益智ISSR-PCR反应体系建立与优化

目的：获得适合的益智ISSR-PCR扩增反应体系。方法：利用正交设计L46（4^5）和单因素试验对益智ISSR-PCR反应体系的5因素（Taq酶,Mg^2＋,模板DNA．dNTPs,引物）在4个水平上进行优化试验,将二者所得结果进行综合比较分析。结果：最终扶得益智ISSR-PCR反应的最优体系（20μl）为：模板DNA 100ng,Mg^2＋ 3．0mmol／L,引物0．8μmol／L,dNTPs0．25mmol／L,Taq DNA聚合酶1．0U。最后,对益智ISSR-PCR最佳反应体系进行梯度退火,得到最佳退火温度为50℃。结论：这一优化系统的建立为今后利用ISSR标记技术研究分析益智遗传多样性奠定基础。     

益智传粉生物学的研究

 益智（Alpinia oxyphylla）的花期从2月底至4月下旬;单株花期（花序）约为16～26 d,通常为23～26 d;单花花期一般为1 d。正常情况下,益智和其它山姜属植物一样,具有花柱卷曲性促进异花授粉的机制,表现出两种类型：花柱上举型和花柱下垂型,其花柱卷曲运动的节律与其它已报道的山姜属植物基本一致。但观察发现,当遭遇低温天气时(日最高气温<18℃),单花花期延长为2 d,无论是上举型个体还是下垂型个体,均只表现出一种花型——下垂型：上午开花时花柱弯向上,柱头位于已开裂散发出花粉的花药上方,直到第二天上午6∶30～11∶00间,花柱才陆续地慢慢向下运动,柱头下降至与花药等高或位于花药下方。益智的主要传粉昆虫是蜜蜂（Apidae sp.）、木蜂（Xylocopa sp.）,绝大多数的访花者的访花目的是吸蜜。益智的花蜜分泌量（8.37～15.79 μl）和花蜜含糖量（30.12%～32.83%）较高,花蜜是益智作为传粉者访花的最主要的报酬。实验结果还表明,益智花部中唇瓣对昆虫访花有显著的招引作用;益智的花蜜对蜜蜂的访花频率有显著的影响,对木蜂有一定的招引作用,但并不显著。而花粉（花药）则对昆虫的访花频率影响不大。人工授粉实验结果表明益智存在自交亲和性,无论是上举型或下垂型个体自交和异交均有较高的结实率;人工自交和异交的结实率在上举型植株中存在较大的差异,而在下垂型个体中则差异不明显;去雄套袋、去柱头套袋和完全套袋不授粉等处理均不结实,表明益智不存在无融合生殖现象和自动自花授粉现象。益智的繁育系统是异花授粉交配系统。     

山姜属中药草豆蔻和益智nrDNA ITS区序列的测定

中药草豆蔻、益智的原植物分别为山姜属草豆蔻（Ａｌｐｉｎｉａ ｈａｉｎａｎｅｎｓｉｓ Ｋ．Ｓｃｈｕｍ．）与益智（Ａ．ｏｘｙｐｈｙｌａ Ｍｉｑ．）。本文采用ＰＣＲ直接测序法,首次测定了它们的核糖体ＤＮＡ ＩＴＳ区序列。结果显示,两者序列长度（ＩＴＳ１＋ＩＴＳ２）分别为４０３ｂｐ与４０４ｂｐ,序列间具有２７个变异位点（包括５．８Ｓ编码区）。本研究为山姜属中药材的ＤＮＡ分子鉴定提供了必要的序列资料。     

国产山姜属植物的分类与鉴定

在姜科山姜属（Alpinia）植物中，有些种类是著名的中药，如红豆蔻（A. galanga）、益智（A. oxyphylla）、高良姜（A. officinarum）和草豆蔻（A. katsumadai ）；还有一些种类，如箭秆风（A.stachyoides）、华山姜（A. chinensis）和节鞭山姜（A. conchigera）等可做民间草药使用。该属植物除普遍含有挥发油成分外，过去国内外学者从中还分离到不少活性物质，如二芳基庚烷类（diarylheptanoids）、黄酮类、萜类等，这些成分大都有抗凝血、抗溃疡、抗肿瘤及强心等功效。另外，山姜属植物中的艳山姜（A. zerumbet）、美山姜（A. formosa…     

南药益智SRAP-PCR体系优化及引物筛选

为了建立适用于南药益智的SRAP-PCR体系,并筛选特异性引物用于研究不同地理居群的南药益智的遗传多样性,采集了海南不同地理居群的益智资源,利用植物基因组DNA提取试剂盒提取益智基因组DNA,并检测其纯度和浓度。采用正交试验对SRAP-PCR体系进行优化,最终建立了最优反应体系（总体积为25 μL）：Taq酶0.5 U,dNTPs 4 mmol/L,Mg2+ 2 mmol/L,引物各2 μmol/L,DNA模板10 ng,10×PCR buffer 2.5 μL。再利用最优反应体系对144对引物进行筛选,共获得7对特异性引物,其扩增片段的大小均在100~2 000 bp以内且分布较均匀,多态性条带比率皆达85%以上。该研究结果为南药益智遗传多样性的研究奠定了基础。     

益智不同组织多糖含量及其生物合成途径分析

为了解益智（Alpinia oxyphylla）多糖生物合成途径关键酶功能,对其茎、叶、果实中的多糖含量及其单糖组成进行了研究,并采用Real-Time qPCR分析了益智多糖生物合成关键酶基因的表达模式。结果表明,益智多糖含量依次为果实 > 叶 > 茎,主要由葡萄糖、木糖、甘露糖、半乳糖和阿拉伯糖组成;利用益智转录组数据共获得47 690条unigenes,其中31 892条在NR、Swiss-Prot、KEGG、COG、KOG、GO和Pfam数据库获得注释,其中208个unigenes参与益智多糖的生物合成,涉及15个酶。表达分析表明,所筛选的18个基因在茎、叶、果实中均有表达,14个基因在果实中的表达量最高,以糖基转移酶基因和UDP-葡萄糖焦磷酸化酶基因的表达量最高,且其表达模式与不同组织中葡萄糖含量的变化一致。     

猪脑组织水解液及其益智食品的研制

本文初步探讨了多脂质物质（脑组织）水解条件的优化过程及其益智产品的研制。经过多项对比实验得出了以双酶分段水解以及水化法除脂质提取脑组织水解液的初步工艺,并通过微震化工艺达到了掩蔽不良气味,稳定有效成分的效果。     

益智有效抗氧化成分的分离条件的研究

探讨了干柱层析法分离益智渣及益智乙醇提取物的抗氧化成分。实验中采用乙酸乙酯/环己烷(3∶7)、氯仿/甲醇(9∶1)为展开剂依次二次干柱层析分离出抗氧化物质。结果表明,益智渣及益智乙醇提取物均有较强的抗氧化性,益智渣的H2O2清除能力强于益智乙醇提取物。     

水分胁迫下益智植株生理变化与抗旱性的关系

本文研究了水分胁迫下益智植株过氧化物酶活性、叶绿素含量、脯氨酸含量和总水量的与抗旱性的相关。结果表明，益智受干旱时不同部位过氧化物酶活性与脯氨酸含量变化呈波动状升高，叶绿素含量与总水量有不同程度降低的趋势。     

橡胶林下益智光合特性的季节动态变化

利用农林复合模式发展生态农业可提高资源利用效率, 橡胶(Hevea brasiliensis)-益智(Alpinia oxyphylla)间作模式是橡胶园最主要的农林复合模式。该研究通过野外原位定位实验, 研究不同季节橡胶林下环境因子对益智光合作用的影响, 并进一步分析益智光合作用与主要环境因子的关系。结果表明: (1) 3月益智净光合速率日变化为“V”形曲线, 14:00降到最低值; 而6月、9月和12月益智净光合速率日变化趋势为10:00达到最大值, 随后缓慢降低; 在雨季(6月和9月)蒸腾速率的日平均值和日最高值均显著高于旱季(3月和12月)。表明林下益智在不同季节均能维持植株正常生长, 且表现出了较强的适应能力。3月土壤水分亏缺造成益智叶片气孔导度降低, 使其净光合速率维持在较低的水平。(2)通过光响应曲线修正模型计算出益智叶片各光合响应参数, 发现3月最大净光合效率和光饱和点显著低于6月、9月和12月; 而光补偿点和暗呼吸速率却显著高于6月、9月和12月, 表明3月土壤水分亏缺导致益智光合酶活性降低, 而表现出光抑制现象, 同时呼吸强度加剧, 光合能力显著下降。(3)采取相关分析发现, 3月气温与净光合速率显著负相关, 空气湿度与净光合速率显著正相关, 高温和低湿度共同限制了益智的光合作用; 而9月和12月, 林下光合有效辐射是益智光合作用的限制因子。     

Seasonal changes of photosynthetic characteristics of Alpinia oxyphylla growing under Hevea brasiliensis

利用农林复合模式发展生态农业可提高资源利用效率, 橡胶(Hevea brasiliensis)-益智(Alpinia oxyphylla)间作模式是橡胶园最主要的农林复合模式。该研究通过野外原位定位实验, 研究不同季节橡胶林下环境因子对益智光合作用的影响, 并进一步分析益智光合作用与主要环境因子的关系。结果表明: (1) 3月益智净光合速率日变化为“V”形曲线, 14:00降到最低值; 而6月、9月和12月益智净光合速率日变化趋势为10:00达到最大值, 随后缓慢降低; 在雨季(6月和9月)蒸腾速率的日平均值和日最高值均显著高于旱季(3月和12月)。表明林下益智在不同季节均能维持植株正常生长, 且表现出了较强的适应能力。3月土壤水分亏缺造成益智叶片气孔导度降低, 使其净光合速率维持在较低的水平。(2)通过光响应曲线修正模型计算出益智叶片各光合响应参数, 发现3月最大净光合效率和光饱和点显著低于6月、9月和12月; 而光补偿点和暗呼吸速率却显著高于6月、9月和12月, 表明3月土壤水分亏缺导致益智光合酶活性降低, 而表现出光抑制现象, 同时呼吸强度加剧, 光合能力显著下降。(3)采取相关分析发现, 3月气温与净光合速率显著负相关, 空气湿度与净光合速率显著正相关, 高温和低湿度共同限制了益智的光合作用; 而9月和12月, 林下光合有效辐射是益智光合作用的限制因子。     

超低温冷冻对益智种子生理生化特性的影响

益智(Alpinia oxyphylla)是我国四大南药之一,其种子为顽拗性种子,不耐干燥和低温,无法常规保存。为解决益智种子长期稳定保存的问题,该研究以益智种子为材料,从种子含水量以及冷冻方式方面优化益智种子超低温保存方法,并对比液氮冷冻前后种子发芽率、α-淀粉酶活性、超氧化物歧化酶活性、过氧化物酶活性、脱氢酶活性、丙二醛含量等活力指标,分析液氮超低温冷冻对益智种子生理生化特性的影响。结果表明:直接液氮冷冻含水量13.92%~14.38%范围的种子是益智种子超低温保存的最佳条件。液氮冷冻后,随着超低温冷冻时间的延长,益智种子发芽率先由76.76%下降至52.5%,再上升至65%,最后下降并稳定在50%以上。其种子α-淀粉酶活性先下降后上升,然后又下降,最后上升并稳定至冷冻前的水平。丙二醛含量则是先上升后下降,最后趋于平稳状态。过氧化物酶活性是先下降,然后稳定在恒定水平。超氧化物歧化酶活性是随着冷冻时间的延长而持续上升,脱氢酶活性则是持续下降。以上结果说明,液氮冷冻时间对益智活力有一定的影响,但对种子有些性能具有一定的促进作用。无论是发芽率,还是生理生化指标,都不同程度表明液氮超低温保存益智种子是可行的。     

橡胶-益智复合林土壤饱和导水率空间分布格局及其影响因子

为深入解析热带地区胶农复合林土壤饱和导水率(K_s)的空间分布特征，及应对橡胶林的土地退化和季节性干旱问题，本研究在云南省勐腊县中国科学院西双版纳热带植物园橡胶-益智(Hevea brasiliensis-Alpinia oxyphylla)复合林建立试验小区(25 m×11 m),随机选取40个小样方，测定K_s、土壤容重、非毛管孔隙度和田间持水量，采用普通克里金插值法、地统计学、通径分析方法解译和分析橡胶-益智复合林土壤饱和导水率的空间分布格局、变异特征及其影响因子。结果表明：益智种植带K_s显著大于橡胶种植带(P<0.01),且K_s随距益智种植带的距离增大而降低；受结构性因素影响，K_s与田间持水量都表现出强烈的空间自相关性(块金系数C₀/(C₀+C)≤25%);K_s与土壤容重呈显著负相关(-0.613,P<0.01),与非毛管孔隙度(0.408,P<0.01)、田间持水量(0.352,P<...     

益智果实,果壳挥发油成分研究

本文报告应用GC—MS用技术从益智果实、果壳挥发油分离鉴定出85种化合物,其中有75种益智挥发油化学成分为首次报导。     

南药益智ITS-PCR体系的建立与优化

为了建立适合南药益智的ITS-PCR体系来研究不同地理居群益智遗传多样性,本研究利用植物基因组试剂盒法提取益智基因组DNA为模板,采用单因素和正交试验对ITS-PCR过程中的关键影响因素进行优化,并对ITS-PCR产物进行测序鉴定。实验结果表明最佳ITS-PCR反应体系(25μL)为:Taq酶1.0 U,d NTPs 4 mmol/L,Mg2+0.5 mmol/L,引物2.0μmol/L,模板20 ng,10×PCR Buffer(不含Mg2+)2.5μL;最佳扩增程序为:94℃预变性2 min;94℃变性30 s,55℃退火30 s,72℃延伸1 min,共32个循环;最后72℃延伸5 min。采用该最佳体系对益智基因组DNA进行PCR扩增,获得扩增产物经单向测序获得了益智ITS部分序列。建立了稳定的ITS-PCR体系,为研究益智遗传多样性分析奠定了基础。     

益智Ⅱ号对记忆保持及消退中海马CA3区突触结构的影响

目的:观察益智II号对小鼠记忆保持及消退过程中海马CA3区突触结构的影响。方法:给小鼠灌胃益智II号口服液0.2ml.d-1,连续20d。给药结束后,进行一次性被动回避反应训练,24h后检测小鼠记忆的保持。在行为训练前及训练后的第6d、第12d分别取海马CA3区,电镜观察不同时期突触结构的变化。结果:①在行为训练后的第1d、第6和第12d,益智II号组动物的步入潜伏期明显长于对照组(P<0.01,P<0.05);②行为训练后的第6、第12d,不论是对照组还是益智II号组,海马CA3区突触活性区长度均显著大于行为训练前(P<0.01,P<0.05);在行为训练后的同一时期,益智II号组的突触活性区长度明显大于对照组(P<0.01);③在行为训练后的第6d,益智II号组中轴树突触、穿孔突触的数量明显高于学习前(P<0.05),也高于同一时期对照组动物(P<0.05)。结论:益智II号能明显促进小鼠记忆的保持,延缓记忆消退;益智II号促进记忆保持可能与其增加海马CA3区突触活性区长度、轴树突触及穿孔突触的数量有关。     

南药益智AFLP-PCR体系的建立与优化

[目的]建立适合南药益智的扩增片段长度多态性(AFLP)扩增体系来研究不同地理居群益智遗传多样性。[方法]利用植物基因组试剂盒法提取高质量的益智基因组DNA,采用单因素和正交试验对AFLP过程中的酶切和PCR相关影响因素进行优化,并对适合益智AFLP分析的引物组合进行筛选。[结果]实验结果表明最佳酶切反应体系:模板DNA 0.6μg,酶量20 U,酶切时间2 h;最佳AFLP-PCR选择性扩增反应体系(总体积为25μL):10×PCR Buffer(不含Mg2+)2.5μL,d NTPs 2μL,Mg2+(25mmol/L)1.5μL,引物(10 pmol/μL)各2.0μL,Taq酶(5 U/ml)0.5μL,模板稀释25倍2μL。利用建立的最佳扩增体系从64对引物中筛选获得8对选择性引物适合益智AFLP分析。[结论]建立了稳定的AFLP-PCR体系,为研究益智遗传多样性的AFLP分析奠定了基础。     

海南岛兴隆地区某些药用植物中的微量元素

本文研究海南兴隆地区１２种不同类型药用植物微量元素的生物吸收系数（Ａｘ）及其含量水平变化特性,结果表明不同科、属、种植物对同一元素的吸收量差异显著,以Ｍｇ＞Ａｌ＞Ｆｅ＞Ｍｎ＞Ｚｎ＞Ｃｕ为序;同属不同品种植物在不同生境中对微量元素的生物吸收系数各有差别,海南槟榔（Ａｘ０．３０×１０－６、１２．５１×１０－６）＞泰国槟榔（Ａｘ０．２９×１０－６、１１．５９×１０－６＞云南槟榔（Ａｘ０．２７×１０－６、１１．５６×１０－６）,元素间吸收量相比以Ｍｏ＞Ｚｎ＞Ｃｕ＞Ｍｎ＞Ｎｉ为例;同种植物不同器官微量元素的吸收量也是不同的,例如巴戟天的含量以根（２１８．４８×１０－６＞叶（１１５．１９×１０－６）＞茎（１１３．０２×１０－６）。植物与土壤中元素含量消长变化关系密切,相比之下,植物中Ｆｅ、Ｍｎ、Ｚｎ含量均高于Ｃｕ、Ｐｈ、Ｎｉ。绞股蓝（１８９．２６）＞巴戟天（１６９．０４）＞益智（１６１．７０）＞槟榔（１５５．８８）。     

益智醒脑汤治疗老年性血管痴呆60例

目的:研究益智醒脑汤治疗老年性血管痴呆的临床效果。方法:随机抽取2012年1月~2014年1月来我院就诊的老年性血管痴呆患者60例,分为三组,西药组20例,采用吡拉西坦(脑复康)给予治疗;中药组20例,口服益智醒脑汤给予治疗;中西药结合组20例,口服益智醒脑汤给予治疗和吡拉西坦加以治疗。结果:三组患者治疗后总有效率比较差异显著,中西医结合组治疗效果较其他两组好。结论:采取中药益智醒脑汤结合西药吡拉西坦(脑复康)治疗老年性血管痴呆疾病,临床疗效明显,能显著减轻痴呆症状,中西药结合的治疗方式值得在临床上推广应用。     

三种源地益智种子贮藏与萌发特性

利用0.4% 2,3,5-氯化三苯基四氮唑染色测定种子活力,研究广东、广西、海南三地栽培益智(Alpinia oxyphylla)种子的贮藏特性与萌发特性。结果表明,低温保湿条件有利于益智种子贮存,短期贮存可达150 d。益智种子发芽时间较短,发芽相对集中的最适条件是温度30 ℃、500 mg·L-1 GA3浸泡24 h;三个种源地的种子发芽率为88%～90%,不同种源地之间的种子萌发率没有显著差异。