吩噻嗪类钙调素抑制剂对芽殖酵母(Saccharomyces cerevisiae)和粟酒裂殖酵母(Schizosaccharomyces pombe)细胞增殖的不同效应

低浓度的TFP、CPZ及FPZ能明显促进S．Pombe细胞的增殖,培养液中Ca2+浓度越低,TFP等的促进作用越显著,Ca2+与TFP具有协同促进S.pombe增殖的功能;但20μmol／LTFP能终止S．Cerevisiae细胞周期的运转。TFP的细胞膜通透性研究表明,20μmol／LTFP就能进入到S.cerevisiae细胞中,但不易穿过S．Pombe细胞膜却能明显促进Ca2+的内流,引起S.pombe胞内Ca2+总量的迅速增加。因此认为低度的TFP促进S.pombe细胞的增殖,不是因为TFP进入到胞内作为CaM的抑制剂而起的作用,而是通过促进胞外钙的内流从而促进S．Pombe细胞的增殖。     

酿酒酵母细胞增殖对Ca^2＋需求的新证据

本文研究了酿酒酵母细胞增殖对Ca^2 需求的证据。结果表明：SD—Ca培养基中外加1mmol/L。比的Ca^2 明显促进酿酒酵母细胞增殖,外源Ca^2 浓度在0—20mmol/L比范围内变动时,随Ca^2 浓度增加,细胞生长到达稳定期的终浓度也越大;5、10mmol/L。比的EGTA可明显延缓细胞生长的延滞期,但是最终不能抑制细胞增殖：酿酒酵母在SD—Ca培养基中继代培养4次,随增殖代数增加,细胞总钙含量没有明显变化,说明酵母能够在低钙介质中生长可能是因为具有捕捉和富集钙的功能;以Fluo-3作为胞质Ca^2 指示剂,通过激光扫描共聚焦显微镜观察,发现随胞外Ca^2 浓度增加,胞质中游离Ca^2 浓度也相应增加。这些证据都揭示了Ca^2 在酿酒酵母细胞增殖过程中是必需的。     

听毛细胞钙信号转导及其与细胞能动性的关系

应用激光扫描共聚焦显微镜和ｆｌｕｏ－３／ｆｕｒａ－ｒｅｄ双重荧光标记法,研究豚鼠耳蜗分离外毛细胞钙信号转导及其与细胞能动性的关系。外毛细胞（ｏｕｔｅｒｈａｉｒｃｅｌ,ＯＨＣ）受药物或机械刺激后,其钙信号起源于一侧质膜,可形成钙波传向全细胞,对其中１个ＯＨＣ测得传播速度为０．０２５－０．０４７μｍ／ｓ。钙信号转导过程中各亚细胞区域游离钙浓度增加幅度不同。胞内游离钙增高时伴有细胞长度变化,缩短者占６／１０,伸长者占４／１０。对照组（不予刺激且胞内游离钙无变化者）３个外毛细胞中,缩短者２个,长度无变化者１个。实验表明,听毛细胞受刺激后可产生钙波,钙信号具有不均匀性,外毛细胞的钙依赖慢运动表现为细胞伸长,细胞缩短则在胞内游离钙浓度升高或保持于静态基准浓度时均可发生。     

青藤碱对培养VSMC MAPK、PKC活性和细胞[Ca^2＋]i的影响

目的：观察青藤碱对血管平滑肌细胞（VSMC）丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）、蛋白激酶C（PKC）活性和胞内游离钙浓度（[Ca^2＋i]）的影响。方法：将VSMC正常培养液、ox-LDL诱导血管内皮细胞（VEC）损伤的条件培养基、青藤碱加ox-LDL诱导VEC损伤的条件培养基等分别作用于VSMC,采用β-放射活性法等测定MAPK及PKC活性,荧光光度法检测VSMC[Ca^2＋]i。结果：VEC损伤条件培养基作用于VSMC后,与正常培养VSMC相比,细胞MAPK、PKC活性明显增加（P〈0．01）,细胞[Ca^2＋]i增加;青藤碱作用于VEC损伤条件培养基培养的VSMC后,与模型组相比,MAPK及PKC活性明显减少（P〈0．01）、细胞[Ca^2＋]i降低。结论：青藤碱抑制VSMC增殖的作用可能与拮抗MAPK、PKC活性和细胞[Ca^2＋]i的增加有关。     

钙通道与钙释放通道

1.Ca~(2+)的重要生理作用胞内游离钙浓度([Ca~(2+)])的变化调节着细胞的代谢、基因表达等细胞共有的活动,以及始动兴奋、收缩或出胞分泌以及激活和失活离子通道等细胞不同的反应。[Ca~(2+)]的升高主要依赖于胞外钙经质膜上的钙通道内流或/和胞内储存钙的释放。释放的内钙也是藉细胞器膜的钙释放通道进入胞浆。可见通道启闭活动的正常是维持[Ca~(2+)]正常的一个重要保证。2.离子通道及其分类离子通道是贯穿于质膜或细胞器膜的大分子蛋白质,其中央形成能通过离子的亲水性孔道(pores)。离子的跨膜转运是通过膜上通道蛋白的功能来完     

SH—SY5Y细胞的钙缓冲研究

目的：研究SH－SY5Y神经杂交瘤细胞的钙缓冲能力。方法：通过膜片钳手段,测量未分化的SH－SY5Y细胞钙离子通道电流;并应用显微荧光测量游离钙离子浓度和高钾去极化的方法,研究胞内Ca^2 浓度上升后浓度恢复的动力学过程。结果：未分化的SH－SY5Y细胞存在钙离子通道电流,在刺激时间间隔较短时（＜150s）,胞内钙浓度的恢复过程会由于缓冲机制的饱和而变慢;而时间间隔＞150s时,缓冲物质则可以基本恢复使得胞内钙的恢复过程基本保持不变。结论：钙缓冲蛋白在细胞内钙浓度的调节中起重要作用。     

Ca^2＋在粟酒裂殖酵母细胞周期时相中的作用

以粟酒裂殖酵母（Schizosaccharomyces pombe)为研究材料,研究了Ca^2 在细胞周期时相中的作用,当外源Ca^2 浓度在0.5-20mmol/L范围内,随Ca^2 浓度增加,细胞增殖速度加快,延滞期逐渐缩短,但SD-Ca(CaCl2省略）并不能终止Sch.pombe的细胞周期。采用缺氮对群体细胞进行同步化,并以EGTA螯合培养介质中低浓度的Ca^2 ,Sch.pomdbe细胞增殖被完全抑制。细胞流式法测定结果表明：细胞周期被终止在G1期,分析认为Ca^2 对Sch.pombe细胞增殖是必不可少的,外源Ca^2 在G1期向S期转化过程中起着关键性的作用。     

酿酒酵母和粟酒裂殖酵母细胞增殖对Ca~(2 )依赖性的比较研究

同样实验条件下Ca~(2 )对S.cerevisiae的增殖没有影响,但能明显促进S.pombe的增殖;Ca~(2 )螯合剂EGTA对S.cerevisiae的增殖没有明显抑制作用,但对S.pombe的增殖有显著的抑制作用,回加Ca~(2 )能够有效消除EGTA的抑制作用;而非特异性螯合剂EDTA虽然对两类酵母细胞的增殖都有抑制作用,但Ca~(2 )却不能消除EDTA的抑制作用,这样就直接指明了两类酵母对胞外Ca~(2 )的依赖性是不一样的。由于S.cerevisiae细胞的增殖速率比S.pombe细胞要快近3倍,且与转化细胞或肿瘤细胞具有类似的细胞增殖不依赖于胞外Ca~(2 )的特性,说明研究胞外Ca~(2 )对这两类酵母细胞增殖不同作用效应的机制,对搞清细胞周期失控与细胞转化之间的关系有重要的意义。     

fMLP诱导的中性粒细胞胞内游离钙离子浓度变化与细胞极性化过程

目的：观察不同浓度的fMLP诱导中性粒细胞的极性变化,并结合胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]i）变化曲线分析不同时相细胞的极性化变化,探讨二者之间的关系。方法：使用激光共聚焦显微镜对胞内[Ca^2＋]．变化进行监测,细胞极性化情况通过倒置显微镜来分析。结果：胞内[Ca^2＋]i变化主要包括静息期（0s）、快速上升期（10s）、快速下降期（150s）、慢速下降期（250s）和终末期等5个阶段,在这5个阶段的10s时细胞膜开始皱缩,启动细胞极性化过程,之后呈现为不断的极性化和去极性化过程。结论：游离钙离子浓度升高可能启动了中性粒细胞的极性化,但对之后的极性化过程影响不明显。     

某些金属离子对酿酒酵母和粟酒裂殖酵母的细胞增殖具有不同的作用效应

由于配制培养液所用试剂污染的金属离子已能满足酵母细胞生长需要,本文采用金属离子蟹合剂EDTA去除自由离子,然后回加某些金属离子方法研究了这些金属离子对酵母细胞增殖的影响,结果发现某些金属离子对S．pombe和S．cereisiae的细胞增殖具有不同的作用效应。实验表明,完全抑制S．pombe和S．cerevisiae的细胞增殖所需的EDTA浓度分别为0．5mmol／L和5mmol／L。Fe3＋不能恢复EDTA对S．cervisiae增殖的抑制作用,却能恢复EDTA对S．pombe增殖的抑制作用。Mn2＋则恰好相反,基本恢复EDTA对S．cerevisiae的抑制作用,却对EDTA抑制S．pombe的抑制作用恢复得很差。Zn2＋和Cu2＋能够恢复EDTA对S．cerevisiae和S.pombe的抑制作用。Mg2＋却不能恢复EDTA的抑制作用。这表明酵母增殖需某些金属离子的参与。金属离子浓度的测定和分析表明,EDTA的加入几乎不影响培养液中的自由Mg2＋浓度,而主要是影响Cu2＋和Zn2＋,这与前人报道的结果不一样。