大黄素升高豚鼠结肠带细胞[Ca~(2+)]_i的特征和GDP的抑制作用

利用Fluo-3荧光探针检测细胞内自由Ca^2 浓度([Ca^2 ]i),研究了大黄素升高豚鼠结肠带细胞[Ca^2 ]i是量－效关系和动态变化特征,及GDP和胞外Ca^2 浓度对其的影响。较低浓度大黄素随药物浓度增加使[Ca^2 ]i显著升高,更高浓度大黄素有超最大抑制效应,GDP对大黄不升高细胞[Ca^2 ]i的抑制作用随其浓度增加而增强,GDP和胞外Ca^2 浓度影响大黄素诱发的[Ca^2 ]i动态变化的结果表明：GDP使[Ca^2 ]i峰消失,胞外无Ca^2 导致[Ca^2 ]i随时间显著下降,大黄素升高[Ca^2 ]i作用趋向消失。     

大黄素影响巨噬细胞升高[Ca~(2+)]_i和释放TNF-a的作用特征

为了研究大黄素(emodin)对正常的和细菌脂多糖(LPS)刺激的大鼠腹腔巨噬细胞(PM准)释放肿瘤坏死因子琢(TNF-琢)和升高[Ca2+]i的影响,应用L929细胞系和MTT法检测TNF-琢量,同时用激光共焦扫描显微术检测单细胞[Ca2+]i变化动力学。结果显示大黄素能轻度促进正常PM准释放TNF-琢,并发现大黄素诱发PM准[Ca2+]i变化呈振荡波模式。大黄素显著抑制LPS刺激PM准过度释放TNF-琢和升高[Ca2+]i,10-5mol/L大黄素抑制了10mg/LLPS刺激的TNF-琢峰值的50%和[Ca2+]i峰值的68%。LPS诱发PM准[Ca2+]i变化呈现高幅值的“平台期”,大黄素使之转变为低幅值的波动变化。以上结果说明,大黄素对PM准释放TNF-琢和升高[Ca2+]i表现出的双向调节作用之间有一定的相关性,大黄素对LPS诱发的[Ca2+]i升高的调制,可能是抑制LPS刺激PM准释放TNF-琢的信号传导通路中的重要环节。     

白介素-2对心肌细胞[Ca~(2 )]_i的作用及其信号转导途径

为研究白介素 2 (interleukin 2 ,IL 2 )对心肌细胞内钙浓度 ([Ca2 ]i)的影响及其信号转导途径 ,实验采用酶解法分离成年大鼠心室肌细胞 ,以Fura 2 /AM为钙探针 ,用细胞内双波长钙荧光系统检测细胞 [Ca2 ]i 的变化。结果发现 :(1)IL 2 (0 5～ 2 0 0U/ml)浓度依赖性地降低单个心室肌细胞内钙瞬态 ,IL 2 (2 0 0U/ml)对咖啡因诱导的肌浆网内储钙的释放无影响 ;(2 )纳洛酮 (naloxone ,Nal) (10 -8mol/L)和nor binaltorphimine (nor BNI,10 -8mol/L)可阻断IL 2对心肌细胞钙瞬态的作用 ,而纳曲吲哚 (naltrindole ,NTI) (10 -6mol/L)不能阻断此作用 ;(3)κ阿片受体激动剂U5 0 488H (10 -6mol/L)降低心肌细胞钙瞬态 ,nor BNI (10 -8mol/L)可阻断此作用 ;(4 ) 5mg/L百日咳毒素 (PTX)预处理可取消IL 2降低心肌细胞钙瞬态的作用 ,而酪氨酸激酶抑制剂genistein (10 -4 mol/L)不能取消IL 2的作用 ;(5 )U7312 2预处理可阻断IL 2的作用。研究结果表明 ,IL 2降低心肌细胞钙瞬态的作用 ,是通过心肌细胞上κ阿片受体介导的 ,其下游途径包括PTX敏感的G蛋白和磷脂酶C。     

衰老性记忆障碍与脑突触体内游离[Ca~(2 )]_i的相关性

采用行为观察和生化检测相结合的方法 ,在过去工作的基础上 ,研究了 12月龄和 18月龄小鼠学习记忆能力的变化和 18月龄小鼠四个脑区 (海马、大脑皮层、四叠体和小脑 )突触体内 [Ca2 ]i 的水平 ,同时还比较了老年记忆保持良好组与记忆障碍组小鼠的脑钙水平。结果表明 ,随着年龄的增长 ,小鼠的学习记忆能力显著下降 ,上述脑区 (除大脑皮层外 )突触内 [Ca2 ]i 均明显升高 ,其中老年记忆障碍小鼠脑钙水平升高最为显著。提示 ,小鼠衰老性记忆障碍可能与其脑突触体内 [Ca2 ]i 的超载有关。     

低氧条件下大脑皮层微血管平滑肌细胞内皮细胞中[Ca~(2 )]_i变化的研究

目的和方法：本研究采用离子探针Ｆｕｒａ２／ＡＭ 结合计算机图象分析技术,并通过施加ＮＯ合酶抑制剂ＬＮＮＡ和ＮＯ的作用靶———鸟苷酸环化酶（ＧＣ）的抑制剂美兰（Ｍｅｔｈｙｌｅｎｅ Ｂｌｕｅ;ＭＢ）,观察经培养的大鼠大脑皮层微血管内皮细胞和平滑肌细胞中的［Ｃａ２＋］ｉ 在低氧作用后的变化以及与有关血管舒张因子ＮＯ和ｃＧＭＰ之间的关系。结果：低氧时大脑微血管内皮细胞和平滑肌细胞内的Ｃａ２＋ 浓度有所下降,变化幅度的大小与低氧的程度及低氧作用的时间有关,且可以被ＬＮＮＡ和ＭＢ所抑制。结论：低氧时大脑微血管的舒张反应与ＮＯ的产生有关,ＮＯ通过细胞内的多种机制,最终使得胞内Ｃａ２＋ 下降而导致血管舒张     

KATP通道活性对豚鼠结肠带平滑肌细胞电和收缩活动的作用

本文应用平滑肌电活动测量和张力测量技术,利用已知的ＫＡＴＰ通道特异性开放剂（ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ）和阻断剂（ｇｌｙｂｅｎｃｌａｍｉｄｅ）,研究ＫＡＴＰ通道对豚鼠结肠带平滑肌细胞电和收缩活动的影响。结果表明：１．ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ通过使膜静息电位超极化抑制平滑肌细胞电和收缩活动。２．ｇｌｙｂｅｎｃｌａｍｉｄｅ可以拮抗ｃｒｏｍａｋａｌｉｍ的作用。３．降低灌流液中葡萄糖浓度使平滑肌细胞电和收缩活动下降,ｇｌｙｂｅｎｃｌｍｉｄｅ对此有恢复作用。实验证明：豚鼠结肠带平滑肌细胞膜上存在ＫＡＴＰ通道,ＫＡＴＰ通道通过对膜去极化过程的影响对细胞电和收缩活动起重要作用。     

大黄素对豚鼠结肠带平滑肌细胞电和收缩性能的影响

联合应用平滑肌肌力张力测量技术和细胞内微电极记录技术,同步地现测豚鼠结肠带平滑肌自发的肌源性电活动和力学活动,研究了大黄素的药物作用。大黄素能缩短膜电位的波动周期,从而缩短峰电位集簇发放的周期;相应地,可使平滑肌的分节律收缩加快,幅值指数升高。大黄素又能促使细胞膜电位自发的周期性波动的出现,导致峰电位的集簇发放;相应地,可使强直收缩转化为分节律收缩,即促进收缩形式向有利于肠道推进功能的方向转化。以上结果表明,大黄素能有效地提高豚鼠结肠带平滑肌细胞的电兴奋性和收缩功能,并且对其电学和力学活动的影响之间有明确的对应关系。     

柴胡皂甙(I)对胰腺腺泡的拟膜受体激动剂作用

应用检测淀粉酶分泌和单细胞[Ca2 ]i 的技术 ,研究了Bt2-cGMP和GDP对柴胡皂甙(I)[SA(I)]和CCK -8促大鼠胰腺腺泡酶分泌和增加[Ca2 ]i 的抑制作用。Bt2-cGMP对SA(I)和CCK -8促酶分泌的抑制有相似的剂量依赖性。Bt2 -cGMP对SA(I)刺激的酶分泌动力学的抑制较对CCK -8滞后并持续。SA(I)诱发的胰腺腺泡单细胞[Ca2 ]i 的变化与CCK -8的作用有所不同 :[Ca2 ]i 峰值上升较慢且持续较长 ,并在峰后[Ca2 ]i 再次升高。GDP亦抑制SA(I)刺激的酶分泌和[Ca2 ]i 增加的峰植。结果表明 ,SA(I)可激活胰腺腺泡细胞膜受体从而升高[Ca2 ]i 和促酶分泌。     

pH改变对心肌细胞内Ca~(2 )浓度和细胞长度的影响

目的 :探讨细胞内 pH(pHi)改变对心肌细胞内Ca2 浓度 ([Ca2 ]i)和细胞长度的影响。方法 :心肌细胞内分别灌注 2 0mmol/L丙酸钠和 15mmol/LNH4Cl,建立细胞内酸碱中毒模型。荧光指示剂indo 1和SNARF 1载入大鼠心肌细胞内 ,用荧光显微镜同时测定心肌 [Ca2 ]i、pHi 和细胞长度。结果 :细胞内酸中毒早期 ,收缩期和舒张期[Ca2 ]i 轻度增加 ,细胞缩短 (CS)降低 ,细胞长度增加 ,心肌纤维对Ca2 的敏感性和CS/ [Ca2 ]i 降低 (P <0 .0 1) ;碱中毒时 ,收缩期和舒张期 [Ca2 ]i 均较对照组降低 ,CS增加 ,细胞长度变短 ,心肌纤维对Ca2 的敏感性和CS/[Ca2 ]i 增加 (P <0 .0 1)。结论 :酸中毒早期 [Ca2 ]i 和细胞长度增加 ,碱中毒时 [Ca2 ]i和细胞长度降低。酸、碱中毒对Ca2 敏感性的影响并非线性关系 ,即单位 pHi变化时酸中毒对敏感性的影响较碱中毒小     

产毒性大肠杆菌毒素在豚鼠肠道定位的免疫组织化学研究

研究利用免疫组织化学方法对产毒性大肠杆菌（ETEC）感染豚鼠小肠组织中ETEC肠毒素的定位进行了研究,本研究结果表明,发病豚鼠从空肠到回肠明显充血,肿胀,但盲肠,结肠和直肠外观与对照组差别不明显,光镜下见到发病动物肠组织病变主要出现在空肠和回肠,以回肠最为严重。主要病理改变为水肿,炎症细胞浸润和充血,病变部位可以出现在粘膜层,粘膜下层,肌层和浆膜层,取回肠组织切片作免疫组织化学显示ETEC不耐热肠毒素（LT）和耐热肠毒素（ST）、可见回肠粘膜表层,粘膜肌层,肌层及浆膜层均呈LT和ST阳性反应,分布弥漫,空白对照和正常豚鼠回肠组织均呈阴性结果。本研究表明,ETEC主要作用于空肠和回肠,尤其是回肠;回肠组织各层都有病变,且与肠毒素的分布一致,证明毒素的作用并不仅限于肠粘膜细胞。     

豚鼠腹腔神经节小强荧光细胞超微结构的定量分析

采用立体学方法对豚鼠腹腔神经节内小强荧光(SIF)细胞的超微结构进行了定量分析。以此为基础,对这种细胞的形态与机能联系进行了讨论。     

豚鼠胆囊SP免疫组织化学反应特点及电镜观察

研究采用ABC免疫组化方法及电镜观察发现;豚鼠胆囊含有SP免疫反应的神经元,神经纤维及肥大细胞,这些神经纤维束是被神经膜细胞完全或不完全包裹的无髓神经纤维。其神经纤维内含有的突触小泡形态大小不一。电镜下分可为3种类型;（1）以小型无芯小泡为主以及少量大型有芯小泡。（2）以小型有芯小泡为主以及少量无芯小泡和大型有芯小泡。（3）以大型有芯小泡为主以及少量小型无芯小泡。用SP免疫电镜组化方法观察。豚鼠胆囊的SP免疫反应阳性神经纤维内散在分布的突触小泡多为第3种。但在血管,淋巴管周围SP免疫反应阳性神经纤维内的突触小泡多为小型有芯小泡,胆囊除了受肾上腺素能神经支配外,尚受SP等肽能神经的支配。本研究对豚鼠胆囊SP免疫组织化学反应阳性神经纤维分布特点及神经纤维内突触小泡的超微结构特点进行了研究。     

豚鼠卵巢囊淋巴孔的发现及卵巢囊超微结构研究

本实验通过扫描电镜等方法研究豚鼠卵巢囊及卵巢囊淋巴孔的结构,并探讨了卵巢囊及其淋巴孔的种属差异.实验结果首次报道豚鼠卵巢囊内、外层上皮均存在淋巴孔;豚鼠卵巢囊结构在输卵管走行、囊闭合程度及囊表面超微结构等方面与金仓鼠存在差异.结果提示豚鼠卵巢囊内、外层淋巴孔是沟通卵巢囊腔、卵巢囊淋巴系及腹膜腔的形态基础,可能是三者间物质转运的重要途径.卵巢囊淋巴孔可能影响物种的繁殖并参与囊腔内局部免疫反应.卵巢囊结构和发育程度与对应的输卵管伞端等结构及其他生殖特点相适应,研究结果丰富了生殖形态学和比较解剖学资料.     

豚鼠精子在发生及顶体反应过程中细胞内Ca~(2+)的定位研究

实验利用焦锑酸钾法对豚鼠精子在发生及顶体反应过程中的Ca~(2+)定位作了较详细的研究。在精母细胞及精子细胞上都有Ca~(2+)分布,但睾丸中的精子上则无Ca~(2+)。成熟精子中Ca~(2+)主要定位于顶体帽的整个腹面及背面的两个特定区域。发生顶体反应的精子上Ca~(2+)则位于顶体外膜上或囊泡内,已发生顶体反应的精子中Ca~(2+)则位于顶体内膜上。     

一氧化氮合酶在豚鼠听觉核团的分布

为了研究一氧化氮合酶（ｎｉｔｒｉｃｏｘｉｄｅｓｙｔｈａｓｅ,ＮＯＳ）在听觉核团的分布特点,探讨一氧化氮（ｎｉｔｒｉｃｏｘｅｄｅ,ＮＯ）在听觉径路中的作用,本文采用ＮＡＤＰＨ硫辛酸胺脱氢酶（ＮＡＤＰＨ－ｄ）组织化学方法,研究了豚鼠听觉核团内ＮＯＳ的分布。结果发现,在各级听觉传入核团,均有ＮＯＳ阳性神经元,而上橄榄复合体ＮＯＳ反应阴性。耳蜗核ＮＯＳ阳性神经元主要集中在耳蜗后腹核,为圆形或椭圆形双极神经元。下丘ＮＯＳ阳性反应神经元位于下丘中央核团,胞体形状和大小不一。内侧膝状体背侧核ＮＯＳ阳性神经元相对集中,多为双极神经元,部分神经元突起很长,散在阳性纤维,部分阳性纤维穿行于内侧膝状体背侧核与内侧膝状体之间。本研究提示,ＮＯ可能是听觉中枢的神经递质或调质,参与声信号传递的调节。     

豚鼠心房存在苯环立啶受体

用氚标记苯环立啶([~3H]-pcp)与豚鼠心房匀浆蛋白作受体结合试验。结果表明豚鼠心房具有与[~3H]-PCP 相结合的部位,结合具有特异性、饱和性、可逆性和立体专一性。Scatchard 分析,豚鼠心房有两个不同亲和力的特异结合部位;高亲和力和低亲和力结合部位。两者的解离常数 K_(dl)和K_(d2)分别为12.15±0.414nmol/L 和561.23±121.36nmol/L,最大结合 B_maxl 为0.71±0.029 pmol/mg 蛋白,B_maxe 为1.047±0.099 pmol/mg 蛋白。竞争性抑制分析结果显示 PCP 受体和 sigma 受体的配基都可抑制[~3H]-PCP 的结合,PCP 受体的配基的抑制作用强于 sigma 配基,而广谱阿片激动剂埃托啡(etorphine)却无抑制作用。结果提示豚鼠心房存在 PCP 受体。豚鼠右心房的冰冻切片和[~3H]-PCP 进行体外受体结合放射自显影,结果显示,在心房肌层有与[~3H]-PCP 特异性结合部位,且呈比较均匀的散在分布。     

豚鼠耳蜗离体外毛细胞的膜电位和离子电流

利用膜片钳技术对分离的豚鼠耳蜗外毛细胞进行了研究,结果表明：（１）新分离的正常ＯＨＣ呈术状,胞膜光滑,胞核位于底部,静纤毛由顶端表皮板伸出,４小时内形态无明显变化。（２）全细胞电压钳记录结合通道阻断剂实验表明,ＯＨＣ膜电流主要由电压依赖性钾离子流组成。（３）利用全细胞记录方式得到的ＯＨＣ静息电位值为－２６±９ｍＶ．