免疫亲和层析法纯化棕尾别麻蝇(Sarcophagaperegrina)幼虫血淋巴凝集素

 报道了利用免疫亲和层析法纯化棕尾别麻蝇幼虫血淋巴凝集素的结果．哺乳动物红细胞能够特异地吸附凝集素．用兔红细胞与麻蝇幼虫血淋巴凝集素形成的复合体免疫供血家兔,得到麻蝇幼虫血淋巴凝集素的抗体．再利用抗体制备亲和吸附柱,通过免疫亲和层析一次性纯化了麻蝇幼虫血淋巴凝集素． Ｓ Ｄ Ｓ Ｐ Ａ Ｇ Ｅ结果显示,该凝集素的分子量约为７３ ｋ Ｄ．这一结果,与用对麻蝇幼虫血淋巴凝集素有抑制作用的糖蛋白—胎球蛋白和甲状腺球蛋白为配基,亲和层析纯化的结果完全相同,表明用这种免疫亲和层析法纯化凝集素是可行的．为不清楚专一性识别糖或专一性识别糖不典型,难于用普通亲和层析纯化的凝集素,提供了一种有效的纯化方法．     

用壳聚糖作为配基载体亲和层析提纯淀粉糖化酶的研究

以自制的壳聚糖作配基载体,植物血球凝集素(PHA)作配基,通过戊二醛交联研制成一种用于淀粉糖化酶提纯的新型亲和吸附剂。对淀粉糖化酶的亲和层析研究表明:提纯倍数为1.8,酶活性收率达80％,纯度经聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦电泳(IEF-PAGE)鉴定为一条带,没有非特异性吸附作用。具有简单、安全、快速和高收率等优点。     

棕尾别麻蝇(Sarcophaga peregrina)幼虫与蛹血淋巴凝集素的纯化与特性

用亲和层析法纯化了棕尾别麻蝇幼虫和蛹血淋巴凝集素。以兔红细胞吸附幼虫血淋巴凝集素为抗原制备的抗体、球球蛋白和甲状腺蛋白等三种亲和层析吸附剂纯化得到的幼虫凝集素是相同的,其分子量73kD左右。用甲状腺球蛋白为亲和配基纯化的蛹血淋巴凝集素由二种亚基组成,其分子量分别为30和32kD。幼虫和蛹血淋巴凝集素活性的抑制糖明显不同：乳糖、岩藻糖和N－乙酰半乳糖胺对幼虫血淋巴凝集素活性有抑制作用;而甘露糖胺、半乳糖胺和葡萄糖胺则对蛹血淋巴集素有一定抑制。而且,用兔红细胞吸附幼虫血淋巴凝集素为抗原制备的抗血清对蛹的凝集素活性无交叉反应,表明这两种凝集素是不相同的。虽然本文所纯化的麻蝇蛹血淋巴凝集素的分子量和Komano等报道的麻蝇蛹以及幼虫体壁 伤害诱导的凝集素SPL相同,但其糖的抑制特性有明显差异。     

猪甲状腺球蛋白-对氨基苯砜乙基-交联琼脂——一种可分离多种外源凝集素的亲和吸附剂

本文介绍了猪甲状腺球蛋白-对氨基苯砜乙基-交联琼脂的制备过程,用此亲和吸附剂分离提纯了一些已知的对葡萄糖(和甘露糖)、半乳糖、N-酰氨基葡萄糖专一结合的外源凝集素,此柱还可用来分离一些对聚糖专一结合的外源凝集素,如半夏凝集素、莲胚凝集素,还对脲作亲和层析解吸剂进行了讨论。以猪甲状腺球蛋白-对氨基苯砜乙基-交联琼脂作亲和吸附剂,脲作解吸剂适用于动植物来源的凝集素的筛选。     

猪甲状腺球蛋白-对氨基苯砜乙基-交联琼脂——一种可分离多种外源凝集素的亲和吸附剂

本文介绍了猪甲状腺球蛋白-对氨基苯砜乙基-交联琼脂的制备过程,用此亲和吸附剂分离提纯了一些已知的对葡萄糖(和甘露糖)、半乳糖、N-酰氨基葡萄糖专一结合的外源凝集素,此柱还可用来分离一些对聚糖专一结合的外源凝集素,如半夏凝集素、莲胚凝集素,还对脲作亲和层析解吸剂进行了讨论。以猪甲状腺球蛋白-对氨基苯砜乙基-交联琼脂作亲和吸附剂,脲作解吸剂适用于动植物来源的凝集素的筛选。     

三齿草藤(Vicia bungei Ohwi)凝集素的亲和层析纯化及其部分性质的研究

用Sephadex G-100或猪甲状腺球蛋白-对氨基苯砜乙基-交联琼脂作亲和吸附剂,均可从三齿草藤(Vicia Bungei Ohwi)的种子中分离纯化出三齿草藤凝集素。该凝集素经连续或不连续系统聚丙烯酰胺凝胶电泳均显示出单一蛋白带;糖蛋白染色法证实为糖蛋白;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其分子量为24,600,凝集素浓度为1.95微克/毫升时就能凝集兔红细胞;但对人ABO型血细胞不发生凝集作用;其对兔红细胞的凝集作用可被D-Man、D-GlcNA和D-GIC所抑制;它也是一种促有丝分裂原。     

用免疫亲和层析法纯化细菌铁蛋白

用细菌铁蛋白免疫家兔,制备抗铁蛋白血清,用进一步纯化的抗铁蛋白抗体作为配基与溴化氰活化的Sepharose4B偶联,得到亲和免疫吸附剂。以此法纯化的铁蛋白为聚丙烯酰胺凝胶电泳纯,相对复合抗体作双向免疫电泳显示单峰,并具有较高的免疫活性。     

雪山豆(Phaseolus sp.)凝集素的亲和层析纯化与其部分性质

 用猪甲状腺球蛋白-对氨基苯砜乙基-交联琼脂作亲和吸附剂,可对雪山豆(Phaseolus sp.)凝集素进行亲和层析纯化。纯化后的凝集素在聚丙烯酰胺凝胶电泳中显示单一蛋白质带。Sephadex G-100凝胶层析法测得分子量为65,000道尔顿,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明该凝集素分子仅有一个分子量为65,000道尔顿的亚基,酚-硫酸法测得总糖含量为4.6％,氨基酸组成分析表明雪山豆凝集素富含门冬氨酸,而甲硫氨酸含量甚少。该凝集素是强促有丝分裂原,对人外周血中淋巴细胞的转化率大于90％,细胞分裂比率达12％。雪山豆凝集素不仅能凝集多种动物红细胞,还能凝集人精细胞。经体外实验表明,雪山豆凝集素对人肝癌细胞有抑制作用。     

野花生豆凝集素的纯化和性质

用猪胃粘蛋白-Sepharose 4B作亲和吸附剂,可从野花生豆(Crotalarta mucronata)的种子中分离纯化出对人类A型血专一凝集的凝集素。该凝集素可用pH30.,Gly-HCl-1mol/L NaCl溶液解吸附。纯化的凝集素在PAGE或SDS-PAGE中均显示单一蛋白带,表明凝集素分子内只有一种亚基。用SDS-PAGE测得其亚基分子量为49,000。氨基酸组成分析表明,该凝集素富含甘氨酸和谷氨酸,不合甲硫氮酸。纯化的野花生豆凝集素(简称CML)含有4.11％的中性糖。它对人A型血细胞有强烈凝集作用,对AB型血有弱凝集作用,但对B型和O型血均不凝集。其对A型血细胞的凝集作用可被N-乙酰半乳糖胺抑制,但对AB型血则无抑制作用。CML是一个促有絲分裂原,对人外周血中淋巴细胞有促有絲分裂作用。     

亲和分离技术中亲和配基的研究进展

亲和分离技术在蛋白质的分离纯化过程中发挥着越来越重要的作用,开发合适的配基是亲和分离的关键。按生物大分子亲和配基、小分子亲和配基、金属亲和配基三大类对亲和配基的研究情况进行综述,重点介绍其发展现状、作用机理以及目前存在的主要问题,并对亲和配基未来发展进行展望,旨为将其更好地应用于实际生产。