从棉铃虫体中提取总RNA的一种有效方法

昆虫组织细胞中含有大量的RNA酶 ,在提取其RNA时 ,防止RNA酶的降解 ,是保证所得RNA片段完整的关键。目前提取动物组织细胞总RNA的方法主要采用“异硫氰酸胍 酚 氯仿抽提”一步法操作 ,但从昆虫组织细胞中提取RNA尚无明确的方法。本实验根据昆虫组织细胞中RNA的分子结合其它蛋白等次生物质的特性不同 ,适当的调整该方法 ,从棉铃虫中提取到了完整、无降解、纯度高的RNA ,适用于Northern杂交和cDNA合成等分子生物学操作     

一种丹参高质量总RNA的提取方法

高质量RNA的获得是开展丹参分子生物学研究的基础。采用异硫氰酸胍(Guanidine Thiocyanate,GT)法、尿素法、CTAB法、苯酚法和热硼酸改良法等五种方法．以丹参组织培养的幼苗为材料,进行丹参RNA的分离试验,发现所采用的几种方法获得的RNA都有不同程度的降解。分析可能是由于丹参中含有大量的多糖以及各种次生代谢成分造成的。在分析现有结果的基础上对GT法进行了改良,在第二次沉淀前附加低浓度乙醇(10％～20％)沉淀20min对于高质量总RNA的获得效果较好。琼脂糖凝胶电泳检测改良后的GT法无论对于组织培养中幼嫩的根、茎、叶还是大田两年生的丹参根、茎、叶和种子均具有很好的RNA分离效果。mRNA电泳检测发现所得mRNA集中分布在500b～3kb之间且质量较高,完全可以满足丹参各种RNA相关的分子生物学实验要求,为丹参RT—PCR、Northern杂交等分子生物学实验提供了良好的基础。     

一种小量提取植物总RNA的有效方法

以水稻、玉米、辣椒为材料 ,摸索出了一套改良的异硫氰酸胍提取植物总RNA的方法 ,该方法简单、快速、纯度高、完整性强 ,方便有效 ,值得推广。     

三七总RNA提取方法的对比研究

比较利用改进的异硫氰酸胍一步法、异硫氰酸胍高盐法、CTAB法和Thomas’RNA提取法等4种方法提取三七根茎2个部位总RNA的可行性。结果表明,改进的异硫氰酸胍一步法和异硫氰酸胍高盐法能有效地抑制酚类物质、多糖及皂苷等次级代谢产物对总RNA的影响,可从三七根茎中获得质量高、完整性好的总RNA。RT—PCR分析显示提取的总RNA具有反转录活性。这2种方法具有快速、简单、有效的特点。     

干种子高质量总RNA的快速提取方法

高效快速提取高质量的种子RNA是种子分子生物学研究的基础。现有的提取方法难以高效快速地从种子中得到高质量的总RNA。本试验有机地将改进SDS法和异硫氰酸胍法相结合,采用改进的酸性SDS提取液、不溶性PVPP(聚乙烯聚吡咯烷酮)阻止酚类氧化、KAc去除多糖、异丙醇沉淀RNA,可以高效地从0.01～0.1g水稻、大豆、蚕豆、芸豆、花生等干种子中提取到高质量总RNA。此法提取的总RNA,能够满足分子生物学研究的要求,可以进行反转录和RT-PCR反应,用于基因表达研究,并为从具相似成分的其他物种干种子提取总RNA提供参考方法。     

非洲菊花瓣总RNA提取方法的改进

利用异硫氰酸胍一步法和植物总RNA提取试剂盒（RNeasy Plant Mini Kit）提取非洲菊（Gerbera hybrida）花瓣中总RNA时存在多糖的干扰。实验中利用异硫氰酸胍一步法提取总RNA,在RNA沉淀后,再次加入适量变性液,冻融2次,再加热至45 ℃使RNA完全溶解;试剂盒提取时,适当延长各提取步骤的离心时间,并增加DEPC H2O溶解RNA的时间。通过以上操作方法的改进可排除多糖的干扰,得到高质量的总RNA。为进一步利用Northern杂交技术研究非洲菊中花色素苷基因的表达,进行花色改良提供了方便、有效的实验手段。     

斑马鱼总RNA提取和纯化

采取异硫氰酸胍法从斑马鱼的3个样品中提取和纯化RNA,结果表明,RNAA260分别为0、587、0．719、0．151.A260/A280比值分别为1．89、1．92、1．82。电泳条带也清晰可见,可以用于进一步的分子生物学研究。     

介绍一种简便的RNA分离制备方法

用酸性异硫氰酸胍-苯酚-氯仿混合物,从人外周血白细胞、组织培养的细胞株及人胚组织中分离制备总RNA,所得产品纯度高,未降解,方法简便,可以同时操作较多的样品。此法确是一种较好的RNA分离制备方法,值得推广。     

几种提取RNA的方法

以肝脏组织和NDV感染的鸡胚尿囊液为例,简单介绍了几种提取细胞或组织液中总RNA及mRNA的方法－SOD－蛋白酶K法、异硫氰酸胍法、loigo(dT）纤维素亲和层析法。SDS－蛋白酶K法提取RNA经济可靠,但纯度稍低;异硫氰酸胍法适于提取细胞中的总RNA,纯度较高;利用ligo(dT)能与mRNA poly（A^ )尾结合的特性提取组织细胞中的mRNA.     

改良异硫氰酸胍法提取玛咖(Maca)叶片中总RNA研究

为了获得质量较高的玛咖总RNA,对其总RNA的提取进行了研究。以玛咖无菌苗叶片为材料,通过改良的异硫氰酸胍法提取其总RNA。结果:所提取的总RNA纯度高、完整性好,电泳条带清晰,OD260/OD280值达到1.90±0.03,总RNA的得率达到252.57±1.12μg/g。表明改良的异硫氰酸胍法适合于玛咖叶片中RNA的提取,所提取的总RNA纯度高、完整性好,为进一步的玛咖分子生物学研究打下良好基础。     

一种高效提取棉花RNA的改良方法

与其他植物相比,棉花组织中含有较多的酚类、萜类和多糖等次生代谢物,这些物质严重影响棉花细胞中RNA的分离。针对棉花富含次生代谢物的特点,同时简化操作步骤,摸索出一种高效提取棉花RNA的方法,该方法具有提取RNA完整性好、纯度高和操作简单等特点,可适用于提取棉花等多糖多酚类植物的RNA。     

一种快速、高效的橡胶树胶乳总RNA提取方法

胶乳是橡胶树（Hevea brasiliensis）乳管中特殊的细胞质,主要由橡胶粒子、黄色体、F-W粒子和普通细胞质成分构成,其中橡胶粒子占20％-40％,蛋白含量高达1％-2％。由于高比例橡胶粒子和蛋白质的干扰,目前使用的胶乳RNA提取方法都具有步骤繁琐、胶乳需求量大、操作技巧性强不易掌握等缺点。为快速、高效地获取高质量的胶乳RNA,我们在现有方法的基础上摸索出一套步骤简单、容易操作、快速、高效提取橡胶树胶乳总RNA的简易方法,获得了较好的实验效果。紫外分光光度计、RT-PCR和RACE分析结果表明,使用该方法提取的胶乳RNA质量完全能够满足相应的分子操作,但所需时间仅为目前常用方法的50％,RNA获得率提高了2-3倍,操作难度大大降低。     

石斛总RNA提取方法的研究

采用TRIZOL法、异硫氰酸胍法、Tris-硼酸法和改良的RNA提取方法提取石斛的总RNA,并通过凝胶电泳、紫外分光光度法检测提取的RNA样品的品质。研究结果表明:改良的RNA提取方法提取的RNA具有28S rRNA和18S rRNA两条清晰的条带,且无降解。OD260nm/OD280nm接近2.0,具有较高的纯度。其它三种方法获得的RNA品质较差,有降解和弥散现象。将改良的RNA提取方法提取的RNA逆转录成cDNA,经RAPD扩增,出现清晰的条带,进一步证明改良的RNA提取方法提取的RNA具有很高的纯度,可以满足进一步分子生物学研究的要求。     

一种提取小鼠表皮总RNA的新方法

目的:建立一种从小鼠表皮组织提取高质量RNA的方法。方法:用热击法分离小鼠表皮,用TRIzol法提取RNA,用紫外分光光度计测定RNA的产率和纯度,用琼脂糖电泳和RT-PCR检测RNA的质量和完整性。结果:采用新方法提取的小鼠表皮总RNA,其D260nm/D280nm值为1.8～2.0,大于1.5,且RNA产率高于100μg/g;琼脂糖电泳出现5S、18S和28S等3条清晰的rRNA条带,而且28SrRNA条带的亮度约为18S的2倍;用新方法制备的总RNA可成功地用于RT-PCR实验。结论:采用热击法分离表皮并结合TRIzol法可提取到高质量、完整性好的小鼠表皮总RNA,并能用于相关的分子生物学实验。     

野生稻颖果总RNA提取方法研究

目的:比较以确定适用于野生稻总 RNA 提取的方法.方法:用改良的异硫氰酸胍法、TRIZOL 法、SDS 法和 CrAB 法分别提取云南 3 种野生稻和栽培稻滇超 6 号在灌浆期颖果的总 RNA.结果:SDS法能够提取的普通野生稻和疣粒野生稻的总 RNA 的纯度高,其A260/A260 介于1.9938～1.9267;而 TRIZOL 法只适用于栽培稻滇超 6 号,CTAB 法对于疣粒野生稻和药用野生稻提取效果一般,电泳条带不很清晰,其A260/A280 介于1.8243～1.6928;而新建立的改良的异硫氰酸胍法都能提取完整性好、高得率(浓度介于0.9358～1.2008μg/μl)和高纯度的 RNA(A260/A280 大于1.8),电泳 28S rRNA 和 18S rRNA 条带清晰,且该方法操作简单、耗时少、效率高.结论:改良的异硫氰酸胍法适合于野生稻颖果总 RNA 的提取,提取的总 RNA 完整性好、得率高.     

A Method for Isolation of Total RNA from Fruit Tissues of Banana

We describe a rapid and efficient method for isolation of total RNA from banana fruit tissues. The RNA was extracted with a high ionic strength buffer at room temperature. The proteins, genomic DNA and secondary metabolites in the extract were then removed by precipitation with pre-cooled potassium acetate and repeated phenol/chloroform/isoamyl alcohol extractions. The RNA was recovered by ethanol precipitation. It was relatively free of ribonucleases and was suitable for RT-PCR and northern blot analysis. The procedure can be completed in less than 4 hours.     

一种快速的胚胎组织总RNA的提取方法

简要介绍一种改进的提取人体器官组织总RNA的方法,该方法具有费用低,快速简便,重复性好的优点,提取的RNA无DNA等污染物,完全能满足基因表达研究的需要。     

仿刺参体壁总RNA提取方法的建立

目的:通过对TRIzol一步法进行改进,建立一种从富含胶原蛋白、多糖及色素的仿刺参体壁提取总RNA的有效方法。方法:样品在液氮中研磨并用TRIzol匀浆后再进行抽提;对TRIzol一步法提取的总RNA进行DNaseⅠ消化和酚氯仿抽提,用2.5mol/L的醋酸钾沉淀,并加入适量糖原(10mg/mL)与RNA共沉淀。结果:琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度法以及RT-PCR检测结果表明,改进的方法能够有效去除基因组DNA、蛋白、多糖及色素的污染,RNA的产率提高。结论:制备的总RNA纯度高,完整性好,能够满足mRNA差异显示RT-PCR等分子生物学研究的要求,是一种提取仿刺参体壁及其他富含黏多糖、胶原蛋白和色素的动物组织总RNA的有效方法。     

一种有效的花瓣总RNA的提取方法

利用CTAB法以富含花青素类物质的紫蓝色花瓣为材料提取总RNA,经紫外光谱分析A260/A280比值为1.9~2.0,A260/A230比值约为2.0;电泳检测到了28S、18S和5S rRNA清晰的条带;通过RT-PCR扩增出了目的基因的cDNA片段,说明分离的总RNA能去除色素干扰,纯度和反转录活性较高符合RNA相关实验的要求,是一种经济、有效的花瓣总RNA的提取方法。