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五步蛇蛇毒磷脂酶A_2的纯化及部分性质 总被引:1,自引:0,他引:1
经Sephadex G-75和QAE-Sephadex A-50离子交换层析等方法,从湖南产五步蛇(Agkistrodon acutus)蛇毒中纯化一种均一的酸性磷脂酶A_2。SDS-PAGE测得分子量为15.8kD,按氨基酸残基计算其分子量为14.352kD,IEF-PAGE测得等电点为5.32。氨基酸组份分析表明磷脂酶A_2分子由128个氨基酸残基组成,富含Asp和Glu,不含中性糖。PLA_2酶活性的最适温度为45℃,最适pH为8.5左右,没有抗胰蛋白酶的活性,具一定的热稳定性。K~+、Ca~(++)和Na~+离子激活,而Cd~(++)、Sn~(++)、Cu~(++)、Li~+、Hg(++)、Zn~(++)、Fe~(++)和Co~(++)离子可抑制或完全丧失酶活力。手工微量顺序分析测得PLA_2分子N-末端氨基酸为Leu。此酶对小白鼠的LD_(50)至少大于10mg/kg(ip)。 相似文献
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贵州产五步蛇蛇毒磷脂酶A2的抗凝血及抗血栓作用研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究贵州产五步蛇蛇毒磷脂酶A2的抗凝血及抗血栓作用。方法对大鼠静脉注射不同剂量的PLA2,测定大鼠的凝血时间、凝血酶原时间、抗凝效价和血栓抑制率。结果PLA2浓度达到1.0mg/kg以上,能显著延长大鼠凝血时间及凝血酶原时间,其抗凝效价相当于肝素钠的24.8%~31.5%。PLA2能显著抑制大鼠实验性动脉及静脉血栓的形成。结论贵州产五步蛇PLA2具有较强的抗凝血和抗血栓作用。 相似文献
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江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶A2(APLA2)对多种致聚剂引起的血小板聚集具有抑制作用,这种抑制并非是由于APLA2与血小板膜结合,引起膜流动性降低造成。APLA2不裂解血小板,电镜观察表明它能抑制血小板内部颗粒的中心化,使之不易被激活。进一步研究显示APLA2是作用在细胞骨架上,使致聚剂引起的朋动蛋白单体聚合难以进行,APLA2导致的cAMP浓度的升高正说明了这点。结果提示APLA2首先作用于血小板细胞膜。引起cAMP浓度升高,影响到细胞骨架的正常功能,进而抑制了血小板的聚集。 相似文献
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本文综述了国内外蜜蜂毒主要过敏原磷脂酶A_2的研究进展,主要包括一般的蛋白质特性、作用机制、免疫学及生物学作用等。 相似文献
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制备式等电聚焦测得湖南产五步蛇蛇毒磷脂酶A2为单一的吸收峰(OD280),等电点为5.32,证明了作者前报道的纯化的磷脂酶A2为纯品 相似文献
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哺乳动物细胞液磷脂酶A2 总被引:1,自引:0,他引:1
哺乳动物细胞液磷脂酶A_2杨在清,甘莉(华中农业大学,武汉430070)关键词细胞液磷脂酶A_2细胞液磷脂酶A2(cytosolicphospho-lipaseA2,cPLA2)是动物非胰腺磷脂酶A2的一种,存在于哺乳动物的细胞液中,在花生四烯酸的代谢... 相似文献
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江浙蝮蛇蛇毒中性磷脂酶A2的结构模拟研究 总被引:1,自引:1,他引:0
从我国江浙蝮蛇蛇毒纯化出的中性磷脂酶A2(ATX)不仅具有酶催化活性,还具有突触前神经毒性。用图象模拟和能量极小化及分子动力学方法,根据美国西部菱斑响尾蛇(C.atrox)蛇毒PLA2的晶体结构构建了ATX二体和单体模型,它们的基本折叠与C.atroxPLA2是很相似的。能量计算表明,二体的总势能比单体相应能量的两倍低263.6kcal/mol;ATX二体模型中两亚基间的作用与C.atroxPLA 相似文献
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江浙蝮蛇毒碱性磷脂酶A2单斜晶体的培养和晶体学研究 总被引:2,自引:0,他引:2
江浙蝮蛇毒碱性磷脂酶A_2单斜晶体的培养和晶体学研究牛秀田,孟五一,桂璐璐,王小强,林政炯(中国科学院生物物理研究所生物大分子国家重点实验室,北京100101)顾培忠,周元聪(中国科学院上海生物化学研究所,200031)关键词江浙蝮蛇毒碱性磷脂酶A_2... 相似文献
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竹叶青蛇毒磷脂酶A2的分离纯化和性质研究 总被引:4,自引:0,他引:4
竹叶青蛇毒磷脂酶A_2的分离纯化和性质研究冯波,吴卫甲,钱嵘,王克夷,周元聪(中国科学院上海生物化学研究所,200031)关键词竹叶青蛇毒,磷脂酶A_2;血小板聚集磷脂酶A。在哺乳动物胰脏和蛇毒毒液中含量较丰富,其中蛇毒磷脂酶A。除能水解甘油磷脂的第二... 相似文献
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钙离子在江浙蝮蛇毒酸性磷脂酶A_2中的作用是多方面的。它不仅能够引起酸性磷脂酶A_2在溶液中构象的变化,而且对该酶活性有较大的影响。Ca~(2+)为酶活力所必需,当Ca~(2+)浓度达到0.06mmol/L时,酶表现出很高的活力;Ca~(2+)浓度超过0.5mmol/L时,催化反应出现一个明显的延滞期。化学修饰表明His_(47)在表现活力方面起重要作用,Ca~(2+)的存在可降低其修饰反应的速度,提示这是由于Ca~(2+)引起构象发生变化而造成的。 相似文献
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江浙蝮蛇毒酸性与碱性磷脂酶A_2溶液构象变化的差示扫描量热法研究 总被引:1,自引:0,他引:1
运用差示扫描量热法,在不同pH值的缓冲溶液内和各种浓度的碱土族氯化物溶液内,研究了来自江浙蝮蛇(AgkistrodonhalysPallas)毒的酸性与碱性磷脂酶外A2(PLA2)的热变性过程。得到表征这两种酶溶液构象变化的热力学参数。依据这些参数研究了两者的溶液构象及其变化。在pH4.5以下,分子净荷正电的这两种酶在溶液中不形成可热致伸展的有序构象;pH高于4.5时,Asp和Glu的侧链羧基以负离子形式存在有利于有序构象的稳定。His是决定PLA2活力和热稳定性的重要残基。磷酸根离子和这两种酶有结合作用而降低有序构象的热稳定性。碱土族阳离子除和这两种酶结合外,还以依赖于离子强度的方式复杂地影响酶的溶液构象,但其作用不完全是静电性的,是或多或少地随离子的不同而不同的。计算给出酸性PLA2的△Hcd. 相似文献
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我们用同源模建方法构建了江浙蝮蛇毒碱性-酸性杂合磷脂酶A2-Ⅱ和中性磷脂酶A2的三维结构,并对它们的结构特征做了比较分析。在此基础上,我们在三维结构水平上解释了磷脂酶A2荧光光谱学研究的一些结果。我们还对四种江浙蝮蛇毒磷脂酶A2的酶活性部位的静电势分布做了分析。我们认为:含钙的PLA2酶活性部位周围的静电势有利于PLA2与带负电荷的底物结合。 相似文献
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目的研究短尾蝮蛇毒磷脂酶A2的分离纯化及其抗血小板聚集作用。方法磷脂酶A2的分离纯化采用CM-SephadexC-25、DEAE-SepharoseCL-6B、SephacrylS-200、SephadexG-75柱层析法,用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定其蛋白分子质量,以磷脂酶Az测定方法测定其酶活性,用比浊法测定其对二磷酸腺苷(ADP)引起的血小板聚集的影响。结果从短尾蝮蛇毒中纯化所得磷脂酶A2的相对分子质量为16.0×10^3(非还原)、17.6×10^3(还原),它具有磷脂酶A2活性,能明显抑制ADP引起的血小板聚集并呈剂量-效应关系。结论此方法成功地从短尾蝮蛇毒中分离纯化出磷脂酶A2,并能抑制血小板聚集。 相似文献