于铬化及碳蜡包埋后染神经终足及线粒体

(一)固定:猫、兔以加有20—40毫克亚硝酸钠(Sod nitrite)的0.9%氯化钠液50—100毫升灌注(亚硝酸钠作为血管扩张剂):继以含10%蚁醛之0.9%氯化钠液300—500毫升灌注;取其脊髓,继续以上述10%蚁醛液固定,最少两天;置5—10毫米长的脊髓在室温下入下液浸5天。配法:重铬酸钾5克;氟化铬(chromiumfluaride)2克;蒸馏水100毫升,再入5%重铬酸钾于38—40℃下浸2—4星期,此液应换数次。     

对Бильшовский-Γросс氏浸渍法的一些应用上的意见

著者建议一种简单的染周围神经系及末梢的浸渍改良方法,操作如下:标本在5%硫酸镁(Mag·sulphate)液中约洗5—40分钟,并以15%中性甲醛固定,固定时间不少于7天(可保存甲醛中数月),水洗,冰冻切片。切片浸于10%硝酸银5—30分钟,移入20%酸性甲醛,在此液中勿超过5秒,迅速通过蒸馏水。切片放在2张滤纸间吸干(此步重要!),入10%硝酸银     

在组织切片中肥大细胞的证明及迅速记数的简单方法

肥大细胞的选择性染色法如下:1)薄片新鲜组织(3—5毫米厚)于下液固定18—24小时,但标本置于此液至少一周尚无显明害处。配法:福尔马林液10毫升;95%酒精90毫升;醋酸钙1克。2)组织以95%酒精洗2次,每次1小时。3)以常法制做石蜡切片(8—12微米厚),粘片,脱蜡,经纯酒精至95%酒精。4)在室温于下液内染1小时。配法:甲苯胺蓝(toluidine blue)0.25克;70%酒精100毫升;浓盐酸     

以龙胆紫染硫酸酯多醣类的组织化学意义

甲、方法:1)固定于任何固定液皆可,但以酒精为最合适。石蜡切片,厚3微来。切片脱蜡,降酒精,至蒸馏水。2)以龙胆紫(gentian violet)水溶液1∶250,000或1∶1,280,000染色24小时(即0.25毫升0.1%龙胆紫贮存液加入100毫升蒸馏水内;或以0.1毫升0.1%龙胆紫液加入128毫升蒸馏水内)。3)滤纸吸干切片,然后在亚尼林二甲苯(anilinc-xylene)1∶1或1∶2液内脱色及脱水约5分钟(或稍长),直至紫色不再从切片上脱下为止。以二甲苯洗2—3次,用树胶封片。若染透明质酸(hyaluronic anid)可以甘油封片。     

显示环氧树脂厚切片中多糖,蛋白质和脂类的细胞化学方法

用花生(Arachis hypogaea L.)种子的子叶组织作为模式材料,Epon 812包埋的组织进行厚切片后,按下列三步染色。第一步,PAS 反应:(1)在0.5%高碘酸(0.3%硝酸配制)中10分钟;(2)自来水洗1—2分钟,蒸馏水经过;(3)锡夫试剂中30分钟;(4)偏亚硫酸氢钠溶液三次洗涤,每次2分钟;(5)自来水洗5分钟,蒸馏水经过。第二步,苏丹黑 B 液染色:(1)70%酒精中1—2分钟;(2)新鲜配制的0.3%苏丹黑 B 液(70%酒精配制)中染色,40—60℃,30分钟至1小时;(3)70%酒精中分色1分钟;(4)自来水冼,蒸馏水经过。第三步,考马斯蓝染色:(1)7%醋酸中1—2分钟;(2)1%考马斯蓝(7%醋酸配制)中染色,60℃,20分钟;(3)0.1%醋酸液中分色1分钟;(4)自来水冼5分钟,蒸馏水经过;(5)自然干燥或在40℃电热温箱中烘干。干燥后的切片用甘油胶封固。经这三步染色的切片,细胞内的多糖、脂类和蛋白体同时被显示:淀粉粒及纤维素的细胞壁为樱红色,油滴为黑色,蛋白体为蓝色。制片能长期保存。     

神经组织的氨基-银液染色

1) 神经组织以95%乙醇或10%甲醛(普通甲醛,甲醛盐液,中性甲酫)固定;石蜡切片。 2) 取氨基银液150—200毫升于染色皿内。 配法:0.035M的甘氨酸(glycine)或dl-蛋氨酸(dl-methionine)或dl-α-氨基-正-酪酸(dl-α-amino-n-butyricacid)或dl-组氨酸(dl-histidine)(硷性基游离)或dl-α-丙氨酸(dl-α-alaniae)的溶液与0.02M硝酸银溶液等量混合,     

水不溶酶的研究II．对氨基苯磺酰乙基纤维素-葡萄糖淀粉酶的制备

1．用甘蔗渣纤维素及对-β-硫酸酯乙砜基苯胺为原料,研究了ABSE-纤维素的制备条件,探讨了黑曲霉(Asp. Niger)粗制糖化酶共价键台到重氮化的ABsE一纤维素上的影响因子。获得ABSE-纤维素糖化酶合适的制备方法。 2．ABSE-纤维素糖化酶含3.7-6.4％蛋白量,酶活力约为10000单位／克,以淀粉为底物,与自然酶比较,相对活力为20—30％,满联时加入适量的硫酸铵能提高相对活力至43．9％。该水不溶酶最高活力是在pH4.5和65～70℃(对淀粉)。在55℃淀粉化液液中稳定性良好。 3．将ABSE-纤维素糖化酶(33912单位)装柱,在55℃,以25．4毫升／小时的流速通过pH 4．5的3l～34％的淀粉液化液进行连续糖化,218小时内得到DE值为93．9的葡萄糖液,326小时后不溶酶柱仍保持原活力的74．9％。而搅拌糖化在140小时后只保持64.8％原活力．     

3-氰基吡啶水合酶的反应条件及影响因子

研究了芳腈水合酶催化水合3-氰基吡啶生成尼克酰胺的反应条件及影响因子.酶反应的最适pH为8.0,最适温度为25℃.酶在pH8.5于25℃保温4小时或在25—30℃于pH8.0保温3小时是稳定的.反应液中加入Fe~(3 )(1.5 mmol/L)可使酶活力增加 50%,而加入NH_4~ (300 mmol/L)则使酶活降低了67%.Ag~ 和 Hg(2 )”强烈地抑制酶反应活性,在浓度均为 5mmol/L时,抑制率分别为99.7%和100%.NaCN(50 mmol/L)和苯甲腈(100 mmol/L)对酶活性的抑制率分别为78%和85%.该酶作用于 3-氰基吡啶的Km为62.5 mmol/L,V_(max)为85.8 μmol·min~(-1)·mg~(-1).     

3-氰基吡啶水合酶的反应条件及影响因子

研究了芳腈水合酶催化水合3-氰基吡啶生成尼克酰胺的反应条件及影响因子.酶反应的最适pH为8.0,最适温度为25℃.酶在pH8.5于25℃保温4小时或在25—30℃于pH8.0保温3小时是稳定的.反应液中加入Fe~(3+)(1.5 mmol/L)可使酶活力增加 50%,而加入NH_4~+(300 mmol/L)则使酶活降低了67%.Ag~+和 Hg(2+)”强烈地抑制酶反应活性,在浓度均为 5mmol/L时,抑制率分别为99.7%和100%.NaCN(50 mmol/L)和苯甲腈(100 mmol/L)对酶活性的抑制率分别为78%和85%.该酶作用于 3-氰基吡啶的Km为62.5 mmol/L,V_(max)为85.8 μmol·min~(-1)·mg~(-1).     

三种不同方法固定的石蜡切片中RNA的分析

研究在 10 %中性福尔马林、丙酮、甲醇 氯仿 冰醋酸 3种方法固定的石蜡切片中提取RNA的质量和数量 .取 2 5 0g体重的Wistar大鼠的肾脏 ,分别采用 10 %中性福尔马林、丙酮、甲醇 氯仿 冰醋酸 3种方法固定 ,石蜡包埋 ,H E染色 ;采用RNA裂解液、TRIZOL试剂 2种方法提取切片RNA ,逆转录为cDNA ,采用普通PCR和SYBRGREEN 1定量PCR分析RNA质量和数量 .结果表明 ,3种固定方法都可保持组织良好的结构和形态 ;采用 2种提取方法 ,均可经RT PCR扩增出 180bp大鼠磷酸甘油醛脱氢酶 (G3PDH)、5 6 5bpβ肌动蛋白 (β actin)、10 0bp纤溶酶系活化剂抑制物 1(PAI 1) ;但采用RNA裂解液时 ,比TRIZOL试剂可提取更多的RNA .     

产碱菌外切异麦芽三糖水解酶的产生和性质

从污染的右旋糖酐溶液中分离出一株外切异麦芽三糖水解酶(Exo-isomaltotrio-hydrolase,1,6-α-D-Glucan isomaltotriohydrolase EC 3.2.1.95)产生菌,经鉴定为产碱菌(Alcaligenes sp.).研究了酶的产生条件和基本性质.产酶最适培养基组成(%):右旋糖酐1.5、鱼粉蛋白胨1、酵母抽提物0.1、牛肉膏0.3、甲醇2,pH8.0,250ml三角瓶中装20ml培养基,于26℃200r/min旋转摇床上振荡培养48小时.酶的最适作用温度和pH分别为50℃和p H6.5—7.5,在pH5.0—10.6范围内稳定.在40℃保温24小时酶活力基本不变,50℃保温8小时剩余酶活力为71.8%,保温24小时剩余酶活力为44.2%,在55℃酶活力的半寿期为10 小时.金属离子Hg^(2+)、Ag^+对酶强烈抑制.水解右旋糖酐的终产物为异麦芽三糖,酶的作用方式为外切型.     

蚕氨基酸代谢之研究 Ⅱ.比较家蚕和野蚕谷氨酰胺酶及天门冬酰胺酶,蓖麻蚕丝腺体中天门冬酰胺酶之提取及其性质之研究

(1)比較家蚕(华九-云瀚)和野蚕(萞麻蚕、柞蚕和樗蚕)之谷氨酰胺酶及天門冬酰胺酶之活力,发現在萞麻蚕絲腺体后部之細胞顆粒部分中,存在有活力甚強之天門冬酰胺酶。(2)自萞麻蚕絲腺体后部提取之天門冬酰胺酶制品中,不含有谷丙轉氨酶、谷天轉氨酶及谷氨酰胺酶。(3)L-天門冬酰胺之酶促水解作用在1小时过程中,活力和作用时間基本土表現直线关系。(4)萞麻蚕絲腺体后部之天門冬酰胺酶和哺乳类动物、植物及微生物之pH影响相同;在pH5以下不稳定,最适pH为8。(5)天門冬酰胺酶对热不稳定,先以不同温度和酶溶液作用10分钟,60℃时,活力丧失80%左右。(6)对氯汞苯甲酸(10~(-4)M)抑制天門冬酰胺酶20%,溴化乙酰胺(10~(-3)M)及DL-环絲氨酸(10~(-3)M)抑制15%。     

棉花根尖细胞的多核现象

除一些植物的毡绒层细胞中有时有2—4核外,每个植物体细胞一般都只有一个核。我们在棉花根尖细胞的观察中,发现了根尖具有二核或三核的细胞(图1—3)。所用材料为“辽棉六号”,待胚根长到1.5—2.5cm 时,切取根尖于卡诺液中固定22小时,铁矾苏木精整体染色后的根尖纵切成厚约0.3mm 的切片,于4%纤维素酶 4%果胶酶的水     

论硷性磷酸酶在组织化学上的专属性问题

一、绪言硷性磷酸酶是一种酶或是包括好几种性质相似的酶的问题,至今还没有完全被了解。1937年Bodansky用胆盐作用于肾脏和小肠的硷性磷酸酶,发现胆盐对肾脏硷性磷酸酶的抑制极强,但对小肠硷性磷酸酶的作用微弱。Emmel(1946 a,b)以小鼠的肾和小肠作为材料,在作用液中加入不同浓度的KCN(0.0001—0.01M),在37℃下作用3小时,发现小肠的硷性磷酸酶,在0.001M KCN的作用下,已完全被抑     

胞间连丝玻片的制备

将柿子或黑枣的种子浸于温水中24小时,剥去种皮,将胚乳切成薄切片并于I—KI溶液(I 1克,KI 1.25克,蒸馏水100毫升)中固定3—5分钟,移入5％H_2SO_4溶液中3—5分钟。将切片置载片中央滴一滴结晶紫染色,3分钟后用50％酒精洗1—2     

蝮蛇抗栓酶引起迟发过敏反应一例

患者女60岁,病案号6022,双下肢肿痛双小腿下1/3皮肤暗紫色,行走困难已二年入院.拟诊为双下肢血栓性静脉炎.入院前曾用强的松、布洛芬、青霉素等治疗,疗效不显.入院后于1990年6月13日经皮试阴性始用蝮蛇抗栓酶0.75~μ加0.9%氯化钠液250毫升静滴二疗程,下肢疼痛明显减轻,红肿基本消失,肤色接近正常.仅存散在性紫     

用哈栖木霉(Trichoderma harzianum)的细胞壁分解酶从指状青霉(Penicillium digitatum)的菌丝中制备原生质体

用哈栖木霉ATCC48131的细胞溶壁酶从指状青霉的菌丝体中制备原生质体。将指状青霉ATCC10030于27℃培养在马铃薯右旋糖液体培养基中,静止培养24小时,菌丝用Whatman 1号滤纸过滤收集,然后用0.6％的氯化钠冲洗3次。原生质体是从0.8克分子甘露糖醇溶液(pH5.5～6.0)的菌丝悬液(50～100毫克/毫升)中,用5～7％(W/V)对哈栖木霉中得到的细胞壁溶解酶,在每分钟100转的往复式摇床上,30℃下,摇4小时浸提。采用二相梯度离心,从剩余菌丝体碎片中分离出原生质体。1毫升1M硫酸镁同1毫升粗制原生质悬     

实验11 哺乳类基因组基因文库的构建

一、哺乳类DNA部分酶切片段的回收 1.选定所用的限制性内切酶。将待酶切的哺乳类细胞DNA分别装入6—10个Eppendorf离心管。 2.将限制性内切酶加入装有DNA的离心管。酶量逐级递减,例如1单位/微克DNA,0.5单位/微克DNA,……,37℃保温3—5小时。 3.或将相同的酶量加入装有DNA的离心管,37℃保温。经不同时间终止酶切反应。例如,保温10分钟,20分钟……。     

链霉素生物合成中胍基来源的证明

在鏈霉菌的发酵中,加入精氨酸、鳥氨酸和瓜氨酸,有促进鏈霉素合成的作用。应用同位素C~(14)O_2做試驗,証明鏈霉菌細胞能固定C~(14)O_2于鏈霉胍胍基的碳原子上,鳥氨酸促进C~(14)O_2的参入,但精氨酸却呈冲淡C~(14)O_2参入的作用。鏈霉菌細胞悬液与鳥氨酸和C~(14)O_2保温,产生C~(14)-精氨酸。C~(14)-精氨酸經精氨酸酶作用,分解为鳥氨酸,后者沒有放射性活力,說明仅精氨酸的胍基的碳原子是标記的。鏈霉菌細胞抽出液中有鳥氨酸轉氨基甲酰酶的存在,但沒有测得精氨酸合成酶的活力。在鏈霉菌的細胞丙酮干粉中測得轉脒酶的活力,但不能以鏈霉胍或鏈霉胺作为酶的底物。作者們认为鏈霉菌細胞有鳥氨酸代謝循环系統的存在。鳥氨酸,CO_2和NH_3合成瓜氨酸,再由瓜氨酸轉变为精氨酸,后者經轉脒酶的作用,复轉变为鳥氨酸,这个循环的作用不断地供給了链霉素鏈霉胍部分的胍基的来源。     

甲基胆蒽诱发小白鼠皮肤癌过程中某些酶活性及巯基含量的变化

(一)对表皮LDH、ATP酶、組織蛋白酶的某些性貭作了初步研究。(二)在甲基胆蒽誘发皮肤癌过程中,观察到:(1)組織提取液的蛋白貭含量有所增高;(2)GDH、GOT、谷氨酰胺酶的活性显著降低;(3)LDH的活性显著增高;(4)組織蛋白酶与二肽酶活性在增生期有所增高;在乳头瘤及皮肤癌則略有降低;(5)ATP酶活性无显著变化;(6)在增生期蛋白—SH基增多,非蛋白—SH基減少;乳头瘤与皮肤癌的蛋白—SH基接近正常,非蛋白—SH基增多。(三)在皮肤引癌早期,如滴甲基胆蒽一次后2斗小时,GDH活性即显著下降,而LDH活性仍接近正常。(四)滴非致癌物,蒽对表皮GDH及LDH活性无显著影响。(五)結合形态学的观察,对上述酶活性及—SH基变化在皮肤癌变中的可能意义,作了簡短討論。