人转化生长因子β1 cDNA在COS－7细胞中的表达

在测定了ＴＧＦβ１全长序列的基础上,构建了两个ＴＧＦβ１的表达载体ｐＣＭＶβ和ｐＳＶＬβ;分别从转录水平和翻译水平检测了这两个载体在ＣＯＳ－７细胞中的表达。同时利用ＣＯＳ－７短暂表达系统,建立了ＴＧＦβ１的生物测活法;并分别研究了上清收获时间、表达载体、转染方法对ＴＧＦβ１表达的影响     

人转化生长因子β1在大肠杆菌中的表达——Ⅰ.胞内直接表达

采用PCR技术 ,扩增了人转化生长因子β1 (hTGFβ1 )成熟肽基因 ,并对其进行了全序列测定 .采用DH5α/ pBV2 2 0表达系统 ,使TGFβ1在大肠杆菌胞内的表达达到 1 6 % .通过N端氨基酸序列测定和免疫印迹分析 ,证实重组蛋白为hTGFβ1单体蛋白 .采用谷胱甘肽法或CHAPS/DMSO法 ,使重组蛋白的复性率达到 30 % .通过纯化获得了银染一条带的重组蛋白 ,MTT法对Mv1Lu细胞的测活表明 ,重组蛋白具有较强的生物活性     

人转化生长因子β1cDNA在COS—7细胞中的表达

在测定了ＴＧＦβ１全长序列的基础上,构建了两个ＴＧＦβ１的表达载达ｐＣＭＶβ和ｐＳＶＬβ;分别从转录水平和翻译水平检测了这两个载本在ＣＯＳ－７细胞中的表达。同时利用ＣＯＳ－７短暂表达系统,建立了ＴＧＦβ１的生物测活法;并分别研究了上清收获时间、表达载体、转染方法对ＴＧＦβ１表达的影响。     

E.coli分泌表达载体的构建和人表皮生长因子在E.coli中的分泌…

采用ＰＣＲ技术从Ｅ．ｃｏｌｉ基因组片中克隆出碱性磷酸酯酶的启动子和信号肽序列,在ＰｈｏＡ启动子５端设计了ＥｃｏＲⅠ酶位点,在信号肽编码序列３端设计了ＨｉｎｄⅢ酶切位点,将ＰＣＲ产物酶切后ＥｃｏＲⅠ－ＨｉｎｄⅢ片段克隆至ｐＢＲ３２２的ＥｃｏＲⅠ－ＨｉｎｄⅢ倍点,组构出含有ＰｈｏＡ启动子和信号肽序列的分泌表达载体ｐＢＭ－Ｐｈｏ－,之后将人表皮生长因子的成熟肽基因克隆至该载体,使之有Ｅ．ｃｏｌｉ中获得分     

转化生长因子β1与老年性痴呆

老年性痴呆 (简称ＡＤ)是一种渐进性大脑退行性变性病 ,其发病率随年龄增长而显著升高 ,6 5～ 80岁人群约为 5 % ,80岁以上者可达 2 0 %。我国 6 0岁以上的人口已近1 .3亿 ,ＡＤ即将成为医学和社会面临的严峻问题 ,已引起政府和医学工作者的关注。对ＡＤ的研究在美国、欧州和日本倍受重视 ,并取得了一定成果[1] 。β 淀粉样蛋白 (Ａβ)在中枢神经系统中的沉积是ＡＤ的一个标志 ,并可能是神经退收稿日期 :2 0 0 0 0 5 11作者简介 :吴晓英 ( 196 1— ) ,女 ,硕士 ,讲师。化的一个原因[2 ] 。在脑对损伤的反应中 ,转化生长因子 β1 (ＴＧＦ …     

转化生长因子β1在脑积水发生中的作用

脑积水是以脑脊液流动障碍和脑萎缩为主要特点的神经系统疾病.遗传突变、先天性畸形、感染、颅内出血和肿瘤等均能导致不同程度的脑积水.转化生长因子β1(TGF-β1)是脑发育过程中一种重要的生长因子,该基因过表达小鼠可通过调节基质金属蛋白酶-9和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1的表达,改变细胞外基质环境,从而导致脑积水形成.本文就TGF-β1在脑积水发生中的作用做一综述.     

转化生长因子-β激活激酶1在病理性心肌肥大中的作用研究进展

转化生长因子-β激活激酶1 (transforming growth factor-β-activated kinase 1, TAK1)是促分裂原活化蛋白激酶激酶激酶(mitogen-activated protein kinase kinase kinase, MAPKKK)家族的成员之一,参与调节一些重要的生物功能。心肌肥大分为生理性心肌肥大和病理性心肌肥大,它们的发生机制和蛋白表达不同。TAK1既参与正常心肌的发育,也在调节病理性心肌肥大发生和发展中发挥着重要的作用。血管紧张素II (angiotensin II, AngII)或压力负荷通过不同的方式,如经低氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α, HIF-1α)促进TAK1转录和表达,或经转化生长因子-β1 (transforming growth factor-β1, TGF-β1)、甲状腺激素及泛素蛋白酶等促进TAK1磷酸化或泛素化,诱导病理性心肌肥大。本文就TAK1在病理性心肌肥大发生和发展中的作用进行综述,为临床心肌肥大的防治提供重要策略和潜在靶点。     

大鼠肝癌发生过程中转化生长因子-β1的表达及意义

为了进一步探讨转化生长因子-β1在肝癌发生中的作用和意义。本采用免疫组织化学ABC法,对二乙基亚硝胺（DEN）诱发大鼠肝癌发生过程中转化生长因子-β1（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）表达情况进行了观察。结果显示;在正常大鼠肝脏,TGF-β1的表达只局限于血窦内皮细胞或枯否细胞,汇管区血管内皮细胞及胆管上皮细胞,肝细胞呈TGF-β1阴性表达,诱癌早期（4-8周）,大鼠肝小叶内除血窦内皮细胞或枯否细胞呈TGF-β1阳性表达外,可见少量散在分布的肝细胞呈TGF-β1阳性表达,阳性肝细胞胞质内可见棕褐色阳性反应颗粒,随着肝癌发展,TGF-β1阳性肝细胞逐渐增多,至诱癌晚期（18周）,癌结节内的大多数肝癌细胞呈TGF-β1阳性表达。本研究显示TGF-β1与肝癌的发生和发展密切相关。至诱癌晚期（18周）,癌结节内的大多数肝癌细胞呈TGF-β1阳性表达,本研究显示TGF-β1与肝癌的发生和发展密切相关。     

重组人碱性成纤维细胞生长因子在大肠杆菌中的高效表达*

利用基因改造的方法可以优化外源基因在大肠杆菌中的表达。利用逆转录PCR技术从原代培养的人成纤维细胞中克隆出人碱性成纤维细胞生长因子基因,在不改变氨基酸序列的前提下对该基因的上游部分序列进行改造,并将其插入表达载体pET-3c,转入大肠杆菌阳BL21（DE3）,IPTG诱导表达,表达蛋白占菌体总蛋白的30％以上,并具有良好的生物活性。     

瘦素和转化生长因子β1在大鼠肝纤维化过程中的作用

目的探讨瘦素和转化生长因子β1（transforming growthβ1,TGF-β1）在肝纤维化发生、发展过程中的作用。方法雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组和纤维化模型1周组、2周组、4周组、6周组。纤维化模型各组以CCl4造成化学性肝损伤。常规HE染色观察肝脏病变;检测血浆和肝组织瘦素及TGF-β1水平;天狼猩红胶原染色和肝组织羟脯氨酸（Hyp）含量测定观察肝纤维化程度,并对肝组织瘦素水平、TGF-β1水平及肝纤维化指数（FI）进行相关性分析;赖氏法测定血浆丙氨酸氨基转移酶（ALT）。结果与正常对照组比较,纤维化模型各组血清和肝组织瘦素和TGF-β1水平显著升高（P〈0.05）,且纤维化模型各组肝组织瘦素水平、TGF-β1水平及FI之间两两均呈显著正相关。结论肝组织瘦素在肝纤维化发病过程中具有独立的致病作用,并可能通过激活TGF-β1通路导致肝维化的形成。     

Aβ1-42淀粉样蛋白在大肠杆菌中的可溶性表达

本研究中用融合标签技术通过单质粒转化和双质粒转化分别促进Aβ1-42淀粉样蛋白的可溶性表达.构建重组载体pET(yd-b42)、pET(Msb-b42)、pET(Od-b42)、pAY-sls[ydb42]、pAY-sls[tydb42],并在大肠杆菌中表达,通过SDS-PAGE验证分析.标签yd、Msb、Od、tyd都能很好的促进ABβ1-42淀粉样蛋白可溶性表达,其中yd、tyd的促溶效果最好.Aβ1-42淀粉样蛋白能在大肠杆菌中可溶性表达.为阿尔茨海默病的治疗提供进一步理论基础.     

转化生长因子β3在先天性唇腭裂裂隙缘组织中的表达

探讨突变TGF-β     

rhGH在大肠杆菌周质中的分泌表达

在大肠杆菌周质中分泌表达rhCH既有利于消除其在临床应用上的抗原性又有利于提取纯化，在rhCH的发酵生产中越来越受到青睐。就rhGH在大肠杆菌中的分泌表达机制以及启动子、引导序列、宿主茵、培养基和培养条件对分泌表达效率的影响等方面进行了综述。     

人转化生长因子β1 cDNA的克隆及其原核表达

转化生长因子β１（ＴＧＦβ１）属于生物学功能很广泛的ＴＧＦβ超家族的一个成员,对细胞增殖和分化、免疫系统、细胞粘连、肿瘤发生与恶变、神经系统的发育与建成等方面都有重要作用［１～３］。临床上,ＴＧＦβ１可用于创伤愈合以及软骨和骨组织损伤的修复,特...     

转化生长因子-β1通过促进结缔组织生长因子表达抑制胰腺癌细胞PANC-1增殖

目的:研究转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)和结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)对人胰腺癌细胞系PANC-1增殖的影响。方法:首先利用MTT检测重组TGF-β1、CTGF及anti-CTGF抗体处理PANC-1细胞后,细胞的增殖状态,用流式细胞仪(Flow cytometer,FCM)检测转染pcDNA3.1(-)-CTGF后PANC-1细胞的凋亡情况,最后利用RT-PCR检测TGF-β1作用PANC-1细胞后CTGF mRNA的表达。结果:TGF-β1和CTGF均呈浓度依赖性抑制PANC-1细胞增殖,加入anti-CTGF抗体可以取消TGF-β1对PANC-1细胞增殖的抑制作用;FCM结果显示pcDNA3.1(-)-CTGF质粒转染促进PANC-1细胞凋亡;RT-PCR则证明TGF-β1促进PANC-1细胞中CTGF mRNA表达。结论:TGF-β1可能通过促进CTGF表达来发挥抑制胰腺癌细胞PANC-1增殖的作用。     

人转化生长因子β1在大肠杆菌中的分泌表达研究

根据表达产物在大肠杆菌细胞中的定位,可将外源基因的表达分成胞内直接表达和分泌表达两种形式:其中分泌表达又可进一步分成周质分泌表达和胞外培养基外泌(excretion)表达两种方式。采用分泌表达可获得具有天然一级结构、正确折叠、组装的重组蛋白,但因表达水平低一直难以用于工程研究。近年来的研究表明,新生多肽链的跨内膜转运     

E．coli分泌表达载体的构建和人表皮生长因子在E．coli中的分泌性表达

采用ＰＣＲ技术从Ｅ．ｃｏｌｉ基因组片段中克隆出碱性磷酸酯酶（ＰｈｏＡ）的启动子和信号肽序列．在ＰｈｏＡ启动予５＇端设计了ＥｃｏＲⅠ酶切位点,在信号肽编码序列３＇端设计了ＨｉｎｄⅢ酶切位点．将ＰＣＲ产物酶切后ＥｃｏＲⅠ－ＨｉｎｄⅢ片段克隆至ｐＢＲ３２２的ＥｃｏＲⅠ－ＨｉｎｄⅢ位点,组构出含有ＰｈｏＡ启动子和信号肽序列的分泌表达载体ｐＢＭ－Ｐｈｏ－１．之后将人表皮生长因子的成熟肽基因克隆至该载体,使之在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得分泌表达,另采用ｐＩＮⅢ载体系统以分泌方式表达了人表皮生长因子。     

人胰岛素样生长因子Ⅰ在大肠杆菌中的表达研究

胰岛素样生长因子Ⅰ（ＩＧＦ－Ⅰ）是一种多功能细胞增殖调控因子,它对许多疾病有较好的治疗作用．为了获得大量的ＩＧＦ－Ⅰ产品,在测定了ＩＧＦ－Ⅰ全长序列的基础上,构建了ＩＧＦ－Ⅰ表达载体ｐＢＶＩＧＦ,经热诱导表达后,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析表明：含有重组表达质粒的菌株可表达出７．６ｋＤ的蛋白．研究了不同菌株对ＩＧＦ－Ⅰ表达的影响．ＩＧＦ－Ⅰ的表达水平可达１５ｍｇ／Ｌ．重组蛋白主要以包涵体形式存在,进行了初步纯化和复性研究,Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹表明重组蛋白具有ＩＧＦ－Ⅰ的抗原性．并初步建立了ＩＧＦ－Ⅰ生物活性测定方法．