱的差别大于总科内各属间的差别;各属间的酶谱也有显著差别;而属内各种间的酶谱比较接近, 但每个种都有自己特有的谱型, 彼此易于区分.没有发现宗间有明显差别.本文还在实验的基础上讨论了用电泳酶谱方法作为昆虫分子分类学研究手段的可行性.     

山黧豆叶片蛋白质双向电泳技术的建立

以山黧豆叶片为材料,比较分析了蛋白质的不同提取方法,在此基础上着重于样品制备。对IPG胶条的选择,第一向等电聚焦和第二向SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳的电泳程序及参数、染色方法等相关技术进行了比较和条件优化。结果显示：采用TCA-丙酮沉淀法提取蛋白质,裂解液中加入Tris-base作为蛋白酶抑制剂,等电聚焦电泳时延长低电压的电泳时间（30V、12h,500V、1h,1000V、2h）以促进盐离子泳出的方法对山黧豆叶片蛋白质进行双向电泳,并用考马斯亮蓝和银染复合染色法进行凝胶染色,能够获得蛋白点清晰的双向电泳图谱,说明用优化后的方法建立起的山黧豆叶片蛋白质双向电泳技术,蛋白质样品制备质量好,电泳分辨率高,完全适合于进一步的蛋白质组学研究。     

丁香假单胞菌猕猴桃致病变种的遗传多样性及进化关系

猕猴桃细菌性溃疡病是一种严重威胁猕猴桃生产的毁灭性病害,在世界各大猕猴桃产区发病严重。引起该病的病原菌为丁香假单胞菌猕猴桃致病变种(Pseudomonas syringae pv.Actinidiae,Psa)。综合当前国内外关于该病原菌的相关研究,就其分类地位、遗传多样性及起源进化等方面进行了系统综述。     

电泳滴定曲线的制备方法

电泳滴定曲线法是运用第一向等电聚焦,再进行第二向电泳,反映各pH下,各蛋白质组分之间在迁移率上的差异.该法在选择蛋白质分离纯化的最佳条件、离于交换剂的类型等方面已表现出广阔的应用前景.作者制备了小牛血清白蛋白和羊抗兔IgG血清的电泳滴定曲线,取得满意结果.     

细菌除草剂黄单胞菌反枝苋致病菌的筛选

从杂草反枝苋根际土壤中分离到大量的根际细菌,利用谷氨酰胺合成酶抑制剂模型和蛋白核小球藻筛选模型进行快速、高效的初筛,并结合温室盆栽复筛,筛选出一株具有较强除草活性的细菌野油菜黄单胞菌反枝苋致病变种。温室盆栽试验表明,该黄单胞菌对反枝苋、荠菜等双子叶杂草具有较强的抑制作用。      

rhIGF-1等电点的测定

目的：通过测定rhIGF-1等电点为例,建立一种快速测定蛋白质等电点的方法。方法：采用等电聚焦电泳（isoelectric focusing,IEF）和高效液相色谱（HPLC）连用的方法,主要以7．5％的凝胶浓度、3％的交联度及6％的两性电解质浓度配置凝胶,电泳后的凝胶经凝胶成像系统和HPLE分析确定目的条带及其pI值。结果：rhIGF-1的等电点为pI=8．20,pH梯度曲线线形回归方程为Y=0．0664X＋3．8217,相关系数r达0．9956,说明等电聚焦电泳测定结果准确。     

SDS-PAGE、同工酶等电聚焦和RAPD标记鉴定两系杂交水稻F1种子纯度对比研究

目的：探讨利用种子贮藏蛋白SDS—PAGE电泳、酯酶同工酶超薄等电聚焦电泳和RAPD分子标记鉴定五个两系杂交水稻组合F_1种子纯度的可行性。方法和结果：利用SDS—PAGE电泳技术未能找到所试五个组合各自的父本特征蛋白质带;利用酯酶同工酶超薄等电聚焦电泳技术和RAPD分子标记可找到所试五个组合的父母本特征酶带和RAPD标记,但酯酶同工酶的多态性同时也受种子萌发时间的影响。酯酶同工酶超薄等电聚焦电泳和RAPD分子标记可用于所试五个两系杂交水稻组合F_1种子纯度的鉴定。     

用双相电泳技术分析棉酚对大鼠成熟精子蛋白质组成的影响

本文首次将双相电泳(等电聚焦和SDS电泳)技术应用于对棉酚作用机理的研究。实验结果表明,棉酚能够改变大鼠成熟精子的蛋白质组成;同时也证明,双相电泳这一技术对棉酚的研究是有效的。     

水稻白叶枯病抗性基因Xa21的分子生物学研究进展

由黄单胞杆菌水稻致病变种Xanthomonas oryzae pv.oryzae(Xoo)引起的白叶枯病是水稻重要细菌性病害之一。迄今,已有7个水稻白叶枯病抗性基因被克隆。Xa21是第一个被克隆的白叶枯病抗性基因,因具有广谱抗性而受到广泛的关注。对Xa21的发现、定位及克隆、表达特征、编码产物XA21的生化特性、作用与调控以及XA21介导的免疫反应模式等方面的研究结果进行综述,并对今后的研究方向进行展望。     

嗜麦芽寡养单胞菌胞外蛋白酶功能研究进展

嗜麦芽寡养单胞菌(Stenotrophomonas maltophilia)是广泛分布于自然界的革兰氏阴性杆菌。作为一种新型、与高死亡率相关的条件致病菌,嗜麦芽寡养单胞菌能够导致人类或其他生物感染多种疾病。近年来,越来越多的研究结果显示来自于细菌的胞外蛋白酶是导致宿主发病的关键蛋白质。因此,探究嗜麦芽寡养单胞菌胞外蛋白酶的组成成分和功能将不仅有助于阐明其致病机制,更为今后以其为靶点进行临床治疗奠定基础。本文试图对嗜麦芽寡养单胞菌胞外蛋白酶的性质、功能及其应用进行归纳总结。     

结肠癌蛋白质双向电泳技术的建立

目的:建立结肠癌13cm和24cm非线性分离系统的2-D图谱,分析比较两者的分辨率.方法:提取结肠癌总蛋白,用pH3-10非线性干胶条对样品进行等电聚焦分离,并分别使用13cm和24cm电泳系统进行双向电泳,考马斯亮蓝G250染色,图像分析,比较对比两组2-D图谱,量化分析两种系统的分辨率差异.结果:在等点电3-10,分子量20-170 kD范围内分别分离得到蛋白质斑点873个(13 cm电泳系统)和1349个(24cm电泳系统).对于24cm电泳系统,1 mg蛋白质上样量的电泳图谱清晰,分辨率较好.结论:成功建立了高分辨率、简便易控的结肠癌蛋白质组双向电泳技术平台.     

北京鸭乳酸脱氢酶同工酶的研究 Ⅰ.薄层等电聚焦电泳分离北京鸭LDH同工酶

采用薄层等电聚焦电泳方法,把北京鸭乳酸脱氧酶同工酶区分为11条电泳区带,发现它们是一组等电点十分邻近的、范围在pH 6.0至8.0的中性蛋白质。