L型多聚赖氨酸和D型多聚赖氨酸对神经细胞分化的影响

目的:比较L型多聚赖氨酸(L-PL)和D型多聚赖氨酸(D-PL)浸泡的玻片培养小鼠大脑皮层神经元细胞对其分化的影响。方法:取昆明白小鼠的大脑皮层细胞,分别用L-PL和D-PL进行培养,统计和比较细胞的分化比率、突起数量以及突起生长长度。结果:L-PL和D-PL培养的神经细胞第1、2天的分化率比较差异具有统计学意义(P0.05),而突起数和突起长度比较差异无统计学意义(P0.05)。当L-PL、D-PL的浓度分别为20μL/m L、5μL/mL时,其对1、2天细胞的分化产生显著影响,并且D型多聚赖氨酸培养的细胞分化率高于L型。500、100、20μg/m L的L-PL中,100μg/ml L-PL培养细胞的分化率最高,而125、25、5μg/m L的D型多聚赖氨酸培养细胞分化率比较差异虽然无统计学意义,但25μg/ml D-PL培养神经细胞的分化率总体趋势高于其他浓度。D-PL所形成的粒径大小与L-PL不同,且D-PL的总体趋势稍大于L-PL。结论:L型多聚赖氨酸和D型多聚赖氨酸会在神经细胞生长早期对分化率产生影响,但不影响突起数和突起长度。     

人参皂甙单体R_(b1)对心肌作用的单钙通道分析及电子自旋共振谱研究

用连细胞斑片钳技术,在Wistar大鼠单个心室肌细胞上记录了T型、L型、B型钙通道的单通道活动。人参二醇组皂甙单体R_(bl)(250μg/ml)显著抑制3种类型钙通道的活动,使其开放概率减少与开放时间缩短,对通过通道的离子流幅度无明显影响。用电子自旋共振法测定了培养心肌细胞的自由基含量。R_(bl)(30μg/ml)显著抵消黄嘌呤(0.42mmol/L)-黄嘌呤氧化酶(5.3nmol/L)所致的自由基含量增多。     

百草枯诱导Ⅱ型肺泡上皮细胞TGF-β1的变化及甘草酸二铵干预作用

目的探讨甘草酸二铵(DG)对百草枯(PQ)刺激大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(alveolar epithelial cellⅡ,AECⅡ)分泌TGF-β1的影响及其机制。方法采用不同浓度的PQ溶液(200、400、600、800、1000、1500、2000μmol/L)诱导大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞24h,测定PQ对AECⅡ生存率的影响,了解IC50的PQ浓度。在1000μmol/L PQ诱导下,以0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0mg/ml浓度DG干预AECⅡ24h,测定DG对PQ诱导AECⅡ生存率的影响,了解DG干预PQ诱导下AECⅡ最高生存率的DG浓度。然后将AECⅡ分为3组,即空白对照组、PQ组(以1000μmol/L PQ培养24h)、DG组(先以0.6mg/ml DG培养2h,再以0.6mg/ml DG+1000μmol/L PQ培养24h),使用倒置显微镜观察AECⅡ的形态改变、生长情况,采用酶联免疫吸附法检测TGF-β1的含量,采用实时荧光定量聚合酶链式反应测定TGF-β1mRNA的表达。结果 IC50的PQ浓度为920.87μmol/L,在1000μmol/L PQ诱导下,以0.6mg/ml浓度DG干预AECⅡ24h的生存率最高。与空白对照组比较,PQ组TGF-β1的含量及其mRNA的表达水平明显升高,差异有统计学意义(P0.05);与PQ组比较,DG组TGF-β1的含量及其mRNA的表达水平明显下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论本实验成功建立了合适的PQ损伤大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞的模型及DG干预模型。甘草酸二铵可以降低百草枯诱导下的AECⅡ分泌TGF-β1水平。     

滇重楼茎叶总皂苷抗肝癌HepG2细胞活性

探究滇重楼茎叶总皂苷对肝癌HepG2细胞增殖的抑制、细胞周期阻滞及诱导细胞凋亡作用。从滇重楼地上茎叶提取总皂苷,配制成浓度为10μg/m L、20μg/m L、40μg/m L、80μg/m L和160μg/m L的总皂苷提取物处理HepG2细胞。总皂苷提取物对细胞增殖的抑制作用采用MTT法检测;对细胞周期阻滞作用采用流式细胞术检测;诱导细胞凋亡的作用采用细胞核荧光染色、流式细胞术和caspase-3活性试剂盒检测。结果表明,滇重楼茎叶总皂苷提取物能显著抑制细胞增殖,且具有时间、剂量依赖效应,能阻滞细胞周期于S期,并能诱导细胞凋亡。但其诱导凋亡作用仅高剂量组(≥80μg/m L)效果显著,低剂量组(80μg/m L)不显著。     

用微载体悬浮培养大量生产高活性鼠干扰素

用自制的MC-1型微载体进行悬浮培养,当其浓度为5mg/ml时,可较好地用以培养和增殖鼠L929细胞。当接种细胞量为30×10~4/ml左右时,一般在3天即可增殖至1×10~6细胞/ml。用25IU/ml鼠IFN起动12—24小时,用NDV作诱生剂,并采用环己亚胺(20μg/ml)和放线菌素D(2μg/ml)进行超诱导,IFN产量可高达1×10~6IU/ml左右,比活接近1.3×10~5IU/ml蛋白。尽量去除培养基,加胰酶—柠檬酸盐消化和高速搅拌,使细胞从载体上分离,再加新鲜培养基和微载体的方法进行扩大生产看来是可行的。这些实验表明采用微载体悬浮培养细胞的技术将更适于IFN的工业化生产。     

辛伐他汀通过上调sirt1抵抗氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞衰老

目的:探讨辛伐他汀对氧化低密度脂蛋白诱导的内皮细胞衰老的作用及其可能机制.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,给予不同浓度(0、25、50、100 μg/ml)氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)培养24小时,观察细胞β-半乳糖苷酶染色及SIRT1蛋白表达的变化;给予不同浓度辛伐他汀(1、5、10 μmol/L)预处理内皮细胞l小时后加入100μg/ml ox-LDL培养人脐静脉内皮细胞23小时,检测细胞β-半乳糖苷酶染色及SIRT1蛋白表达的变化.结果:随着ox-LDL作用浓度的增加,细胞内β-半乳糖苷酶染色的阳性细胞百分率逐渐升高,与空白对照组相比差异均有统计学意义(P＜0.05),在ox-LDL(100 μg/mll)组达到最高,显著高于ox-LDL(25 μg/ml)组(P＜0.001).而不同浓度ox-LDL处理的细胞内SIRT1的表达较空白对照组相比逐渐下降,ox-LDL(50、100 μg/ml)组SIRT1的表达显著低于ox-LDL(25 μg/ml)组(P＜0.05).10 μmol/L辛伐他汀预处理能明显降低100μg/ml ox-LDL处理的内皮细胞内β-半乳糖苷酶染色的阳性细胞百分率(P＜0.001),并显著抑制细胞内SIRT1的蛋白表达(P＜0.001).结论:辛伐他汀可以抵抗ox-LDL诱导的内皮细胞衰老,可能与增加内皮细胞内SIRT1的表达有关.     

诱导子CuSO4对金钗石斛原球茎产石斛碱的影响

为了探究在金钗石斛原球茎培养过程中,添加诱导子CuSO₄对其石斛碱产量的影响,并获得原球茎产石斛碱的优化条件,为后续多因素胁迫金钗石斛原球茎高产石斛碱提供数据支撑。采用液体悬浮培养的方式,研究了诱导子CuSO₄在不同添加时间、不同浓度、添加后不同培养时间3种处理因素对金钗石斛原球茎生物量和产石斛碱的影响。结果表明:添加0.25 mmol/L CuSO₄培养10～20 d,对原球茎的抑制作用强于培养30～40 d,其中培养20 d为最佳添加时间,石斛碱含量最高达29.65μg/g。CuSO₄浓度为0.25 mmol/L时,石斛碱含量最高达35.10μg/g,原球茎生物量也最多,达2.72 g,增殖系数达到了0.36;随着CuSO₄浓度的增加,经不同处理的原球茎抑制程度逐渐增加,原球茎也出现褐化死亡。添加诱导子后培养时间处理因素对原球茎的影响不明显,当培养至20 d时,石斛碱含量最高达29.37μg/g。最优的CuSO₄胁迫条件:在原球茎培养20 d时,加入浓...     

内毒素引起的乳鼠心肌细胞血红素加氧酶—1基因的表达

为了探讨在内毒素作用下的乳鼠心肌细胞（neonatal rat cardiomyocytes,NRCMs）血红素加氧酶－1（heme oxygenase-1,HO-1）基因的表达及其在细胞损伤中的作用,分别用10、30及50μg/ml的脂多糖（lipopolysaccharide,LPS）,10μg/ml LPS 10μmol/ml锌原卟啉Ⅸ（Zn-protoporphyrin-Ⅸ,ZnPPⅨ）和单纯10μmol/ml ZnPPⅨ与培养的NRCMs共同孵育6h,以及10μg/ml LPS与NRCMs共同孵育9h和18h。分别观察细胞HO－1 mRNA表达、MDA含量、LDH释放量与台盼蓝摄取率的变化。结果显示,同样与细胞孵育6h,LPS10μg/ml时HO－1 mRNA表达比对照组增加81.2％,30μg/ml时表达量增加126.3％,50μg/ml时表达量增加92.8％;LPS为10μg/ml时,孵育9h后HO－1 mRNA的表达量比对照组增加93.6％,孵育18h后一增加105.8％。LPS30、50μg/ml,10μg/ml LPS＋10μmol/ml ZnPPⅨ与细胞孵育6h及LPS 10μg/ml孵育18h后,细胞MDA含量、LDH释放量与台盼蓝摄取率明显增加（P＜0.01）;单纯10μg/ml LPS与单纯10μmol/ml ZnPPⅨ孵育6h后,上述指标均无明显升高。结果表明,LPS可诱导NRCMs HO－1 mRNA的表达,且在较低LPS剂量范围内具有时间依赖性和浓度依赖性;NRCMs HO-1 mRNA的表达可减低LPS引起的细胞损伤,这可能是细胞产生的一种自身保护性反应。     

人参皂甙Rg1抗OxLDL诱导内皮细胞凋亡及分子机制

目的 探讨人参皂甙Rg1抑制氧化低密度脂蛋白（oxidized low-density lipoprotein,OxLDL)诱导血管内皮细胞凋亡的作用及其相关分子机制。方法 以体外培养的牛主动脉内皮细胞为模型。分别加入OxLDL200μg/ml(OxLDL组）和OxLDL200μg/ml Rg140μg/ml（Rg1组）;对照组不加任何诱导物,培养24小时后观察细胞形态变化,DNA电泳,TUNEL染色检测细胞有无凋亡及凋亡的程度,Western blot分析各组内皮细胞型一氧化氮合酶（endothelial Nitric Oxide Synthase,eNOS)的表达水平。结果 （1）对照组和OxLDL组血管内皮细胞凋亡比例分别为8%和41.35%;(2)Rg1组血管内皮细胞凋亡比例为13.29%;(3)OxLDL抑制牛主动脉内皮细胞的eNOS表达水平,此抑制作用具有剂量依赖性。人参皂甙Rg1可使被OxLDL抑制的eNOS表达水平回升。结论 （1）OxLDL能诱导血管内皮细胞凋亡。（2）人参皂甙Rg1能抑制OxLDL诱导的血管内皮细胞凋亡。（3）此作用可能与上调内皮细胞的eNOS水平,减轻细胞的脂质过氧化损伤有关。     

赤霉素A4、A7的发酵研究

初选藤仓赤霉菌(Gibberella fujikuroi)农大17菌株为赤霉素A_4、A_7(GA_4、GA_7)的生产菌,该菌株GA_(4+7)的积累量,除与营养条件有关外,温度和pH是极为重要的因子,随着发酵温度从28℃上升至32℃,GA_(4+7)的产量由21μg/ml增至81μg/ml,GA_3由702μg/ml降至328μg/ml。pH回调至中性,GA_(4+7)的产量由75μg/ml增至180μg/ml,GA_3由322μg/ml降至211μg/ml。此外,设法延长发酵周期也是增加GA_(4+7)的一个因素。综合上述条件,即发酵过程中,发酵液的pH由48h前的4回调并维持在6.7左右,温度由28℃上调并控制在32℃,摇瓶培养12天,GA_(4+7)的产量达890μg/ml,20—600L发酵罐发酵240h,GA_(4+7)产量达680μg/ml左右。GA_(4+7)浓度的测定亦作了简化处理,发酵液不经提取,可直接用硅胶板G薄层层析(TLC)后进行荧光比色,产品测定宜采用高效液相色谱法(HPLC)。按照上述条件培养的农大17菌株,产生GA_3、GA_7和GA_4的比例为23.131:16.105:31.258,GA_4高于有关报道。