尼龙网固定化果胶酶的制备及其性质研究

用尼龙网作载体,经3-二甲氨基丙胺活化,用戊二醛将果胶酶固定化。所得固定化酶Km值与自然酶接近;对温度的稳定性有较大的提高,100℃保温30min才能使其失活。固定化酶在较宽的pH范围内能保持其正常活力,它对金属离子抑制剂的耐受性有较显著的提高,用0.5％果胶溶液作底物,重复使用10次后酶活力保留44％。固定化果胶酶与自然酶相比较,对不同果汁的澄清效果不同。固定化果胶酶在无保护剂存在的条件下,室温放置四个月活力不减少。     

固定化过氧化物酶丝素膜的制备及其性质

家蚕丝素经高浓度的中性盐氯化钙溶解后,制成了固定化过氧化物酶丝素膜,对这种酶膜的活性和理化特性作了分析,结果表明这种酶膜的活性高,酶促反应温度范围宽,最适pH5.0-7.0,热稳定性也较游离酶好,这与用溴化锂溶解丝素后制成的固定化过氧化物酶膜相仿.因此,用这种方法制成的丝素膜同样是一种良好的固定化酶的生物材料.     

枯草芽孢杆菌FM208849产果胶酶的固定化及酶学性质研究

为了提高游离果胶酶的稳定性,对罗布麻脱胶具有特异性的枯草芽孢杆菌(FM208849)进行产果胶酶发酵时,采用交联酶聚集体(CLEAs)技术制备固定化果胶酶,并对交联果胶酶聚集体的制备条件、酶学性质进行研究。结果表明,游离果胶酶经80%饱和硫酸铵沉淀后,在30℃,经4%的戊二醛溶液交联135 min,所形成的交联果胶酶聚集体的活回收率为61.5%,其最适反应温度45℃和最适pH10,在对交联果胶酶聚集体的热稳定性和有机溶剂稳定性分析中,均显示了比游离酶更高的稳定性。     

草酸青霉液体发酵产果胶酶条件的优化及其产物的酶学性质

采用响应面分析法对草酸青霉（Penicillium oxalicum）L5菌株液体发酵产果胶酶条件进行了优化。结果表明：桔皮粉、米糠及硫酸铵的添加量分别为4.85%、5.89%、0.97%,摇瓶初始pH为6.0~8.0,接种量为9%时,优化后的果胶酶活达54 391.70 U,是初始酶活18 148.00 U的3倍。另外,对其果胶酶性质进行了初步探讨,结果表明：该酶较适反应温度和pH分别为50℃和5.0;30~50℃时有较好的热稳定性,pH值为5.0时稳定性最佳。     

类芽胞杆菌碱性果胶裂解酶的纯化与酶学性质表征

从类芽胞杆菌Paenibacillus sp.WZ008的发酵上清液中纯化得到一个高活力碱性果胶裂解酶,经SDS-PAGE电泳估算其亚基相对分子质量为4.5×104。通过对该酶进行酶学性质研究发现：该酶能催化裂解果胶酸、低酯果胶和高酯果胶;酶催化反应最适温度范围为55～60℃,最适pH为9.6,在最适条件下以低酯果胶为底物酶的比酶活达3 021.6 U/mg;Ca2＋能增强该酶的活力,而Mn2＋,Ba2＋和EDTA强烈抑制该酶活力;当没有Ca2＋存在时,高度酯化的果胶是该酶的最适底物,在4 mmol/L Ca2＋存在时,该酶以果胶酸为底物比酶活最高（25 467 U/mg）。该酶N端序列比对分析发现与类芽胞杆菌Paenibacillus amylolyticus strain 27c64果胶裂解酶高度同源。     

海带发酵降解中相关海洋功能菌的分离、鉴定与筛选

目的 从海带养殖环境中筛选有效降解海带的海洋功能菌,对海带进行降解处理,提高利用率,增加海带原料价值。方法 采用以果胶或海藻酸钠为唯一碳源的选择性培养基挑选含有果胶酶、褐藻酸裂解酶的菌株;测定海带发酵液中海藻酸含量,复筛降解效果好的单菌及复合菌;16S rDNA测序对菌种进行鉴定。结果 使用含10%鲜海带的富集培养基培养48 h,其中降解效果较好的为1-2和3-10菌种的组合,其降解量为95%。结论 经上述研究选出有效的降解海带功能菌1-2和3-10,其降解海带效果较好,对海带利用率高。     

海带发酵降解中相关海洋功能菌的分离、鉴定与筛选CSCD

目的从海带养殖环境中筛选有效降解海带的海洋功能菌,对海带进行降解处理,提高利用率,增加海带原料价值。方法采用以果胶或海藻酸钠为唯一碳源的选择性培养基挑选含有果胶酶、褐藻酸裂解酶的菌株;测定海带发酵液中海藻酸含量,复筛降解效果好的单菌及复合菌;16S rDNA测序对菌种进行鉴定。结果使用含10%鲜海带的富集培养基培养48 h,其中降解效果较好的为1-2和3-10菌种的组合,其降解量为95%。结论经上述研究选出有效的降解海带功能菌1-2和3-10,其降解海带效果较好,对海带利用率高。     

放线菌果胶酶产酶条件及酶促反应条件的研究

从埋麻土壤中分离到放线菌２９８株,经初筛和复筛得到产酶活性较高的一株放线菌５－７１。最适产酶条件是：果胶０．５％,葡萄糖０．５％,蛋白胨０．５％,酵母粉０．１％,Ｋ２ＨＰＯ４ ０．１％,ＫＨ２ＰＯ４ ０．１％,ＮａＣｌ０．１％,ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．０５％,ｐＨ８．０。２５℃培养３天达产酶高峰。通气量对产酶影响不大。酶促反应最适条件是：ｐＨ９．６,４５℃,底物果胶浓度０．７５％,作用时间９０ｍｉ     

蒜氨酸酶的固定化及其酶学性质研究

为了提高蒜氨酸酶的稳定性并实现酶的反复利用,研究了影响蒜氨酸酶固定化的因素及固定化蒜氨酸酶的酶学性质。蒜氨酸酶的固定化以壳聚糖微球为载体,戊二醛为交联剂,固定化的最适条件为：戊二醛浓度4%,给酶量20.2U,交联时间2h。固定化蒜氨酸酶的最适pH值7.0,最适温度35℃,米氏常数Km 7.9 mmol/L,操作稳定性比较好,连续使用10次后酶活力损失低于10%。     

细菌碱性果胶酶的酶学特性及其应用研究

碱性果胶酶是最适作用pH值在碱性范围的果胶酶,由于其在碱性环境下活性较高的特点,在纺织和造纸等领域有良好的应用前景。从分子特性和催化特征等方面综述了源自野生菌和重组菌的细菌碱性果胶酶的酶学特性,并介绍了碱性果胶酶在棉织物精练、生物制浆和诱导植物抗病等领域的最新应用。     

海洋扩展青霉（Penicillium expansum）果胶酶的纯化及酶学性质研究

通过超滤、DEAE Sephadex A-50离子交换层析、Sephadex G-100凝胶过滤层析,对一株来自海洋的扩展青霉(Penicillium expansum)所产果胶酶进行分离纯化,得到电泳纯的果胶酶,经SDS-PAGE电泳显示单一条带,且果胶酶亚基的分子质量约为63.96 ku,纯化倍数为24.13,回收率为36.32%。酶学性质研究结果表明,该果胶酶的最适反应温度为50℃,最适p H值5.4,在p H值4.6~6.2比较稳定,Mg2+、Ca2+对果胶酶活力有明显激活作用,Cu2+有明显抑制作用,以果胶粉为底物的Vmax为393.56μg/(min·m L),Km为3.34 mg/m L。     

蟾蜍血清梭曼水解酶的酶学性质及其单克隆抗体的制备

蟾蜍血清梭曼水解酶(TSS)已被纯化.采用微量联苯胺法对该酶的酶学性质进行研究表明,该酶有两个最适pH,分别是pH7和pH10;最适作用温度为30℃;以梭曼为底物,在pH7.73,1/15 mol/L PB, 30℃条件下测定该酶的米氏常数为5.864 mmol/L,最大反应速度为692 μmol/L. Mg2+、Ca2+对TSS有激活作用,而Ni2+、Cu2+、Fe2+、Na+、K+对酶活性无明显影响.用TSS免疫Bal b/c小鼠,取其脾细胞在PEG4000作用下与P3x63-Ag8.653小鼠骨髓瘤细胞进行融合,获得8株能分泌抗TSS单克隆抗体的杂交瘤细胞株:AC11,AE8,DA3,DE5,DG3,EB4,EC4,EH4.用酶联免疫吸附试验对其分泌的抗体滴度进行检测,其腹水滴度最高可达2×107,对其中4株杂交瘤分泌的抗体相对亲合力进行测定,它们的大小顺序为DA3＞EH4＞DG3＞EC4;对其中6株杂交瘤分泌的抗体进行免疫球蛋白类型鉴定表明,6株单抗均为IgG1类.上述8株杂交瘤在体外连续培养6个月,分泌抗体水平未见下降.     

鲍鱼内脏酶解物可调节肠道菌群及短链脂肪酸缓解小鼠系统低度炎症

为探究鲍鱼内脏酶解物对辣椒素诱导的系统低度炎症模型小鼠炎性因子、肠道菌群及短链脂肪酸的影响,将30只雄性小鼠随机分为6组：空白对照组、辣椒素致炎模型组、鱼油对照组、鲍鱼内脏酶解物低、中、高剂量组(0.30、0.60、1.20 g/(kg·d)),干预7 d后,ELISA法检测小鼠血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10),鲎试剂法测定小鼠血清中细菌脂多糖(LPS)的含量,16S rRNA基因高通量测序和生物信息学方法考察小鼠肠道菌群的结构组成,GC-MS法测定小鼠粪便中短链脂肪酸的含量。结果显示,辣椒素模型组小鼠血清中TNF-α、IL-6和LPS含量显著升高,肠道菌群OTUs数显著降低,菌群各门、属水平比例存在显著变化,其中寡养单胞菌属(Stenotrophomonas)和棒状杆菌属(Corynebactrium)等有害相对丰度显著增加,粪便中的乙酸、丙酸以及总短链脂肪酸含量显著降低,异戊酸含量显著升高,而经鲍鱼内脏酶解物干预后,小鼠血清中IL-1β、IL-6和LPS含量显著降低,肠道中乳杆菌属(La...     

右旋糖酐酶产生菌的筛选及其酶学性质的比较研究

从3162株真菌中筛出具有右旋糖酐酶话力的菌株528株,其中黄柄白曲霉(Asp. Flavi-pes)、蠕形青霉(Pen. Vermiculatum)、产黄青霉(Pen. Chrysogerum)和构巢曲霉(Asp. Nid-ulans)也产该酶,这在文献中尚未见报道。通过复筛,从中选出5株,它们分属黄柄白曲霉(Asp. Flavipe、二株)、肉色曲霉(Asp.carneus)、焦曲霉(Asp. Ustus)和淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus)(各一株)。对它们的产酶特性作了一系列比较研究,发现所有酶的最适温度皆为50--55℃,最适作用PH为5.0—5.5,酶解最终产物是异麦芽塘、异麦芽三糖及少量葡萄糖,故它们皆属内切型右旋糖酐酶。此外它们在温度和PH稳定性、其它酶活力存在的情况、对不同底物作用的情况、凝胶电泳模式、金属离子和一些蛋白质变性剂的影响等方面都有一些差异。通过比较发现,由淡紫拟青霉8523菌产生的右旋糖酐酶具有较好的酶学性质：它在50"0保温24小时和60℃保温1小时,剩余话力分别为95％和90％,在pH 3．5—1 0．5很宽的范围内是稳定的,此外它对SDS和脲的耐受性也较其它菌株的酶好。     

商品果胶酶中endo—PG的分离纯化及其部分性质研究

以Ａ．ｎｉｇｅｒ来源的果胶酶为材料,经过ＣＭ－Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｃ－５０及Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１００两步骤分离化得到电泳均一的ｅｎｄｏ－ＰＧ１及ｅｎｄｏ－ＰＧ２其亚基分子量分别为３５ｋＤ及３７ｋＤ,含糖量为１１．２２％及８．３％,最大此吸收峰分别在２７４ｎｍ及２６９ｎｍ处,氨基酸组成分析结果表明Ｇｌｙ含量较高,Ｍｅｔ含量较低,不含Ｃｙｓ,并且酸性氨基酸含量高于碱性氨基酸,圆二色谱结果表明二级结构     

白灵侧耳漆酶分离纯化及其酶学性质研究

为了探索白灵侧耳Pleurotus eryngii var.tuoliensis漆酶性质,以白灵侧耳菌株00485为试验材料,从发酵液中分离纯化得到胞外漆酶并对其酶学性质进行测定。纯化流程依次为DEAE-Cellulose阴离子交换层析,CM-Cellulose阳离子交换层析,SP-Sepharose强阳离子交换层析以及Superdex 75凝胶过滤层析,获得胞外白灵侧耳漆酶(Pn Lac)。SDS-PAGE检测结果表明Pn Lac为65k Da的单一蛋白。Pn Lac经过胰蛋白酶水解得到3种肽段,经过NBCI-BLAST后发现它们与糙皮侧耳、环柄韧伞、刺芹侧耳等的漆酶具有同源性。底物为2,2-联氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二铵盐(ABTS)时该种漆酶的最适反应温度和p H分别为50℃和3.0,Ca2+和Hg2+能够抑制它的活性,相反地Cu2+和Mn2+能够提高它的活性,米氏常数Km和Vmax分别是0.17mmol/L和1.76OD/min/U。     

天然巴曲酶的酶学性质研究

目的 研究巴西矛头蝮蛇蛇毒中纯化的天然巴曲酶的酶学性质.方法 测定不同的温度、pH值和金属离子等条件对重组定点突变巴曲酶活性的影响.结果 实验表明,该酶在温度30～40℃,pH 6.5～9.0活性较为稳定;其最适反应温度为37℃,pH为7.5;Mg2+、K+和Ca2+离子对酶活有激活作用,而Cu2+、Fe2+和Zn2+离子对该酶有抑制作用.结论 从蛇毒提取的天然巴曲酶酶学性质比较稳定.     

黏细菌漆酶序列筛选及其重组酶酶学性质

漆酶是一种应用广泛的绿色环保的多酚氧化酶。漆酶过去被认为广泛存在于植物、昆虫和真菌中,而近年来,越来越多的细菌中也发现了漆酶的存在。黏细菌是一类重要的资源菌,但与一般细菌相比,较难分离和纯化。文中利用生物信息学的方法,综合应用Blast和隐马尔可夫模型方法对黏细菌蛋白质组数据库进行搜索,并根据多铜氧化酶的保守铜离子结合位点进行进一步筛选,获得30个候选黏细菌漆酶序列。挑选其中9个,在大肠杆菌中进行重组表达。利用2,6-甲氧基苯酚(DMP)等常用漆酶底物检测重组酶的催化氧化活性,其中7个重组蛋白具有漆酶催化活性。选择1个对2,6-甲氧基苯酚(DMP)具有较高氧化活性的重组酶(命名为rSC-2),通过Ni-NTA亲和层析柱纯化rSC-2,测试其酶学性质。纯化的rSC-2蛋白分子量约57 kDa,在最适反应条件下,rSC-2催化DMP反应的比酶活为0.27 U/mg。催化DMP反应的最适温度为60℃,最适pH为7.0。rSC-2在pH 7.0-8.0有较高酶活,在60℃孵育1 h保留50%以上剩余酶活。低浓度的Ca~(2+)对酶活有一定的促进作用,而较高浓度的Fe~(3+)、Co~(2+)、Ba~(2+)对酶活的抑制作用较明显。这是首次对黏细菌漆酶序列进行系统性的生物信息学分析,并实现纤维堆囊菌Sorangium cellulosum序列来源的漆酶活性蛋白在大肠杆菌细胞中重组表达。