同时提取油茶中DNA和RNA的简便方法

介绍了一种以CTAB提取方法为基础,结合其它DNA和RNA提取方法,经反复实验建立的一种同时提取油茶DNA和RNA的简便方法。该方法能有效地去除植物组织中酚类和多糖等次生物质的影响,所得到的DNA和RNA纯度高,完整性好,可以用于进一步的如DNA分析,mRNA的分离,RT-PCR,构建cDNA文库和基因表达分析等实验。     

简便有效的微量样品核酸DNA的抽提方法

模板核酸的来源或选用的抽提方法对许多分子生物学技术的实验结果能产生直接影响 ,尤其当处理标本的核酸质和量处于极限状态时 ,这种制约性将更加明显。例如许多领域的研究工作涉及从微量标本中抽提ＤＮＡ ,如用单精子分型技术构建遗传图谱 ,临床医学研究中应用的微量组织分析法等[1,2 ] 。由于模板ＤＮＡ量极少 ,要做到充分回收高纯度ＤＮＡ ,而且样本ＤＮＡ损伤程度轻、模板完整性好 ,选择合适的核酸抽提技术是保证实验成功的前提。本文应用含 5 %Ｔｗｅｅｎ 80简易方法处理临床疑肿瘤穿刺标本 ,当被处理样品的核酸量低于 1 μｇ/ｍｌ时 ,…     

改良的大鼠脑组织总RNA抽提方法

目的:建立一种简单方便、结果稳定的抽提大鼠脑组织总RNA的方法。方法:在传统一步法抽提动物组织总RNA的基础上,通过增加抽提步骤使总RNA与细胞DNA、蛋白质、细胞残片等干扰总RNA质量的杂质有效分离。结果:建立了可以快速、稳定地获得高纯度、未被降解的大鼠脑组织总RNA的方法。结论:采用改良的方法抽提到的总RNA比用传统的一步法得到的总RNA的完整性和均一性好,可直接应用于分子生物学操作。     

噬菌体DNA的快速抽提

介绍一种噬菌体DNA的快速抽提方法.用聚乙二醇沉淀噬菌体颗粒,然后经DEAE纤维素纯化处理和酚抽提.与传统的噬菌体DNA纯化方法相比,改进后的方法方便、快速、经济,可获得高纯度的噬菌体DNA.     

新生隐球菌基因组DNA不同抽提方法的比较

目的 DNA是进行分子生物学研究的重要基础。在本研究中,我们建立了2种简单快速抽提基因组DNA的方法并可用作PCR扩增的模板。通过比较4种不同的DNA抽提方法以确定哪种更适合进行下一步的基因分析。方法这4种方法是:玻璃珠法,酶法,3%SDS法和氯化苄法。玻璃珠法是用玻璃珠在混漩器上剧烈振荡破碎细胞壁;3%SDS法是将细胞在含10mmol/LDTT的3%SDS溶液中加热,然后用5mmol/LKAc和异丙醇抽提,DNA的产量通过A260测定。结果 3%SDS溶解法、经典酶法、玻璃珠法和氯化苄法的DNA产量分别为0.4154±0.0367、0.8484±0.0756、1.2636±0.2040、0.4070±0.0339(g/L×108CFU/mL)。结论玻璃珠法是最敏感、重复性好、简单、费用合理的抽提方法 。     

一种改进的快速有效的裸藻DNA抽提方法

大多数裸藻为单细胞游动种类,无细胞壁,细胞质外层特化为表质,部分种类细胞具胶质的囊壳,表质、囊壳的主要成分为蛋白质,使之具有柔韧的类牛皮糖的特性,给裸藻破细胞、DNA抽提及进行下一步工作造成一定的难度,本文在比较、改进的基础上,得到一种快速有效的裸藻DNA抽提方法。       

有效抽提乙醇中螨标本的核DNA

对如何有效地从乙醇保存的叶螨中抽提核基因组DNA作了探讨。70％乙醇保存的叶螨标本,经过干燥,TEN洗涤,蛋白酶K消化,酚—氯仿抽提,2倍体积无水乙醇沉淀等步骤,得到叶螨核基因组DNA沉淀,再用TE或无菌水溶解后,以其为模板,进行随机引物PCR扩增。结果显示.该方法抽提的DNA无Taq酶抑制物,且其纯度达到进行PCR反应对模板要求的程度。这为采用AP-PCR技术研究螨的系统分类提供了便利。     

从少量转染细胞中同时快速提取总RNA和基因组DNA

采用4mol / L LiCl将DNA和RNA分相,建立了同时从少量转染细胞中快速提取细胞总RNA和大分子基因组DNA的方法.与以前的方法相比,本法快速、简便、经济,尤其适合应用在哺乳动物细胞基因表达与调控的研究中．     

一种高效提取猕猴桃DNA和RNA的方法

在总核酸提取方法(PS法)的基础上,经多次实践改进,得出一种以高盐低pH的HAc-NaAc缓冲体系提取总核酸的简便方法,可以从富含多糖、多酚时猕猴桃叶片和花蕾中提取同时含有DNA和RNA的总核酸.所得的总核酸在LiCl溶液中选择性沉淀RNA,从而有效地分离出DNA和RNA样品.紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳分析表明,所提取的DNA和RNA具有较高的纯度和完整性.通过样品DNA的PCR和样品RNA的RT-PCR,认为所提取的DNA样品和RNA样品能够满足分子生物学试验的基本要求.     

快速显示血细胞及骨髓细胞DNA、RNA的方法

实验对传统的甲绿 派若宁法做了一定的改进 ,使染色时间缩短 ,步骤简化 ,效果良好。并对骨髓和脾造血细胞内ＤＮＡ、ＲＮＡ的定性和定量显示进行了一定的探讨。1.材料和方法1 1　材料 :派若宁Ｙ染液的配制 6%派若宁Ｙ(ＡＭＲＥＳＣＯ分装 ) 1ｍｌ,0 2Ｍ醋酸缓冲液(ｐＨ5 0 ) 8ｍｌ,蒸馏水 8ｍｌ ,优质甘油 1ｍｌ。此过程在磁力搅拌器上进行。 2 %甲绿用 0 1ＭＰＢＳｐＨ7 2溶液配制 ,经三氯甲烷洗脱去影响染色效果的甲紫成分 ,制得较纯的甲绿溶液。1 2　染色方法 :取小鼠股骨 (用ＲＰＭＩ 1640培养液将骨髓冲出 )和脾细胞 ,制成细胞悬液…     

简单快速分离无RNA的大肠杆菌质粒DNA的方法

本文介绍一种简单快速分离质粒ＤＮＡ方法。此方法有两个主要步骤。用这种方法分离的质粒ＤＮＡ纯度高、无ＲＮＡ,并可用于酶切、连接等操作。     

豌豆种子发育过程中DNA和RNA的变化

实验结果表明：豌豆种子发育过程中单粒鲜重、ＤＮＡ和ＲＮＡ含量都随开花后日数增加而增加。其中豌豆开花第２１天,ＲＮＡ含量达最高峰,拖尾现象消失而趋于单一带区,ＤＮＡ的迁移率也降到最低,从而确定出豌豆开花后第２１天是基因转录活动降低的转折点,为种子蛋白质基因工程研究提供参考。     

担子菌草菇总RNA的快速抽提方法

针对高等真菌草菇(Volvariella volvacea),提供一种改进的简易抽提总RNA的方法。纯化的RNA可直接作如下的各种应用,如RT-PCR、poly A-RNA的富集、差异显示、Northem杂交、引物延伸、eDNA合成、基因表达谱芯片和基因表达谱芯片分析。我们用此方法成功地从草菇中抽提到总RNA,A260,A。为1．7—2．0,A260/A230大于2．0,数值显示RNA的纯度是足够高的(RNA没有被蛋白或苯酚等污染)。电泳图上28S：18S比例约为2：1,显示RNA没有被降解。     

肝癌组织及细胞系总RNA抽提逆转及基因克隆方法的改进与比较

本文建立了高效肝组织及细胞总RNA抽提、反转录以进行基因克隆和实时定量PCR（q-RT-PCR）的方法。 比较了2种反转录酶(M-MLV和SuperScriptII)、2种cDNA合成引物(Oligo dT和random 6 primer)对总RNA反转录效率的影响,与4种DNA聚合酶（Taq聚合酶、Pfu聚合酶、LA taq聚合酶、Prime Star聚合酶）进行长片段基因克隆的能力及效率;同时,该研究比较了不同质量总RNA对有效进行q-RT-PCR与长片段分子克隆的影响。新建立的RNA提取方法使得RNA完整性和均一性提高。RNA的完整性及均一性对长片段cDNA的克隆至关重要。部分降解的组织RNA及细胞RNA仅适合于q-RT-PCR检测mRNA的表达水平,而不适合于cDNA的克隆。     

RNA介导的植物DNA甲基化研究进展

RNA介导的DNA甲基化作用(RNA-directed DNA Methylation,RdDM)是首次在植物中发现的基因组表观修饰现象,RdDM通过RNA-DNA序列相互作用直接导致DNA甲基化。植物中的RdDM和siRNA介导的mRNA降解现象,都是通过RNA使序列特异性基因发生沉默,它们对于植物的染色体重排、抵御病毒感染、基因表达调控和发育的许多过程起到了非常重要的作用。在植物中有很多的文献报道RdDM现象,但是对于其具体调控机理还不是很清楚。这里对RNA介导的植物DNA甲基化的基本特征进行了简要概述,主要对RdDM机理的研究进展进行了综述,其中包括RdDM过程中的DNA甲基转移酶的种类及其作用机理,DNA甲基化与染色质修饰之间的关系,以及与RdDM相关的重要蛋白质的研究等。在植物中,转录和转录后水平都可能发生RdDM,诱发基因沉默,前者常涉及靶基因启动子的甲基化,后者则牵涉到编码区的甲基化。RdDM的发生依赖于RNAi途径中相似的siRNA和酶,如DCL3、RdR2、SDE4和AGO4。植物中至少含有三类DNA甲基转移酶DRM1/2、MET1和CMT3,其作用部位是与RNA同源的DNA区域中的所有胞嘧啶,而组蛋白H3第九位赖氨酸的甲基化影响着胞嘧啶的甲基化。     

“观察DNA和RNA在细胞中的分布”实验方法改进

在"观察DNA和RNA在细胞中的分布"实验中,通过改良实验材料、改进实验药品,简化实验步骤,突破甲基绿和吡罗红对DNA和RNA染色效果在实际操作中没有区分度这一广泛存在的实验问题,取得更好的观察效果。学生通过直观的实验观察,构建"结构与功能相适应"生命观念。     

14种蜂花粉的DNA和RNA分析

本文使用紫外光吸收法,分析了芝麻、葵花、泡桐等１４种蜂花粉中核酸（ＤＮＡ和ＲＮＡ）的含量,以进一步探讨花粉的抗衰老作用。结果说明不论那一种花粉,均含有丰富的核酸,但种类不同的花粉其中核酸的含量是不完全相同的。     

小RNA病毒和小DNA病毒的三维结构模型

本文综述了小RNA病毒和小DNA病毒的主要结构特征,绘制出了它们的三维结构模型,从中找出了两者间的共同点和差异,为进一步研究两种病毒提供了依据。