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相似文献
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1.
大鼠20α羟类固醇脱氢酶(20α-Hydroxysteroid dehydrogenase,20αHSD)cDNA片段,被插入杆状病毒的转移载体pBlueBacⅢ,经野生型病毒DNA的共转染,从被转染的昆虫细胞中获得重组病毒。Northern blot分析,重组病毒感染细胞有20αHSD基因表达。感染细胞裂解液的Western印迹法分析,37kD的蛋白带被20αHSD抗体识别。体外酶活性测定发现,  相似文献   

2.
王健伟  李晓成 《病毒学报》1999,15(3):238-243
对蓝舌病毒结构蛋白VP7作为组特异性诊断抗原进行了研究,将编码BTV13主要组特异性抗原VP7的S7cDNA插入杆状病毒表达载体pFastBac1,通过同源重组获得了重组杆状病毒evBacBTVP7。用此重组病毒感染昆虫细胞获得VP7蛋白的高效表达,表达量可占细胞蛋白总量的12.4%。  相似文献   

3.
抗乙肝病毒表面抗原嵌合抗体基因在昆虫细胞中的表达   总被引:1,自引:1,他引:1  
应用杆状病毒表达系统在昆虫细胞中表达了抗乙肝病毒表面抗原(HBsAg)人-鼠嵌合抗体重,轻链基因,鼠源单克隆抗体OH3重,轻链可变区(VH,VL)cDNA分别与人免疫球蛋白恒区γ3,k,cDNA拼接成人-鼠嵌合抗体基因,含嵌合抗体的转移载体与线性化病毒DNA共转染Sf9细胞,并通过点杂交PCR扩增和Southernblot分析获得重组病毒。Westernblot和竞争ELISA表明以重组病毒感染的  相似文献   

4.
大鼠甘氨肽α—羟化单氧酶在昆虫细胞中的活性表达   总被引:2,自引:0,他引:2  
江智红  黄荣 《病毒学报》1998,14(3):246-252
将编码大鼠甘氨肽α-羟化单氧酶(PHM)cDNA基因,插入昆虫杆状病毒转移表达载体pBacPAK8,构建成表达质粒pBacPHM2,与修饰的银纹夜蛾核多角体病毒BacPAK6线性化DNA共转染秋粘虫细胞Sf21,通过同源重组,得到在核多角体蛋白基因启动子控制下的PHM基因的重组病毒BacPHM。用BacPHM感染Sf21细胞,无血清培养上清在72小时后检测到酰胺化酶最高活力;用细胞免疫组化法和免疫  相似文献   

5.
将中国株HIV-1B亚型gp120全基因序列克隆到杆状病毒转座载体pFastBacI中多角体启动子下游,构建成重组转座载体pFastBacI-gp120,利用细菌/杆状病毒(Bac to Bac)表达系统筛选重组杆状病毒,在昆虫细胞Sf9中高效表达了HIV-1的外膜糖蛋白gp120,SDS-PAGE和Western blot分析结果一致,证明表达了2种糖基化程度不同的gp120。  相似文献   

6.
白细胞介素1(IL-1)是一种重要的细胞因子,具有广泛的生物学活性。它通过与细胞表面的白细胞介素 1受体(IL-1R)结合而起作用。以杆状病毒为载体在昆虫细胞中克隆表达了小鼠I型可溶性白细胞介素1受体(sIL-1 RI)基因。以NIH/3T3细胞RNA为模板,采用RT-PCR方法扩增得到小鼠sIL-IRI的cDNA,克隆至杆状病毒转移载体pAcGP67B,将转移重组质粒与野生病毒ACNPV DNA共转染昆虫细胞Sf9,经同源重组得到重组杆状病毒rACNPV。应用经纯化的rAcNPV感染昆虫细胞Sf9,表达获得重组的sIL-1RI。经对亲和层析样品的SDS-PAGE分析和对IL-1β生物活性阻断作用实验证实,表达产物能够与其配基结合,并且能够分泌至细胞培养上清中。  相似文献   

7.
用杆状病毒表达载体系统表达小鼠Bruton酪氨酸激酶(Brutontyrosinekinase,Btk).构建重组转染载体时,于Btk起始码的上游插入了一段H902序列.用重组转染载体、苜蓿夜蛾核型多角体病毒线性DNA和质脂体共转染Sf9昆虫细胞,经过对重组杆状病毒三轮扩增后,用H902抗体检测表明,昆虫细胞中Btk的表达已达最高水平.对表达后Btk自身磷酸化检测表明,该激酶具有自身磷酸化活性.从而证实Btk在昆虫细胞中的表达获得了成功  相似文献   

8.
将蓝舌病毒(BTV)13型S7与L3基因同时插入杆状病毒双表达载体pEastBacDual,获得重组杆状病毒rvBacBTVP37。该病毒在昆虫细胞中同时高水平表达BTV13 VP3与VP7蛋白,可以高效自动装配出20面体的60 ̄70nm空心颗粒。分析表明,所获颗粒为空心的BTV核心样颗粒(CLP),其成分为VP3与VP7,不含BTV其它任何蛋白与核酸。这种装配需要VP3与VP7的共同参与,二者缺  相似文献   

9.
石晓宏  杭长寿 《病毒学报》1995,11(2):124-130
应用杆状病毒表达载体成功地表达了汉滩病毒76-118株(HTNV)核壳蛋白,将HTNVS基因插入杆状病毒转染质粒pAcYMIB的多角体基因启动子下游附近,与经Bsu361酶切线性化的杆状病毒(AcVEPA)DNA共同转染S19细胞,经空斑筛选获得了高效表达NP的重组杆状病毒(AcVHanS)。经SDS-PAGE和Western blot证实,表达产物与HTNV毒粒NP分子量均为50KD左右,紫外扫  相似文献   

10.
通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从丙肝患者的血清中分离出编码完整HCV核心蛋白(C区)的cDNA片段,并将其克隆到杆状病毒转移质粒中。重组转移质粒DNA与线性的杆状病毒DNA共转染Sf9昆虫细胞,经蚀斑筛选获得了带编码全部核心蛋白基因的重组杆状病毒。重组病毒感染细胞后表达HCV核心蛋白,其分子量的为20kD。免疫印染和酶联免疫实验表明,此重组蛋白能被人HCV阳性血清所识别。动物实验表明此重组蛋白能诱导小鼠产生特异性抗体。  相似文献   

11.
将抗癌胚抗原(CEA)单链抗体基因插入家蚕杆状病毒转移载体pBacPAK-His,与修饰的家蚕核型多角体病毒Bm-BacPAK DNA共转染家蚕细胞,经同源重组得到含有在多角体蛋白基因启动子控制下的抗CEA ScFv基因的重组病毒Bm-BacScFv。用重组病毒分别感染家蚕细胞和幼虫,在两者中均得到了高效表达,产物分子量为28kD,前者占细胞总蛋白的6%,后者为0.3mg/蚕。目的基因在家蚕细胞和  相似文献   

12.
重组家蚕病毒表达传染性法氏囊病病毒VP2蛋白   总被引:6,自引:1,他引:5  
将传染性囊病病毒HZ96株主要宿主保护性抗原VP2的cDNA基因克隆到杆状病毒转移载体pBac-PAK8中,获得重组转移载体pBacPAK-VP2,载体pBacPAK-VP2与修饰病毒Bm-BacPAK6线性化基因组DNA共转染单层家蚕Bombyx mori(Bm)N细胞,经细胞内同源重组,筛选到重组病毒。ELISA和Western免疫鲩迹结果表明,VP2在家蚕培养细胞和家蚕幼虫中均得到了表达。  相似文献   

13.
将大鼠酰胺化酶的信号肽及前导肽编码序列引入昆虫核多角体病毒转移表达载体,构建PABChGRF(Gly)、PABCIGFI融合基因的昆虫细胞分泌表达质粒pBacPAG2、pBacPAI,并与经修饰的银纹夜蛾核多角体病毒BacPAK6线性化DNA共转染秋粘虫细胞Sf21,通过同源重组、筛选和鉴定,得到它们的重组病毒BacPAG、BacPAI。将重组病毒感染Sf21细胞,PABChGRF(Gly)和PABCIGFI均得到有效外泌表达,表达产物通过IgGSepharose柱可获得快速纯化。  相似文献   

14.
HCV NS5B基因片段克隆入BAC-TO-BAC^TM重组杆状病毒表达系统的pFASTHTc载体质粒,转化DH10BAC^TM感受态细菌获得重组的Bacmid质粒,将重组Bacmid质粒转染Sf细胞,获得的重组杆状病毒可表达目的蛋白。免疫印迹和体外活性检测表明,所表达蛋白为HCV NS5B蛋白,具有多聚酶活性。  相似文献   

15.
应用亲和层析法是纯鸡马立克氏病病毒PP38基因重组产物   总被引:3,自引:0,他引:3  
利用鸡马立氏病病毒(MDV)I型特异单克隆抗体H19致敏Sepharose4B-CNBr,从感染重组病毒BP38Ⅱ的昆虫细胞中提纯鸡马立克氏病毒PP38基因重组产物,获得良好效果,提纯的蛋白质的SDS-PAGE中表现出一条分子量约为38kDa的蛋白质条带,在免疫印迹试验中该蛋白质带也能被单克隆抗体H19识别。利用该提纯的重组PP38免疫小鼠,所制备的小鼠抗血清在免疫荧光染色试验中不仅能与感染重组病  相似文献   

16.
江浙蝮蛇神经生长因子在家蚕幼虫中的表达   总被引:2,自引:0,他引:2  
江浙蝮蛇神经生长因子(NGF)基因克隆于昆虫病毒转移栽体pBacPAK8中,获得重组转移栽体pBac-PAK-NG〈与线性化Bm-AacPAK6修饰病基因组DNA共转染家蚕细胞,经过体内重组,筛选到重组病毒。用重组病毒洒家蚕幼虫,5天后收集血淋巴,经SDS-PAGE检测及利用PC12细胞进行NGF生物活力测定证明,神经生长因子在家蚕幼虫中得到较高表达,且表达产物具有良好的生物学活性  相似文献   

17.
重组人骨形态形成蛋白2在家蚕幼虫中表达及产物纯化   总被引:4,自引:0,他引:4  
将编码人BMP2cDNA基因插入昆虫杆状病毒转移载体pBacPAK1,与修饰的家蚕核形多角体病毒Bm-BacPAKDNA共转染家蚕细胞,通过同源重组得到含有在多角体蛋白基因启动子控制下的BMP2cDNA基因的重组病毒Bm-BacPAK-BMP2。用重组病毒感染家蚕幼虫,第五天BMP2表达率最高,每毫升蚕血淋巴中约10μg表达产物;表达产物在在体内被加工成C-端16kD片段,以二硫键连结成分子量为30kD的同源二聚体;经纯化获得90%以上纯度的成熟BMP2,与骨基质胶原结合后植入大鼠皮下,7天后在局部诱导生成软骨组织。  相似文献   

18.
EB病毒潜伏膜蛋白(LMP)是由病毒编码的主要的与病毒致宿主细胞潜伏感染有关的蛋白之一。我们用基因重组技术,把含有LMP基因(BNLF1)3个外显子(exon)开放阅读框架(ORF)的长1.80kbp的DNA片段,和能分解HygromycinB的含有SV40早期启动子和HgryomycinB磷酸转移酶全基因(长1025bp)的DNA片段(长1.60bp),同时重组于亚克隆载体pBluescriptSK(pBS)中,并使该重组质粒pBS-LMP-Hyg(长5767bp)在乳地鼠肾传代细胞(BHK)中获得表达。BHK细胞在经此重组质粒转染后,LMP阳性细胞是2%,在HygromycinB的持续压力下,LMP表达细胞率可达20%。3个月后,LMP表达细胞逐渐减少。5个月后,不能测到LMP表达细胞。经免疫荧光和蛋白印迹(Westemblot)实验证实,人鼻咽癌、风湿性关节炎和正常人血清中不含有抗LMP抗体。  相似文献   

19.
周玲  刘海鹰 《病毒学报》1998,14(3):210-214
用杆状病毒表达系统重组病毒,在昆虫细胞中表达了完整的含有EBV-LMP1基因3个外显子开放读码框架的长2.3kb的cDNA片段。用重组病毒感染Sf9细胞,用免疫荧光染色,结果表明:48小时表达重组蛋白,72小时细胞较完整,免疫荧光染色强阳性,96小时后细胞出现破碎。我们采集72小时的组织培养上清和细胞破碎裂解液,分别采用SDS-PAGAE、HPLC分子筛法,用免疫蛋白印迹法实验证明,表达的蛋白能被  相似文献   

20.
将抗癌胚抗原(CEA)单链抗体基因插入家蚕杆状病毒转移载体pBacPAKHis, 与修饰的家蚕核型多角体病毒BmBacPAKDNA共转染家蚕细胞, 经同源重组得到含有在多角体蛋白基因启动子控制下的抗CEAScFv 基因的重组病毒BmBacScFv。用重组病毒分别感染家蚕细胞和幼虫, 在两者中均得到了高效表达, 产物分子量为28kD, 前者占细胞总蛋白的6 % , 后者为0 .3 mg/ 蚕。目的基因在家蚕细胞和幼虫中表达产物经Ni2+IDASepharose6B亲和柱纯化, 前者纯度可达90% 以上, 后者纯度较低; 纯化后的融合蛋白具有CEA 结合活力, 其亲和常数分别为5 .4×108/mol·L- 1 和2.3 ×108/mol·L-1 , 略低于其亲本单抗E7B10 2.7 ×109/mol·L- 1 。  相似文献   

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