IL-2假单孢菌外毒素嵌合蛋白有极高的细胞毒性

单克隆抗体、植物凝集素或多肽激素与细菌或植物毒素化学偶联后,可引导毒素对特异真核细胞的杀伤作用。Lorberboum—Galski 实验室曾用假单孢菌外毒素(PE)制备了杀伤特异靶细胞的制剂。PE 由三个功能区组成。功能区Ⅰ负责细胞识别作用;功能区Ⅱ负责位易,使毒素跨过质膜进入细胞;功能区Ⅲ负责蛋白质合成,延长因子2的 ADP-核糖基化,这是关系细胞存亡的关键步骤。缺失功能区Ⅰ的外毒素 PE_(40),其 ADP-核糖基化作用完好,但杀伤细胞的活性极低,因其不能识别靶细胞。将 PE_(40)与特定基因融合成嵌合基因,产生嵌合蛋白,利用特定基因产物的导向作用杀伤靶细胞。     

铜绿假单胞菌LasR基因反义核酸原核表达载体的构建及对该菌毒力的影响

PCR扩增LasR基因,用反向克隆法构建LasR基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasRantisense并转化铜绿假单胞菌,经酶切、PCR及测序鉴定重组载体.RT-PCR检测LasB基因和LasI基因mRNA的表达,NAD法测定外毒素A的活性,紫外分光光度计测定绿脓菌素的产生水平.用转化pUCP18/lasRantisense质粒菌株感染大鼠呼吸道并进行病理组织切片检查.PCR扩增出约720bp片段,与GenBank(No:NC_002516)报道的基因片段大小一致,构建了LasR基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasRantisense,并成功转化铜绿假单胞菌,且有效表达,使转化菌的毒力因子弹性蛋白酶、外毒素A和绿脓菌素表达水平均降低.与标准株感染的大鼠比较,转化pUCP18/lasRantisense质粒菌株感染的大鼠支气管炎症明显减轻.上述结果表明,LasR基因反义核酸原核表达载体pUCP18/lasRantisense可以降低铜绿假单胞菌的毒力.     

链格孢霉醇和链格孢霉醇单甲醚产生菌株的筛选

本文对分离自小麦、马铃薯、番茄和茄子上链格孢霉属２个种的９６个菌珠,用枯草杆菌生长抑制试验筛选链格孢霉醇（ＡＯＨ）和链格孢霉醇单甲醚（ＡＭＥ）的产生菌株,有４８株产生毒性作用。１８株产强、中毒性菌用高效液相色谱分析,有１３株产ＡＯＨ和ＡＭＥ。链格孢的产毒素菌株率比茄链格孢低,但产毒素含量却是前者明显高于后者。其中产ＡＯＨ和ＡＭＥ的最高含量,链格孢菌株ＸＡ－８分别为２８０和５１４０ｍｇ／ｋｇ,而茄链     

苏云金杆菌β-外毒素对家蝇幼虫的毒效观察

苏云金杆菌具有多种杀虫的毒素,基本上可分两类:一类为内毒素,即伴孢晶体毒素;一类为外毒素,主要是β-外毒素。β-外毒素对蚊蝇幼虫有明显的毒杀作用。在卫生防疫事业蓬勃发展的今天,开展β-外毒素的研究对除四害有一定的意义。为此,我们开展了有关β-外毒素的实验研究。 苏云金杆菌包括17个变种,分属12个血清型。本文报告的是苏云金杯菌血清型9菌株产生外毒素的情况及对家蝇幼虫的毒效观察。     

重组铜绿假单胞菌外毒素结构域Ia片段的佐剂功效研究

采用分子克隆技术,将铜绿假单胞菌PA103株编码的外毒素结构域Ia(Domain Ia)的基因重组于原核表达载体pET-42b( )上,构建了pET-EPA103蛋白表达载体。转化感受态大肠杆菌DE3。经IPTG诱导表达,初步纯化表达蛋白,用以免疫BALB／c纯系小鼠。制备小鼠脾淋巴细胞悬液,经刀豆素A(ConA)刺激后,用MTT比色法检测特异性淋巴细胞增殖反应。通过rEPA皮下注射BALB／c小鼠耳廓,诱导小鼠迟发型过敏反应(DTH)。采用特异性淋巴细胞增殖反应和DTH试验来检测pET-EPA103表达蛋白所引起的小鼠细胞免疫应答水平,淋巴细胞增殖情况与DTH均可间接反映细胞免疫应答水平,进而评价重组铜绿假单胞菌外毒素(rEPA)Domain Ia蛋白片段的佐剂功效。     

铜绿假单胞菌外毒素A的生产,分离纯化和鉴定

通过对培养基组成、种子活化、接种量和培养条件进行优化,使铜绿假单胞菌外毒素Ａ（ＰＥ）产量达到每毫升５－１０μｇ和１９２小鼠ＬＤ５０,不低于国外报道水平。经二步纯化,ＰＥ蛋白回收率为３３．３３％（ＰＥ）和１６．６７％（ＬＤ５０）,提纯系数为４３８．５（ＰＥ）或２１８．５（ＬＤ５０）,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ呈现一条带,相对分子质量为６６０００,琼脂糖扩散鉴定与兔抗ＰＥ产生一条沉淀线,小鼠半数致死量为０．１５     

基于聚合酶螺旋反应技术快速检测铜绿假单胞菌

【背景】铜绿假单胞菌是一种重要的水源和食源性致病菌,可引起急性肠道炎、脑膜炎、败血症和皮肤炎症等疾病。加强铜绿假单胞菌的快速检测,对保障食品安全具有重要的意义。【目的】建立聚合酶螺旋反应(Polymerasespiralreaction,PSR)方法快速检测铜绿假单胞菌。【方法】针对铜绿假单胞菌外毒素A调控基因——ETA基因(toxA)设计引物,通过引入加速引物、优化反应条件和筛选颜色指示剂,建立快速检测铜绿假单胞菌的PSR方法,并研究方法的特异性、敏感性和可靠性。【结果】建立的方法在等温65°C条件下,40 min内可完成PSR反应,且可通过钙黄绿素和羟基萘酚蓝直接判读结果。方法特异性强、灵敏度高,最低检出限分别为20 CFU/mL细菌和1.011 5 pg/μL基因组DNA。可视化PSR方法检测包装饮用水来源的分离菌株与传统生化方法检测结果一致。【结论】研究建立的可视化PSR方法为铜绿假单胞菌DNA快速检测提供了一种可行的有效手段。     

铜绿假单胞菌外毒素A的调控基因

铜绿假单胞菌(绿脓杆菌)外毒素A(PEA)为该菌最主要的致病物质,由toxA基因编码.本文综述PEA的调控基因,包括正调控基因regA、regB、lasR、ptxR、vfr和负调控基因fur、ptxS.regA是影响toxA转录的最主要基因.除lasR外,其余其因均在转录水平上通过regA调控PEA的产量.     

两种捕食线虫丝孢菌形态多样性研究

多头节丛孢和附胞隔指孢是两种极不常见的捕食线虫丝孢菌,Ａ．ｐｏｌｙｃｅｐｈａｌａ为国内新纪录种。通过对这两种菌的形态观察发现：Ａ．ｐｏｌｙｃｅｐｈａｌａ的大、小分生孢子均可萌发,后代同母体,小分生孢子一般为单端萌发,大分子生孢子为两端萌发,并且小分子孢子可以继续发育形成在分生孢子。这两种菌均形成类似厚坦孢子的结构。     

细菌还原酪酸盐

酪酸盐是电镀业和其它工业生产过程的一种有毒副产物,存在于这些行业的废水里,利用荧光假单胞菌(Preudomonas Fluorescens)的一个菌株能够去除酪酸盐。荧光假单孢菌耐酪酸盐,在厌氧或好气条件下能够使溶液中的Cr~(6+)还原成为Cr~3。细菌也使污染生活废水的酪酸盐降低,因