应用生物技术保存地方猪种种质资源研究

我国地方猪种资源十分丰富,拥有许多突出特性的品种,受到国内外养猪业者的重视。由于种种原因,有些猪种濒临绝种。生物技术的发展给地方猪种种质资源长期保存带来了希望。结合课题组近年来来的相关工作,概述了我国地方猪种资源概况及保种的迫切性,冷冻保种研究现状及地方猪种种质资源长期保存的主要技术,包括猪种配子和胚胎冷冻技术、基因组DNA库、猪体细胞克隆技术及其在长期保存种的作用。     

我国小型猪品系资源状况初浅分析

小型猪正逐渐成为生命科学研究中的重要实验动物。我国具有独特和丰富的小型猪资源,我国小型猪品系或资源涉及资源品系、封闭群、近交培育品系等。本文就我国的小型猪品系资源状况进行了介绍和初步分析。     

六个品种猪生长激素基因座位遗传多态性检测

我国具有丰富的猪品种资源,然而与国外猪种相比,我国地方猪种表现出生长速度慢、瘦肉率低的缺陷。而生长激素对调节动物的新陈代谢、加快生长速度、提高饲料报酬以及改善胴体组成等方面均有着重要的作用。猪的生长激素基因定位于１２号染色体Ｐ１４区域内,由５个外显子...     

竹根猪的人工饲养

竹根猪的人工饲养陈建平（湖南省双县教育科学研究室４２５２００）竹根猪又名竹根鼠、茅根鼠,学名中华竹鼠（Ｒｈｉ－ｚｏｍｐｓＳｉｎｅｎｓｉｓ）。属啮齿目,竹鼠科。是江南山区重要的野生动物资源之一。肉味鲜美,低脂肪高蛋白,含有多种维生素及钙、磷、铁、锌等营...     

长蓝猪QTL定位资源群建立及其遗传分析

利用高度选育的8头瘦肉型长白猪为父本,16头中国优良地方品种蓝塘猪为母本,采用远交系杂交的F2代设计方法,建立包括8头F1公猪、40头F1母猪和232头F2个体的猪资源群体。资源群体的遗传分析表明,所测定的32个性状都有一定的变异,主要经济性状的变异系数都在10％以上。进一步的方差组分估计表明,主要经济性状的加性遗传方差较大。在所测定6号染色体连锁群的22个微卫星DNA标记中,12个表现有多态性,全群平均杂合度为0.53,多态信息含量为0.46,能较好地为QTL检测提供信息。因此,F2代有较好的分离状态,有可能利用该资源群体检测到较多的QTL。     

家猪Atrn基因与微卫星标记遗传连锁及对经济性状效应的分析

以杂种近交培育的丹麦资源家系 0～ 5世代中的 174头猪为实验材料 ,以杂交合成的湘黄猪第 9世代的12 9头猪为对照 ,采用PCR RFLP技术 ,检测家猪Atrn基因多态性并分析其对生长和体组成性状的影响。结果表明 :PCR产物经TaqⅠ限制酶消化 ,两猪种均能得到AA、AB、BB 3种基因型 ,基因型频率在猪种间存在极显著差异 (P <0 0 1)。资源家系资料经CRI MAPV2 4软件作连锁分析 ,发现Atrn基因座与 17号染色体SW10 31位点连锁 ,重组率和LOD值分别为 0 2 1和 3 19。应用多变量最小二乘分析模型 ,资源家系的日均屠宰重、背膘厚和湘黄猪的日增重、背膘厚、瘦肉率等性状基因型间均差异显著 (P <0 0 5或P <0 0 1) ,主要为BB基因型个体优于AA和AB基因型个体。由此可见 ,等位基因B对重要经济性状会产生良好效应或选择BB基因型会获得对重要经济性状的良好效应 ,为Atrn基因作为家猪胴体及生长性状候选基因提供了理论依据     

贵州省纳雍县糯谷猪生物学特性及品种资源调查

以在纳雍全县范围考察为基础,通过对纳雍本地的糯谷猪资源进行实地调查得到了大量可靠的第一手资料,基本弄清楚了糯谷猪的生物学特性、生长习性、在纳雍的分布地点等基本情况,为进一步解决糯谷猪的资源保护和合理利用提供科学依据。     

56个中国地方猪种微卫星基因座的遗传多样性

采用FA0—ISAG联合推荐的27个微卫星DNA标记对56个中国地方猪品种和3个引进猪种(杜洛克猪、长白猪、大白猪)进行遗传多样性分析,通过计算等位基因频率、有效等位基因数、平均遗传杂合度、基因分化系数、多态信息含量和遗传距离并进行系统聚类分析,评估其种内遗传变异和种间遗传关系。以聚类结果为基础,将56个中国地方猪种分为12类：Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ类都是《中国猪品种志》中的华北型猪种;Ⅳ类相当于其中的江海型猪种;Ⅴ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ和Ⅸ类的品种大部分属于华中型;Ⅹ和Ⅺ类相当于华南型品种;Ⅻ类相当于西南型品种。提出保种场结合保护区是一种比较符合我国地方猪种实际状况的保种模式。研究结果可为我国地方猪种种质特性研究提供基础数据,为我国地方猪品种资源的合理保护和利用提供科学依据。     

IGF2基因PCR-RFLP多态性与脂肪沉积相关性状的关联分析

胰岛素样生长因子 2在胎儿生长发育、肿瘤细胞增殖、肌肉生长等方面具有重要的调控作用 ,是影响猪瘦肉量的主要候选基因。采用PCR RFLP技术 ,分析了IGF2基因第 8内含子部分片段在猪资源家系群体中的NciⅠ酶切片段多态性分布。IGF2基因该片段具有两个NciⅠ酶切位点 (切点位于第 8内含子 ,分别记录为位点A和位点B) ,两位点在资源家系中均具有多态性。IGF2基因B位点酶切未突变个体均比酶切突变的个体背膘薄 18 2 8% (P<0 0 1) ,肥肉率低 2 2 4 3% (P <0 0 1) ,瘦肉率高 8 71% (P <0 0 1) ,位点A具有相同的影响趋势。在该研究群体中 ,IGF2基因发挥作用的方式主要为加性效应 ,可作为猪提高瘦肉率的候选基因     

微卫星标记对资源猪群的遗传分析和连锁图谱构建

在猪数量性状位点的定位研究中,标记的使用和图谱的构建是很重要的。本研究从猪的第4、6、7、8和13染色体上选取39个微卫星标记,在来源于约克夏和梅山214头猪组成的资源群中,分析了遗传特征并构建了图谱。研究表明,平均等位基因数、平均观察杂合度(Ho)和平均多态信息含量(PIC)在F1和F2代中分别为:3.2,0.528,0.463和3.2,0.496,0.447。结果表明大多数微卫星标记位点表现为中高度杂合性。在资源群体中,平均有信息减数分裂数是217.4(44-316),而各染色体上两性平均图谱的长度分别是:172.3cM(SSC4),168.7cM(SSC6),191.7cM(SSC7),197.3cM(SSC8),178.3cM(SSC13)。与USDA-MARC的参考图谱相比,标记位点的顺序相同,但长度均较长。雌雄两性图谱相比,第4和第6染色体上雌性图谱长于雄性图谱;而在另外3条染色体上,则雄性图谱长于雌性图谱。结果显示了标记位点在资源猪群的遗传特征和遗传关系,其连锁图谱可用于今后的QTL定位。     

猪胸腺多肽的制备及生物学效应研究

利用健康猪胸腺提取分子量小于10000道尔顿的多肽水溶液,并制成无菌冻干品.将健康猪胸腺去除脂肪及结缔组织,加生理盐水制成匀浆,以低温萃取法提取多肽溶液,再将此液通过滞留分子量10K道尔顿的膜包进行超滤,超滤液加适宜赋形剂除菌、冻干制成冻干粉针剂.本实验制备的猪胸腺多肽,各种生物学效应能够达到国家同类产品的药品标准.以健康猪胸腺为原料可获得具有较高生物活性的胸腺多肽制剂,能为胸腺肽的生产开辟广阔的药用资源.     

猪前列腺素内过氧化物酶2(PTGS2)基因的遗传变异及其与繁殖性状相关性研究

前列腺素内过氧化物酶2是花生四烯酸合成前列腺素的限速酶,在包括排卵、受精、着床、分娩等一系列生殖过程中起着重要作用,因而编码该酶的基因是影响繁殖性状的重要候选基因。通过PCR—RFLP分析前列腺索内过氧化物酶2基因在15个中外不同繁殖性能猪种中的遗传变异,结果表明,不同类型中国地方猪种和外来商业猪种往此摹因位点上存在丰富的多态性,繁殖性能相埘较好的江海型、华北型和华中型猪种中A等位基因表现为优势等位基因,卡方检验显示其基因频率分布与西方商业猪种及繁殖性能较低的高原型藏猪和华南型猪种差异均极为显著（P〈0．001）。利用二花脸x杜洛克资源家系F2群体分析该基因与繁殖性状的相关性,在180头F2代母猪群体中,未能进一步证实该基凶位点对总产仔数、产活仔数和死胎数3个繁殖性状存在显著影响（P〉0．05）,但携带优势等位基因4的个体趋向于拥有较高的总产仔数、产活仔数和偏低的死胎数,鉴于该基因的重要作用,基于全基因序列的SNP扫描和大样本群体的相关性分析仍很有必要。     

猪脂肪及肌肉组织中基因表达信息分析

为探测猪脂肪及肌肉组织中基因表达概况,利用猪EST资源和人类基因序列开展计算机模拟研究,旨在为猪肉质改良的遗传基础分析提供候选信息。执行Blast比对程序以识别人类基因组基因与猪EST序列间的同源性并筛选出高度同源记录,同时编制4个Java程序进行序列检索收集、序列比对结果的过滤筛选以及分类处理。统计分析表明：至少有2002个基因在猪脂肪及肌肉组织中表达,其中1087个基因在脂肪组织表达,1205个基因在肌肉组织中表达,两组织共同表达的基因为290个;筛选出高同源基因,同时分类统计出了114个基础活性基因(脂肪和肌肉组织分别表达80和34个),并选取Top记录进行了描述分析和总结。     

利用转基因猪生产人血清白蛋白

人血清白蛋白 (HSA)是人血浆中重要组成部分 ,它在肝脏中合成进入血液 ,可运输脂类物质、维持血浆渗透压和增强机体免疫力。这在医学临床上广泛应用于治疗失血、创伤、癌症所引起的休克、水肿和低蛋白血症等病。但是目前医疗中所用的HSA由人血中提取。这种人血资源也极为有限 ,且有的还含有各种不同的病原污染 ,不能广泛地取材。为扩大HSA的来源 ,湖北省农科院生物技术研究所郑新民、华文君、肖作焕等研究人员利用转基因猪生产HSA已基本获得成功。他们用含猪血清白蛋白测翼序列的微小人血清白蛋白基因、用显微注射法导入猪的基因组中 ,…     

猪胴体脂肪沉积性状的QTL定位

市场生猪价格的决定因素之一是背膘厚度,因此,对养猪行业来说,确认影响这一性状的基因组区域就显得非常必要,1998年,由大白和梅山猪杂交繁殖的资源家系,随机选留81头F2,全部屠宰,用48个微卫星标记进行1－4,6－7号染色体（SSC）的扫描,用线性模型最小二乘法对胴体脂肪性状进行区间作图,除SSC2外,其余5条染色体共有14个QTL影响脂肪沉积,其中SSC7上4个QTL有印记效应存在,平均背膘厚QTL定位于SSC1,4和7,SSC4平均背膘厚QTL达染色体极显著水平（P＜0．01）,SSC1和7上平均背膘厚STL与多个文献报道结果一致,可能是家猪中普遍存在的QTL,花油率QTL定位于SSC6,内脂率QTL定位于SSC7,肥肉率等其他4项脂肪性状定位在SSC3,4和7。     

猪肌肉蛋白质含量的QTL分析

用酶山猪与大白猪构建的资源家系检测影响肌肉蛋白质含量的数量性状座位（QTL）。测定135头F2代个体及其相应父母和祖父母在分布1号、2号和6号染色体上的24个微卫星基因型。用这些微卫星标记计算每个F2代个体固定位置的加快和显性系数,以1cM的间距肌肉蛋白质含量与这些系数进行回归分析,发现3个与肌肉蛋白质含量具有显著效应的QTL（P＜0．05）,它们分别于位于1号染色体的Sw1332和Sw2130之间,2号染色体的Sw2516和Sw1201之间,6号染色体的Sw2516和Sw1201之间,分别解释0．91％、12．76％和4．60％的肌肉蛋白质含量变异方差。结果提示,影肌肉蛋白质含量的QTL分布在多条染色体上。     

猪3号染色体九个微卫星位点的遗传多态性研究和遗传图谱构建

从已公布的猪 3号染色体连锁图谱中选取 9个微卫星位点 ,分析了这些位点在大白猪×梅山猪资源家系F2代 140头个体上的多态性 ,利用Crimap软件分别构建了猪 3号染色体两性平均连锁图谱以及公、母畜连锁图谱。结果表明 :各位点等位基因数为 2～ 4个 ,杂合度为 0 .436～ 0 .6 5 6 ,多态信息含量为 0 .35 1～ 0 .5 82 ;本研究所构建的平均连锁图谱全长为 16 1.1cM ,公、母畜连锁图谱全长分别为 135 .8cM和 188.7cM。与USDA所公布的连锁图谱相比 ,两者的标记顺序一致 ,但我们的图谱标记间隔偏大。     

规模化养殖条件下生猪肠道微生物资源分离和鉴定

肠道微生物作为机体的重要组成部分,与生猪健康密切相关。为了获取生猪肠道微生物资源,本研究同时采用有氧分离和厌氧分离技术,从12份新鲜猪粪便中分离获得174株细菌。通过16S rRNA基因比对分析对菌株进行初步鉴定后发现,有氧分离条件下获取的105株细菌隶属于8个科、13个属和19个种,其中以弗格森埃希氏杆菌（Escherichia fergusonii）居多;厌氧条件下获取的69株细菌隶属于7个科,13个属,20个种,大部分是福氏志贺氏菌（Shigella flexneri）和弗格森埃希氏杆菌（Escherichia fergusonii）;其中,潜在益生菌株28株,包括粪肠球菌（Enterococcus faecalis）、河流漫游球菌（Vagococcus fluvialis）和乳酸乳球菌（Lactococcus lactis）。本研究有助于加深对生猪肠道可培养微生物资源和微生物生态的认识,为肠道微生态和动物益生菌的进一步研究和应用提供优良菌种资源。     

利用TP-M13-SSR技术分析我国两个地方猪种的遗传多样性

采用TP-M13-SSR技术,检测了我国地方猪品种柯乐猪和藏猪近交群体在18个微卫星位点的遗传多样性.结果如下:1)TP-M13-SSR方法简单、准确、高效,优于聚丙烯酰胺凝胶电泳;2)18个微卫星座位在柯乐猪封闭群和藏猪近交群体中的平均有效等位基因数分别为3.5092±1.0545、2.6097±0.8811,平均观察杂合度分别为0.7597±0.1672、0.5966±0.2194,平均期望杂合度分别为0.7000±0.1138、0.5781±0.1522,平均多态信息含量分别为0.6413±0.1252、0.5086±0.1535,表明两个群体具有较高的遗传多样性和较大的遗传潜力,柯乐猪封闭群可作为保种群使用.结论:将TP-M13-SSR技术应用于我国地方猪品种的遗传多样性,为快速、大规模评估我国地方猪种遗传资源提供了新的方法.