抗原的加工和提呈

抗原的加工有两条不同的途径：一条是内源性抗原途径,抗原在内质网（ＥＲ）和高尔基器内加工并与ＭＨＣＩ类分子结合后被提呈到细胞表面,加工后的抗原能被具有ＣＤ８分子的Ｔ细胞识别：另一条是外源性抗原途径,抗原在内吞体（ｅｎｄｏｓｏｍｅ）被加工降解并与ＭＨＣⅡ类分子结合后转运到细胞表面,它可被具有ＣＤ４分子的Ｔ辅助细胞（ＴＨ）识别。本从分子生物学角度描述了两条加工途径的合同制,为某些疾病的诊断和免疫治疗,     

Ⅱ类抗原提呈的分子机制及分子伴侣Ii研究进展

本文综述MHC Ⅱ抗原提呈的分子机制,并着重对MHC Ⅱ抗原提呈通路中的分子伴侣恒定链(Invariant chain,Ii)的结构、功能研究的近期进展作了回顾,对近年来开展起来的利用Ii链作为内源性靶向载体,将目的抗原表位内源性靶向MHC Ⅱ抗原结合凹槽的研究进行了简单的综述,内源性靶向为疫苗设计提供了很好的思路,可以应用于病原微生物、肿瘤和变态反应性疾病的治疗和预防中。     

PLGA人工抗原提呈细胞载体的制备

目的:目前常用的载体材料,在体内很难降解,限制了其在体内的应用,本文通过用PLGA微球制备人工抗原提呈细胞(AAPC)载体,对其功能进行验证.希望此方法能弥补传统方法的不足.方法:将软脂酸偶联到亲和素上,然后按照传统的复乳法来制备PLGA微球,并且通过使用荧光素(FITC)标记、生物素化的牛血清蛋白(BSA)对其功能进行验证.结果:通过该方法可以得到表面固定生物素的PLGA微球,并且证明软脂酸修饰并未影响到亲和素分子和生物素的结合,生物素化的BSA分子可以有效的结合到微球的表面.结论:PLGA微球表面很难引进合适的化学基团,导致其不能像聚苯乙烯微球那样通过化学反应来将亲和素分子固定在微球的表面上,通过将软脂酸偶联到亲和素分子上,可改变其表面很难引进合适的化学基团的不足,用其微球可用于制备AAPC载体.人工抗原提呈细胞是免疫学研究领域的新思路,可在基础免疫研究和临床治疗方面发挥较大的作用,但作为一门新兴技术,在制备、效果评价及应用方面需要逐渐完善和成熟,用PLGA微球为载体构建,弥补了磁珠、聚苯乙烯不能在体内降解的不足,且安全无毒,可供参考.     

DNA传感器及其免疫信号传导通路的研究新进展

DNA于哺乳动物细胞质中的存在是一个危险信号,提示机体内微生物感染的存在。近五年来的研究显示,细胞质DNA的传导机制是免疫系统产生免疫应答的分子基础。迄今为止已报道多种DNA传感器,其中STING是一个关键的衔接蛋白,参与大部分DNA信号传导途径。最近,c GAS-c GAMP第二信使通路、IFI16及其他传感器的发现为解析胞质DNA识别的分子机制提供了新见解。这些重要的发现有助于了解宿主防御系统,提高疫苗免疫原性,为感染性疾病的预防与治疗提供新思路。     

组织蛋白酶S在抗原提呈过程中的作用

效应T细胞激活需要两个或以上的信号诱导.抗原肽结合MHC-Ⅱ分子的溶酶体途径（第一信号）包括两个重要的步骤：不变链（invariant chain Ii）降解和抗原加工.目前所知的溶酶体蛋白酶中,组织蛋白酶S（cathepsin S,cat S）被认为以非冗长的作用参与了上述两步过程,其还参与了降解细胞外基质（extracellular matrix,ECM）的过程.因此被认为在调节免疫、自身免疫性疾病、抗肿瘤免疫、组织重塑等方面是具有潜力的研究靶点.     

鱼类DNA疫苗研究的新进展

疫苗及其预防接种是控制动物病原疾病、保障养殖业持续发展的重要手段。       

DNA疫苗在肌内编码抗原并与免疫原性相关

该研究证明了DNA疫苗注射后在肌肉组织中产生了病毒抗原,并用黄病毒系统检验了其在小鼠中与抗体产生的关系。为达到抗原生产的检测性水平,作者使用了无针注射器,并用夹心酶联免疫吸附法检查了10％的四头肌匀浆物中的病毒抗原,比较了抗登革1型(名为pcD1ME)、     

人喉癌组织中浸润树突状细胞抗原提呈效应的形态学研究

目的:探讨人喉癌组织中肿瘤浸润树突状细胞(tumor infiltrating dendritic cell,TIDC)肿瘤抗原提呈效应。方法:采用光镜、透射电镜和免疫组化方法观察28例手术切除的人喉癌中TIDC和肿瘤浸润淋巴细胞(tumor infiltrating lymphocytes,TIL)的形态学表现。结果:早期人喉癌组织中TIDC主要分布在癌周区及癌巢内,病变早期TIDC和TIL的浸润比晚期明显(P<0．01)。透射电镜下可见形态不一的TIDC和TIL广泛分布于癌巢边缘、游走于癌周边组织的血管和淋巴管周围。TIDC与肿瘤细胞、TIDC与TIL、TIL与TIL、TIL与肿瘤细胞之间存在多种形式的膜接触。与TIL接触的肿瘤细胞,细胞核均质化。细胞膜消失呈凋亡状态。癌晚期TIDC与TIL数量明显减少,于癌巢内常见凋亡的TIDC与TIL。结论:人喉癌组织中存在不同形态的TIDC与TIL,TIDC、TIL、癌细胞彼此密切接触发生免疫应答反应,TIDC、TIL的数量和活跃状态与肿瘤进展密切相关。     

禽流感病毒感染食蟹猴肺组织内抗原提呈细胞亚型分析

目的分析禽流感病毒感染的食蟹猴肺组织内抗原提呈细胞的不同亚型。方法收集中国医学科学院实验动物研究所病理室禽流感病毒H5N1亚型感染的食蟹猴肺组织蜡块标本,观察其病理学变化及运用免疫组织化学的方法进一步分析CD68、CD14及S-100在感染禽流感病毒食蟹猴肺组织中的表达。结果禽流感病毒感染的肺组织内肺间隔增宽伴巨噬细胞为主的炎细胞浸润,肺泡腔内可见血浆蛋白及纤维素渗出。部分肺泡间隔断裂、巨噬细胞及淋巴细胞浸润。肺组织内H5N1病毒抗原染色呈阳性。肺间隔及肺泡内可见大量CD68阳性细胞,局部可见散在CD14和S-100阳性细胞。结论禽流感病毒感染的食蟹猴肺组织内抗原提呈细胞主要以巨噬细胞为主。     

Efficacy of a DNA Vaccine Carrying Eimeria maxima Gam56 Antigen Gene against Coccidiosis in Chickens

To control coccidiosis without using prophylactic medications, a DNA vaccine targeting the gametophyte antigen Gam56 from Eimeria maxima in chickens was constructed, and the immunogenicity and protective effects were evaluated. The ORF of Gam56 gene was cloned into an eukaryotic expression vector pcDNA3.1(zeo)+. Expression of Gam56 protein in COS-7 cells transfected with recombinant plasmid pcDNA-Gam56 was confirmed by indirect immunofluorescence assay. The DNA vaccine was injected intramuscularly to yellow feathered broilers of 1-week old at 3 dosages (25, 50, and 100 µg/chick). Injection was repeated once 1 week later. One week after the second injection, birds were challenged orally with 5×10⁴ sporulated oocysts of E. maxima, then weighed and killed at day 8 post challenge. Blood samples were collected and examined for specific peripheral blood lymphocyte proliferation activity and serum antibody levels. Compared with control groups, the administration of pcDNA-Gam56 vaccine markedly increased the lymphocyte proliferation activity (P<0.05) at day 7 and 14 after the first immunization. The level of lymphocyte proliferation started to decrease on day 21 after the first immunization. A similar trend was seen in specific antibody levels. Among the 3 pcDNA-Gam56 immunized groups, the median dosage group displayed the highest lymphocyte proliferation and antibody levels (P<0.05). The median dosage group had the greatest relative body weight gain (89.7%), and the greatest oocyst shedding reduction (53.7%). These results indicate that median dosage of DNA vaccine had good immunogenicity and immune protection effects, and may be used in field applications for coccidiosis control.     

突变型乙肝病毒核心抗原DNA疫苗的体外表达

目的:构建突变型核心抗原核酸疫苗,观察该核酸疫苗在体外蛋白的表达.方法:采用基因工程定点突变技术,构建5种突变型核酸疫苗,分别去除乙肝病毒核心抗原N端的第1、2位氨基酸,命名为M12,去除3、4位氨基酸命名为M34以及去除5、6位的氨基酸命名为M56,用上述构建的核酸疫苗与野生型HBc核酸疫苗(pJW4303/Hc)及空载体质粒pJW4303分别用脂质体转染293T细胞,应用蛋白印迹法检测核心蛋白的表达.结果:经过pstl和BgI双酶切和测序鉴定结果突变型核心抗原核酸疫苗构建成功.在去除2个氨基酸的核酸疫苗结果中显示:野生型pJW4303/HBe、M12、及M56体外转染293T细胞后,在细胞上清和裂解中能很好的表达,而M34上清未见表达,仅裂解中可见极少量疑似表达条带;在原有基础上分别去除第3位和第4住氨基酸,命名为M3和M4,结果显示M3上清未见表达,裂解液中可见少量表达,而M4在上清和裂解中均可见明显的表达.结论:去除核心抗原N端第3位的氨基酸(M3)可以明显影响核心抗原的表达,HBcAg氨基端第3位氨基酸对蛋白的表达可能起到重要的作用.     

丙型肝炎病毒多表位DNA疫苗的研究进展

丙型肝炎病毒（hepatitis C virus,HCV）是非甲非乙型肝炎的主要病原,目前还没有有效的预防和治疗手段。多表位DNA疫苗(multi-epitope DNA vaccine, minigenes/epigenes)是指通过筛选与组合优势抗原表位(包括T细胞、B细胞表位)基因,以能产生高效细胞、体液免疫应答进而清除HCV病毒为目的的新型核酸疫苗。其优势在于通过选择最具免疫保护潜力的表位以覆盖尽量多的病毒亚型和诱导全面的机体抗病毒免疫应答,并尽量减少无关、干扰和抑制序列可能产生的负面影响。本文介绍近年来国内外在丙型肝炎多表位DNA疫苗方面的研究进展,并展望了其发展方向。     

Genetic Control of Immune Responses to HIV-1 env DNA Vaccine

We investigated the genetic control of immunoglobulin production and the delayed-type hypersensitivity (DTH) response produced by an HIV-specific DNA vaccine using several strains of mice. Murine antigen-specific immunoglobulin production was determined by ELISA. The DTH response was assessed in terms of the footpad swelling reaction. All strains of mice, except for B10.RIII and B10.T(6R), exhibited strong immunoglobulin production and footpad swelling in response to the DNA vaccine. In vitro treatment of lymphoid cells with monoclonal antibodies showed that the footpad swelling response was mediated by CD4⁺8^? and Ia— T cells. However, CD8⁺ T cells did not suppress footpad swelling. There was no difference in the induction of HIV-specific immunoglobulin production or DTH response induced by the DNA vaccine among the strains, suggesting that HIV-specific DNA vaccine is useful for immunizing various populations against HIV-1.     

IL-12增强HBV融合抗原DNA疫苗在小鼠诱导的细胞免疫应答

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)极易形成慢性感染,主要机制在于感染者不能产生强有力的细胞免疫应答以清除病毒[1].慢性HBV感染者体内虽然存在HBV抗原特异性T淋巴细胞,但对HBV抗原的反应性较低.研究发现,增强这类T淋巴细胞的反应性,可以促进HBV的清除[2].     

减毒沙门氏菌作为DNA疫苗载体的研究进展

随着沙门氏菌基因组学的深入研究以及DNA重组技术的发展,使得对沙门氏菌进行精确的不可回复性的基因缺失减毒成为可能。减毒沙门氏菌可作为DNA疫苗载体,特异性地将其携带的质粒DNA靶向性的传递给巨噬细胞、树突细胞等抗原递呈细胞,从而有效激发相应的体液与细胞免疫应答。减毒沙门氏菌已作为疫苗载体在针对细菌、病毒、寄生虫等的DNA疫苗研究中得以广泛应用。     

Multiple Structural and Epigenetic Defects in the Human Leukocyte Antigen Class I Antigen Presentation Pathway in a Recurrent Metastatic Melanoma Following Immunotherapy

Scant information is available about the molecular basis of multiple HLA class I antigen-processing machinery defects in malignant cells, although this information contributes to our understanding of the molecular immunoescape mechanisms utilized by tumor cells and may suggest strategies to counteract them. In the present study we reveal a combination of IFN-γ-irreversible structural and epigenetic defects in HLA class I antigen-processing machinery in a recurrent melanoma metastasis after immunotherapy. These defects include loss of tapasin and one HLA haplotype as well as selective silencing of HLA-A3 gene responsiveness to IFN-γ. Tapasin loss is caused by a germ-line frameshift mutation in exon 3 (TAPBP^684delA) along with a somatic loss of the other gene copy. Selective silencing of HLA-A3 gene and its IFN-γ responsiveness is associated with promoter CpG methylation nearby site-α and TATA box, reversible after DNA methyltransferase 1 depletion. This treatment combined with tapasin reconstitution and IFN-γ stimulation restored the highest level of HLA class I expression and its ability to elicit cytotoxic T cell responses. These results represent a novel tumor immune evasion mechanism through impairing multiple components at various levels in the HLA class I antigen presentation pathway. These findings may suggest a rational design of combinatorial cancer immunotherapy harnessing DNA demethylation and IFN-γ response.     

一种新型疟疾核酸疫苗生产工艺的初步研究

疟疾是危害人类健康和生命的主要寄生虫病之一,寻找合适的疫苗一直是该病控制的重要方向。在疟疾核酸疫苗方面作了系列尝试,取得较好研究结果,并最终构建了以胸腺嘧啶合成酶基因为筛选标记的、具有大肠杆菌平衡致死特征的新一代疟疾核酸疫苗pThyAAWTE。对影响工程菌高密度发酵的几个因素进行了分析,所优化程序可使工程菌发酵密度达OD60060以上;此外,还对质粒初步纯化过程中的几个重要参数进行了分析,初步结果表明,悬浮液体积(ml):菌体湿重(g)在2:1以上,对质粒的得率没有明显影响;碱裂解时间在一定范围内不影响质粒的质量;合适的悬浮液体积/裂解液/中和液比能明显提高质粒产量;用优化程序所提取的质粒其产量与试剂盒提取的量相当。为pThyAAWTE的大规模纯化打下了基础。     

DNA疫苗免疫佐剂的研究进展

DNA疫苗是最近几年从基因治疗研究领域发展起来的一种新型疫苗,它能诱导机体产生持久的体液免疫和细胞免疫应答,能够抗病毒,细菌和寄生虫的感染,对自身免疫性疾病和过敏性疾病有一定的疗效作用。但与传统的灭活疫苗相比,其免疫效价还比较低,最近的研究表明：联合使用DNA疫苗和疫苗佐剂如细胞因子,协同刺激分子等有助于提高DNA疫苗的免疫效价,这一发现有利于研制更有效的DNA疫苗,本文就通过使用免疫佐剂提高DNA免疫效价的最新进展做一综述。     

鼠疫亚单位疫苗研究进展

鼠疫 ,由于其强烈的传染性和极高的致死率 ,使得人们在应对它时 ,必须侧重于早期的防治。传统疫苗存在安全隐患 ,且存在效率低 ,接种反应率高以及不能保护人体免受肺鼠疫侵害等缺陷。近年来生物技术的迅速发展 ,为开展对鼠疫传统疫苗的改进和新疫苗的研究创造了条件 ,而这些研究当中 ,成果最为丰富的当属亚单位疫苗。目前鼠疫亚单位疫苗的研究大多围绕对鼠疫杆菌免疫原性起决定作用的两种主要抗原成分 (F1抗原和V抗原 )展开 ,按此研究方向浅谈其研究进展。