胡椒碱对白纹伊蚊C6/36细胞株的毒性作用

采用MTT检测法、Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测法及细胞形态学观察法,研究了植物型杀虫剂胡椒碱对白纹伊蚊Aedes albopictus C6/36细胞株的细胞毒性、诱导细胞凋亡与坏死的关系、Fas蛋白的表达、细胞生长状态改变及受损细胞的恢复。结果表明：胡椒碱浓度在0.035 mmol/L以上时可以诱发C6/36细胞形态学改变,在倒置显微镜下表现为细胞呈多形性,细胞胀大或皱缩,细胞间隙增宽,大片细胞聚集成团,脱落、崩解、死亡。用胡椒碱处理24 h后,对C6/36细胞的半数毒性浓度（IC₅₀）为 0.32 mmol/L,且毒性作用强度随着药物浓度增加而增强。Annexin-V/PI双染法检测结果显示药物浓度在0.28 mmol/L 以上诱导的细胞凋亡明显,药物浓度为0.56 mmol/L 时细胞凋亡率达19.4%,而药物引起的细胞总死亡率为72.7%;Fas蛋白表达在药物浓度0.28 mmol/L 以上时有所上调,但不明显。高浓度胡椒碱（0.56 mmol/L）分别作用于C6/36细胞24和48 h,在经历一段生长停滞后,24 h组受损细胞均可缓慢恢复,而48 h组细胞则出现不可逆性的损伤。由此认为：胡椒碱对C6/36细胞株有毒性作用,但药物诱导的细胞凋亡在细胞毒性作用机制中不占主导地位;胡椒碱对C6/36细胞的作用有时间依赖性,延长作用时间,药物对细胞的毒性作用增强。     

白纹伊蚊细胞色素P450 CYP6家族基因多样性的研究(英文)

根据已获得的白纹伊蚊CYP6家族某成员cDNA序列片段AEDR ,设计基因特异性引物 ,以白纹伊蚊总RNA为模板 ,进行cDNA末端快速扩增 ,扩增产物经T -A克隆、测序。结果显示 :通过 5’ RACE获得 1个非全长cDNA序列 (GZS331 ) ,其与CYP6N1、CYP6N2的同源性分别为 59 8%和 59 1 % ,与CYP6N3v1 -v3同源性最高 ,达 83 9% - 84 3% ;通过 3’ RACE获得 6个非全长cDNA序列 ,其中来自抗性株的GZG0 33序列与CYP6N3v1 -v3的同源性达 98 2 % - 99 1 % ,而其余 3’ RACE克隆与CYP6N3v1 -v3的同源性则达 84 3% - 85 6%。上述所有非全长cDNA序列均与哺乳动物CYP3A1以及夜蛾CYP9A1有较高的同源性 ,分别为 2 3% - 36 1 %和 2 7 6% - 34 1 %。用PC/GENE软件所绘制的系统树显示出与同源性分析相一致的结果。所得非全长cDNA序列上报国际P450命名委员会进行统一的命名 ,并对蚊虫中细胞色素P450基因多样性及其形成原因进行了分析     

伊蚊C6/36细胞浓核病毒蛋白衣壳三维结构的测定

利用冷冻电子显微技术和计算机图像三维重构方法获得伊蚊C6/36细胞浓核病毒蛋白衣壳的三维结构, 分辨率为1.4 nm. 结果显示C6/36 DNV蛋白衣壳的三角形剖分数T = 1, 在二十面体的每个面上有12个孔, 可能是DNA的通道, 每个五次轴上有一个柱状突起.     

5种杀虫剂对黑粪蚊的毒力及对平菇菌丝生长的影响

[目的]黑粪蚊为食用菌生产中的危险害虫之一,通过杀虫剂的毒力测定和对平菇菌丝生长抑制试验,拟筛选获得理想的黑粪蚊防治杀虫剂。[方法]采用毒饵法测定了5种杀虫剂对黑粪蚊幼虫的室内毒力,并研究各杀虫剂对平菇菌菌丝生长的抑制情况。[结果]20%甲氰菊酯乳油、14%阿维·虫螨腈悬浮剂和20%甲维·吡丙醚悬浮剂对黑粪蚊的校正死亡率达80%以上,对黑粪蚊幼虫均有较好的杀灭效果,而苏云金杆菌（以色列亚种）悬浮剂对黑粪蚊幼虫的杀虫效果不理想。5种杀虫剂对平菇菌丝生长均有一定抑制作用,且农药品种间存在极显著差异,20%甲氰菊酯乳油抑制率最高,高浓度480 mg·L^-1处理的抑制率可达16.85%,14%阿维·虫螨腈悬浮剂的抑制率最低,高浓度140 mg·L^-1处理的抑制率仅为5.83%。[结论]本研究中14%阿维·虫螨腈悬浮剂用于平菇菌中黑粪蚊防治效果最好,研究结果将为食用菌黑粪蚊的药剂防治提供理论指导。     

八种杀虫剂对韭菜迟眼蕈蚊发育和繁殖的亚致死效应

用胃毒触杀法确定8种常用杀虫剂对韭菜迟眼蕈蚊Bradysiaodoriphaga 3龄幼虫的LC₂₀和LC₅₀剂量后,以其LC₂₀分别处理3龄幼虫,将存活幼虫正常饲养,测定该剂量药剂对韭菜迟眼蕈蚊化蛹率、蛹重、羽化率,成虫存活率、雌雄比、单雌产卵量及卵孵化率等指标的影响。结果表明:毒死蜱等4种药剂的影响较显著,其影响程度由高到低依次为毒死蜱＞辛硫磷＞阿维菌素溴虫腈;而另4种药剂丙硫克百威、灭多威、丁硫克百威和吡虫啉则影响不显著。此外也测定了用后4种药剂LC₅₀剂量处理的存活试虫的上述生物学指标,结果表明：除化蛹率和羽化率较对照降低且差异显著外,其他生物学指标与对照处理无明显变化。     

四种杀虫剂对棉蚜药效试验的初报

采用浸渍法 ,室内测定了 4种杀虫剂对越冬寄主木槿上棉蚜的毒力 ,这几种药剂的防治效果均良好 ,其毒力 (LC50 )为阿维菌素 >吡虫啉 >甲氰菊酯 >氰戊菊酯。建议在棉蚜的越冬寄主上集中防治     

云南省致乏库蚊对四种杀虫剂的敏感性调查

云南省分别在１９７８—１９８１ 年和１９９２—１９９４ 年间开展了致乏库蚊对杀虫剂的敏感性调查。根据剂量死亡率回归线和区分剂量线相交点所处的位置, 判定１９７８ —１９８１ 年的抗性等级（ＬＣ５０ 测定） , 再与同一监测点１９９２—１９９４ 年抗性级（区分剂量法） 比较, 评估其敏感性。结果云南大部份地区致乏库蚊对ＤＤＴ、杀螟硫磷和敌百虫, 由敏感（Ｓ） 或初步抗性（Ｍ） 发展为初步抗性或抗性（Ｒ）, 原来的Ｒ种群仍保持不变; 但对马拉硫磷仍象１０ 多年前一样敏感。     

四种杀虫剂对拟环纹豹蛛(Pardosa pseudoannulata)肠黏膜通透性的影响

采用异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-D)作为示踪物质,通过检测拟环纹豹蛛(Pardosa pseudoannulata)血液内的荧光素浓度,研究了两种生物源杀虫剂和两种化学源杀虫剂对拟环纹豹蛛肠黏膜通透性的影响.结果表明:4种杀虫剂处理后拟环纹豹蛛血液中的荧光素浓度远高于对照组,各个处理组拟环纹豹蛛血液样本中的荧光素浓度均与对照组存在极显著差异,可见4种杀虫剂均将对拟环纹豹蛛肠黏膜的屏障功能造成损伤,导致大分子物质易于通过;其中1.5%除虫菊素水乳剂三保奇花和Bt制剂强杀处理后拟环纹豹蛛中肠黏膜的通透性高于仿烟碱类化学杀虫剂吡虫啉处理组,差异达到显著水平,但与有机磷杀虫剂敌百虫处理组差异不显著.拟环纹豹蛛的肠黏膜组织亦具有一定的抗逆能力,接受单次杀虫剂处理后,存活的拟环纹豹蛛其肠黏膜的屏障功能约在6～10d内可以恢复.     

黑麂(Muntiacus crinifrons)细胞系的建立及其细胞生长特性和细胞遗传学分析

黑麂是我国特有的动物,其染色体大而数少(2n=8♀,2n=9♂),并且有三对大小相近,形态相似的染色体(早性6条,♂性5条)(段幸生等,1984)。由于上述特点,它可能是研究染色体结构与功能,特别是着丝点结构与功能研究的好对象,亦是辐射生物学,遗传毒理学,细胞杂交等研究的好材料。我们所建立的黑麂(♀)胚胎肺组织成纤维二倍体细胞系命名为KIZ—8102。已对其部分生物学特性进行了研究。     

棉田四种常用杀虫剂对玉米螟赤眼蜂不同虫态的杀伤力

棉田四种常用杀虫剂对玉米螟赤眼蜂不同虫态的杀伤力差异显著。溴氰菊酯、氰戊菊酯、久效磷、甲胺磷对玉米螟赤眼蜂成虫的杀伤力均很强;溴氰菊酯和甲胺磷对玉米螟赤眼蜂卵至蛹各个虫态的杀伤力较强;而氰戊菊酯对卵、久效磷对幼虫有较强的杀伤力。久效磷对玉米螟赤眼蜂成虫的残留毒杀力最强。玉米螟赤眼蜂成虫是玉米螟赤眼蜂一生中对农药最敏感的时期,其次是卵和幼虫,而预蛹和蛹耐药性较强。     

细胞松弛素D对小鼠乳腺腺癌细胞系(MA782/5S-8102)细胞的作用

本文研究了细胞松弛素D(CD)对小鼠乳腺腺癌细胞系(MA782/5S-8102)细胞的作用,统计了在0.4微克/毫升CD作用下的多核细胞形成率,并与HEp2细胞及正常婴兔肾原代培养细胞进行比较。结果表明:CD处理48小时后,肿瘤细胞形成大量的多核,≥3核的细胞数在MA782/5S-8102细胞中为37.05％,在HEp2细胞中为18.37％。正常婴兔肾原代培养细胞经同样处理后≥3核的细胞数只有0.059％。肿瘤细胞多核形成的比例会随CD处理时间的延长而显著增高,并出现排核现象。CD处理96、144小时后的多核细胞数,MA782/5S-8102细胞分别为47.90％,53.12％,HEp2细胞分别为43.94％,51.94％,而正常婴兔肾原代培养细胞则仅为0.26％和0.39％,亦未见排核现象,肿瘤细胞和正常细胞对CD的不同反应,有可能作为鉴别肿瘤细胞与正常细胞的一个简便易行的工具。     

r－干扰素对喉癌细胞系HEP－2HLA－DR抗原和增殖细胞核抗原表达的影响

本实验用人重组ｒ－干扰素（ｒｈｕ－ＩＦＮ）作用ＨＥＰ－２细胞后ＨＬＡ－ＤＲ抗原和增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）表达的检测来探讨ｒ－干扰素对ＨＥＰ－２细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原表达诱导作用及体外抗增殖活性。用单克隆抗体ＣＲ３／４３（抗ＨＬＡ－ＤＲ）和Ｋｉ－６７（抗ＰＣＮＡ）。以链霉素一生物素技术（ＬＳＡＢ）检测ＨＥＰ－２细胞ＨＬＡ－ＤＲ抗原和ＰＣＮＡ表达,结果显示：ｒ－ＩＥＮ诱导ＨＬＡ－ＤＲ抗原和抑制ＰＣＮＡ表达其强弱与ｒ－ＩＦＮ剂量有关。资料提示：ｒ－ＩＦＮ不仅对ＨＥＰ－２细胞有细胞毒作用,同时能调节其细胞膜特性,因而在喉癌的治疗中是有效的。     

Bcl—2基因加强表达对SK细胞编程死亡的效应

TNF和OA诱发人神经母细胞瘤SK细胞编程死亡(PCD)。将编码Bcl-2完整蛋白质的cDNA植入pXJ 41neo载体中,由HCMV病毒启动子控制其表达。形成的正向(pBcl-2-S)及反向(pBcl-2-AS)表达质粒经转染导入SK细胞中获得稳定转染子。Western印迹表明正向转染子表达较大量的26kd Bcl-2蛋白,而反向转染子则不表达。增强表达的Bcl-2基因产物能抑制由TNF引发的PCD,但不影响由OA引发的PCD,从而证明Bcl-2基因产物抗细胞死亡效应的特异性。     

Cell membrane enolase of Aedes albopictus C6/36 cells is involved in the entrance mechanism of dengue virus (DENV)

Currently, there are no antiviral drugs that effectively reduce the risks and treat the symptoms associated with dengue virus (DENV). Consequently, efforts remain primarily focused on transmission reduction. One such effort concerns DENV receptors in mosquito vectors Aedes aegypti and Aedes albopictus. Despite a lack of direct evidence demonstrating the binding of DENV to cells in mosquito vectors, one putative DENV binding protein has been α-enolase. To develop a deeper understanding, this study tested whether DENV proteins bind to enolase localized in the cytoplasmic membrane of C6/36 cells using both anti-enolase-specific antibodies, and by colocalization analysis, using confocal microscopy.Additionally, to probe the interaction of enolase with the DENV E protein, we performed a docking analysis using PatchDock and FireDock software packages. Study results demonstrate that the DENV E protein interacts with enolase in the plasma membrane of C6/36 cells of Ae. albopictus. Specific anti-enolase antibodies were found to inhibit DENV infection of these cells. Moreover, enolase was found to be localized to the cytoplasmic membrane, cytoplasm, and nucleus. These combined findings suggest that enolase participates in the entrance mechanism of DENV into vector cells.     

三氧化二砷诱导CNE1凋亡及其对细胞周期的影响

目的 研究三氧化二砷对人鼻咽癌CNE1细胞凋亡及其细胞周期的影响。方法 应用形态学观察、原位末端标记法(TUNEL)、流式细胞术等方法对三氧化二砷诱导的鼻咽癌细胞CNE1进行检测和观察。结果 一定浓度三氧化二砷能诱导CNE1细胞凋亡,凋亡细胞具有典型的凋亡形态特征,TUNEL原位检测有典型凋亡细胞,流式细胞仪检测有凋亡峰,G2／M期比例升高,呈一定的剂量效应关系。结论 三氧化二砷能诱导人鼻咽癌CNE1细胞株凋亡及阻止细胞周期进展的作用。     

EFFECT OF SUBLETHAL DOSES OF CADMIUM, INORGANIC MERCURY AND METHYLMERCURY ON THE CELL MORPHOLOGY OF AN INSECT CELL LINE (AEDES ALBOPICTUS, C6/36)

The effect of CdCl₂(44 μ ), HgCl₂(3.7 μ ), and MeHgCl (2 μ ) on the morphology ofAedes albopictusC6/36 cells was studied at the light microscopical level. Treatment times and metal concentrations were in the sublethal range as determined by a fluorometric dye exclusion test. The three metal species had profound effects on the cell morphology. MeHgCl treatment induced the development of a large number of short, actin-supported, tangled filopodia. Both CdCl₂and HgCl₂induced long extensions. Pretreatment with colchicine but not with cyto-chalasin B prevented formation of these extensions which suggests that they were supported by microtubules. This was confirmed by immunostaining for microtubules. The extensions were relatively stable towards colchicine post-treatment. To authors’ knowledge, this effect has not yet been described for heavy metals. The similarity with 20-hydroxyecdysone-treated cells and the occurrence of cytoplasmic feet in insect cells is discussed.     

蛋白激酶C对鼻咽癌细胞P21~(ras)表达的影响

使用蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）抑制剂与抗Ｐ２１Ｈ－ｒａｓ单抗,通过免疫细胞化学,双参数流式细胞仪等方法,探讨鼻咽癌细胞ＣＮＥ－２Ｚ中ＰＫＣ与Ｈ－ｒａｓ表达的关系。结果：１）Ｐ２１ｒａｓ蛋白在ＣＮＥ－２Ｚ细胞主要在胞膜（２７％）与胞浆（９３．７％）表达。作用于ＰＫＣ调节区的抑制剂ｓｐｈｉｎｇｏｓｉｎｅ（ＳＳ）（２×１０－５ｍｏｌ／Ｌ）与作用于催化区的ｓｔａｕｒｏｓｐｏｒｉｎｅ（ＳＴ）（２×１０－６ｍｏｌ／Ｌ）在明显抑制细胞生长的浓度使Ｐ２１ｒａｓ表达程度均减弱,胞膜阳性率明显降低,分别为５．６％与１．６％。２）蛋白质－ＤＮＡ双参数流式细胞法测定发现在Ｇ１期细胞群Ｒａｓ蛋白表达差异较大,提示Ｒａｓ蛋白主要在Ｇ１期合成逐渐增多;经ＰＫＣ抑制剂ＳＳ与ＳＴ处理后,Ｇ１期细胞表达的差异减小,说明ＰＫＣ抑制剂抑制了Ｇ１期Ｒａｓ蛋白合成。本研究结果提示：ＰＫＣ对Ｒａｓ蛋白向发挥作用的部位胞膜的转移具有一定的调控作用。Ｒａｓ蛋白的表达可能与ＣＮＥ－２Ｚ细胞Ｇ１／Ｓ期的过渡有关。     

硼营养与植物细胞壁关系的研究进展

植物必需的７种微量元素中,植物缺硼最为普遍,因而引起人们的广泛关注。半个多世纪以来,学者们对硼的生理功能和硼肥应用进行了广泛的研究,为农业生产作出了重大贡献。但由于硼元素的特殊性,至今对硼在植物体内的存在形式和基本生理功能仍不十分清楚。不同植物的缺硼症状尽管各不相同,但一个显著的共同特征就是根尖和茎尖的伸长首先受到抑制。顶端生长依赖于细胞分裂和细胞伸长,由此可见,硼必然首先影响分生组织的细胞分裂和细胞伸长。硼对细胞分裂的影响已进行了大量的研究。Ｗｈｉｔｔｉｎｇｔｏｎ〔１〕曾报道缺硼减少大豆有丝分…     

人肝癌细胞株H9101的建立及其细胞生物学特性研究

从厦门市肝癌高发的同安地区肝癌病人肝癌组织建立了人原发性肝细胞癌细胞系H9101.它生长迅速,群体倍增时间平均为38小时,对小牛血清的依赖性较低(1%).体外培养的H9101细胞贴壁生长,扫描和透射电镜下见细胞有丰富细长微绒毛.H9101细胞具有较高的软琼脂克隆形成率(1/200细胞)和裸鼠异种移植成瘤能力(100%).瘤细胞在ConA处理后呈较强的凝集性,在ConA 50ug/ml和100μg/ml时细胞凝集率分别为61%和92%.瘤细胞分泌微量的AFP,用1%DMSO和1.5×10-5mol/L地塞米松处理10天后上升到(140ng/ml/1×105细胞/24小时),且HBsAg转呈阳性.H9101细胞γ-谷氨酰转肽酶活性达5.42U±0.11U/mg,酪氨酸α酮戊二酸转肽酶活性达14.24U±1.50U/mg,与正常人肝细胞者相比差异显著(分别为P＜0.001和P＜0.01).H9101细胞染色体数为非整倍体,众数分布在52条-82条,具人类细胞染色体特征,其DNA经PCR扩增显示HBV DNA特异性条带.H9101细胞具端粒酶活性,是细胞连续传代和建系的保证;它恶性程度高、整合HBVDNA和具人肝细胞癌生物学基本特征,可为肝癌分子生物学研究提供有价值的实验材料.