抗虫玉米CM8101定性检测方法的建立

转基因抗虫玉米CM8101是经人工改造合成的转Bt抗虫基因Cry1Ab?Ma转基因玉米新品系,由我国自主研发,具有更优良的抗虫性,目前已进入生产性试验阶段,具有广阔的产业化应用前景。依据CM8101的5′端旁侧序列信息,设计并筛选出最佳引物探针组合,通过普通PCR和实时荧光PCR技术,建立了转基因抗虫玉米CM8101的两种特异性定性检测方法。结果显示,普通PCR检测方法检出限达0.1%,实时荧光PCR检测方法检出限达0.05%。这两种定性检测方法的建立为今后准确高效检测转基因抗虫玉米CM8101及其产品提供了新的参考方法。     

抗菌肽CM4抗K562癌细胞的超微结构研究

报道了家蚕抗菌肽CM4抗K562癌细胞的体外实验研究.结果表明：纯化后的家蚕抗菌肽CM4对培养的K562(人髓样白血病细胞)有很强的杀伤作用.用扫描和透射电镜观察超微结构以及用激光共聚集显微断层图像分析,表明微量纯化的抗菌肽CM4能使K562癌细胞产生一系列的病理变化,可造成细胞高度肿胀,膜与胞质分离,细胞器和膜结构排列紊乱,细胞表面微绒毛消失,出现不规则的孔洞,细胞骨架严重破坏,膜局部结构破裂,缺损,胞浆内容物大量外泄,最终细胞解体,崩解成碎片.     

抗菌肽CM4对酿酒酵母原生质体再生抑制作用的研究

抗菌肽CM4能抑制酿酒酵母原生质体的再生,随着加入抗菌肽浓度的增大,原生质体的再生率下降。用荧光素FTTC标记的抗菌肽处理原生质体,激光共聚焦扫描电镜观察,抗菌肽分子覆盖于膜,破坏了原生质体的膜结构,改变了原生质体的膜渗透性。最终原生质体无法恢复细胞壁而死亡。     

CM2细胞株及其类C型逆转录病毒的电镜观察

本文报告了ＣＭ＿２细胞的超微结构及其所携带的Ｃ型病毒颗粒形态和形态发生。细胞大小约７－１５μｍ,细胞及其核的多形性具有恶性淋巴细胞特征。在细胞外和细胞内扩张的内质网地中可见大量Ｃ型病毒颗粒。病毒颗粒大小约６８．１－９４．３ｎｍ,平均８１．２ｎｍ。细胞外的病毒颗粒多数具有大小、形态各异的致密核芯,而在内质网池中病毒颗粒的核芯多数呈低密度。病毒颗粒从细胞膜通过芽生方式形成。     

10CM短柱快速分离3-MH的实验研究

本研究在改进后短程序基础上,对氨基酸分离柱进行了改进。改进后的分离柱长为10cm。比原来20cm长柱分离3—MH的时间缩短了近1/2。实验所得的(回收率为97.59%,分离度0.89±0.02。变异系数1.17)这些指标较国外用其它方法所得的结果有良好的相关性。多次测定结果说明长柱与短柱比较无明显差异。证明了短柱对3—MH含量无影响。这一改进所建立的方法大大地缩短了样品的分析时间,节约了大量进口试剂,开展这方面的工作将有利益提高严重烧伤、创伤后蛋白质代谢和营养学等方面的研究水平。     

抗菌肽CM4基因克隆及其在毕赤酵母中的表达鉴定

为了在毕赤酵母中获得抗菌肽CM4表达,将抗菌肽CM4基因克隆入表达质粒pPIC9,SacⅠ线性化的重组表达质粒pPIC9-CM4电击转化P.pastorisGS115(his-),采用MM、MD板和PCR法筛选Mut 表型,甲醇诱导表达;抗菌活性检测、Tricine-SDS-PAGE及酸性活性电泳均表明抗菌肽CM4在毕赤酵母中成功地分泌表达;重组抗菌肽CM4对黑曲霉(Aspergillus niger)、绿色木霉(Trichoderma viride)都有很强的抑菌活性。     

大肠杆菌CM/PDT抗反馈抑制突变体的构建及其性质

为了获得具有高催化活性且抗反馈抑制的大肠杆菌分支酸变位酶 预苯酸脱水酶 (chorismatemutase prephenatedehydrataseCM PDT) [EC5 .4 .99.5 EC4 .2 .1.5 1],通过相关菌种CM PDT氨基酸序列同源比较 ,寻找高度保守位点 .用定点突变及PCR法构建突变酶M1(缺失 30 4T、30 5G、Q30 6K)、M2 (缺失W 338)、M3(缺失 30 1～ 386位氨基酸 )、M32 9(E32 9A)和M374 (C374A) ,野生型及各突变型基因与pET2 8a(+ )载体连接后 ,表达融合蛋白 .在非变性条件下 ,由TALON金属螯合亲和层析柱纯化野生型和突变体的酶蛋白 .酶活性测定表明 ,突变体M3的PDT活性下降为野生型活性的 2 9% ,但保持了CM活性 .突变体M374保持了CM ,PDT两种酶的活性 ,突变体M1、M2、M32 9的CM ,PDT活性有一定程度的提高 .酶抗反馈抑制作用检测表明 ,突变体M3、M374解除了苯丙氨酸的反馈抑制作用 ,M1、M2、M32 9部分解除了苯丙氨酸的反馈抑制作用 .与含野生型pheA基因的E .coliBL2 1菌株相比 ,含突变基因的E .coliBL2 1菌株对 10mmol L的苯丙氨酸代谢类似物具有强的抗反馈抑制作用 ,其中M1,M2 ,M3对 2 0mmol L的类似物具有抗反馈抑制作用     

抗菌肽CM4对串珠镰孢菌孢子的抑制杀伤效应

The antibacterial peptide CM4 inhibits growth of conidia of Fusaricum moniliforme. The observation by using the electron microscope showed that some cells were empty and interior structure twisted into helix. Conidia cells in control group were in good condition, normally grew up. The fungal conidia treated with the antibacterial peptide CM4, then confocal laser scanning microscope were performed. As a result, it was showed that FITC-labeled peptide assembled in cells, centre of which had more peptides than two ends. Then conidia split, became empty. Finally the cells plasma membrane disintegrated and died, lead to small fragments.     

抗菌肽CM4对串珠镰孢菌孢子的抑制杀伤效应

家蚕抗菌肽CM4可抑制串珠镰孢菌孢子的生长发育.扫描电镜超微结构观察显示孢子空泡化,内部结构萎缩成团,对照组的孢子结构则完好无损,发育正常.家蚕抗菌肽与真菌作用,用激光共聚焦扫描图象分析,发现荧光素FITC标记抗菌肽先是聚集包围细胞,呈中间浓度大,两头浓度小状态分布,进而两头断裂,或形成空泡,最后连空泡的膜也破裂,细胞死亡,形成一堆碎片.     

CM对调节由放疗导致免疫功能紊乱的试验研究初报

目前,因使用放射治疗导致机体免疫功能下降而引起致死性继发感染仍是癌症患者死亡原因之一。近年来许多科研工作者对放疗导致免疫功能紊乱应用药物防治进行了大量工作,但其主要防治原则仍是通常使用化学合成药物。这类药物大部分有效作用与有毒副作用同步出现,因此给临床应用带来很大困难。虽有些科学工作者对中药在防治放疗损伤作用方面进行了若干工作,但迄今仍未形成有确切疗效的方药应用于临床。由于肿瘤患者广泛进行放疗,研究中药对放射损伤的防治作用已成为当前一项重要课题。本文仪就中药方剂CM对放疗引起免疫功能紊乱的调节作…     

眼镜王蛇蛇毒神经毒素CM—11三级结构的确定

在完成了眼镜王蛇毒液抽提秀ＣＭ－１１的残基质子谱峰归属和二级结构的判定后,利用＾１Ｈ的ＮＯＥＳＹ谱和ＤＱＦ－ＣＯＳＹ谱选取了距离约束,测定了Φ角和ｘ１,并做了部分β＾１上立体归属。利用度量矩阵距离几何法计算了其三维空间结构,并进行了结构的优化。     

家蚕抗菌肽CM4对大肠杆菌超微结构影响的研究（简报）

The effect of antibacterial peptide CM4 of Bombyx mori against E. coli K12 was investigated using scanning electron microscopy(SEM) and transmission electron microscopy (TEM). The ultrastructural changes of E. coli K12 were observed by the challenge of the purified antibacterial peptide CM4. The results showed that the antibacterial peptide caused a series of pathological changes on E. coli. SEM and TEM revealed aggregates of bacteria and SEM revealed wrinkled bacterial surfaces in the early stage. Thereafter, plasmolysis was observed with irregular holes appearing in the two ends of bacteria and the cytoplasmic contents of the cells leaking out. Finally, bacteria became empty vesicles and disintegrated into small fragments subsequently. Comparatively, the bacterial membrane was normal and the bacterial structure remained intact in the control group.     

家蚕抗菌肽CM4对大肠杆菌超微结构影响的研究*(简报)

The effect of antibacterial peptide CM4 of Bombyx mori against E. coll K12 was investigated using scanning electron microscopy(SEM) and transmission electron microscopy (TEM). The ultrastructural changes of E. coli K12 were observed by the challenge of the purified antibacterial peptide CM4. The results showed that the antibacterial peptide caused a series of pathological changes on E. coli. SEM and TEM revealed aggregates of bacteria and SEM revealed wrin-kled bacterial surfaces in the early stage. Thereafter, plasmolysis was observed with irregular holes appearing in the two ends of bacteria and the cytoplasmic contents of the cells leaking out. Finally, bacteria became empty vesicles and disintegrated into small fragments subsequently. Comparatively, the bacterial membrane was normal and the bacterial structure remained intact in the control group.     

眼镜王蛇蛇毒神经毒素CM—11二级结构单元的判定

眼镜王蛇毒液抽提物ＣＭ－１１为含７２个残基的长链神经毒素,对其进行了ＤＱＦ－ＣＯＳＹ,ＴＯＣＳＹ和ＮＯＥＳＹ等一系列２Ｄ－ＮＭＲ谱测定,通过系统地分析各种ＮＯＥ信息,化学位移的分布等数据推测了蛋白质有规律二级结构,最后利用ＭＣＤ主链引导法确定它的二级结构,其中有三段反平行β折叠股（Ｉ２０～Ｗ２６,Ｒ３７～Ａ４３和Ｖ５３～Ｓ５９）,一段α螺旋构象（Ｗ３０～Ｇ３５）和四个可能的转角（Ｐ７～Ｋ１０,Ｃ１     

草莓根腐病的病原菌分离鉴定及拮抗菌CM3的抑制作用研究

从草莓根腐病病株根部成功分离了2株真菌FC2016-3和FC2016-7,经过鉴定确定其为根腐病的病原菌——尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)。解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefacien)CM3对菌株FC2016-3和FC2016-7有明显的抑制作用,也对其他土传病害病原菌有较好的抑制效果。盆栽实验结果显示,菌株CM3对尖孢镰刀菌FC2016-7引起的草莓根腐病的防治效果达到了64.86%,而且还具有促进草莓根部生长的能力。研究表明菌株CM3是一株既能防病也能促生的菌株,适合开发成微生物制剂。     

抗菌肽CM Ⅳ突变体基因在E.coli中融合表达的研究

根据家蚕抗菌肽CMⅣ的氨基酸序列,利用E.coli偏爱的密码子设计并合成其突变体DNA,克隆到融合表达载体pEZZ318中,在E.coli中进行融合表达,经亲和层析得到26mg/L的融合表达产物.用化学方法裂解该融合表达产物,得到了具有抗菌活性的突变体抗菌肽CMⅣ.     

应用AR—CM—MIC阳离子测定系统检测单个神经元内游离钙

运用Ca~(2 )指示剂Fura-2作为细胞内钙离子的荧光探针,采用精密的AR-CM-MIC阳离子测定系统,检测了分离的单个神经细胞内游离钙离子浓度的动态变化,同时观察了钙离子载体、钙螯合剂等多种药物对细胞内钙浓度的影响,并追踪刺激前后的瞬间变化,探讨此项技术应用于检测细胞内游离钙的灵敏度及适用范围,取得了良好的效果。     

中国家蚕抗菌肽人工合成类CMⅣ基因在甜菜夜蛾虫体中的表达

将人工合成的中国家蚕抗菌肽类CMⅣ基因与抗菌肽信号肽基因连接 ,经EcoRⅠ、HindⅢ双酶切后 ,克隆于pFASTBacⅠ的EcoRⅠ、HindⅢ酶切位点之间 ,得到重组转座载体pFASTBac ABP ,经测序证明阳性克隆正确。将重组转座载体转化HD1 0Bac大肠杆菌 ,得到重组Bacmid ABP。将重组Bacmid转染sf2 1细胞及感染甜菜夜蛾 (Laphygmaexigua)幼虫 ,在培养细胞上清及虫体血淋巴中均测到抗菌活性。经Northernblotting证明感染甜菜夜蛾幼虫中有类CMⅣmRNA的存在。且表达产物在酸性电泳中电泳行为与天然抗菌肽CMⅣ组分相似。为进一步利用昆虫细胞及虫体生产抗菌肽药物打下了基础。