肠道病毒EV71 IgM抗体参考品的建立

目的建立肠道病毒EV71 IgM抗体检测用参考血清盘。方法通过收集手足口病感染早期患者的咽拭子和血清,对咽拭子病毒进行分离、鉴定、基因分型,通过血清中和试验及酶联免疫吸附试验(捕获法)的验证,确定EV71 IgM抗体阳性样品,组建EV71 IgM抗体参考血清盘,并经3家实验室对该参考血清盘进行协同标定和确认。结果 12名患儿的咽拭子中均分离到EV71病毒,在RD细胞上引起细胞病变。通过套式PCR扩增、序列测定后进化树分析确认均为流行的C4基因亚型。每名患儿的双份血清均可中和EV71病毒,抗体效价为1∶512~1∶2048。通过捕获法进行EV71 IgM抗体检测结果均为阳性。以此12份样品为原料制备EV71 IgM抗体阳性参考品,同时以12份EV71 IgM抗体阴性血清制备阴性参考品,建立了由12份阳性参考品、12份阴性参考品、1份最低检出限参考品和1份精密性参考品组成的肠道病毒EV71 IgM抗体参考血清盘。通过3家实验室协同标定,各实验室间差异均无统计学意义。结论建立了EV71 IgM抗体检测参考血清盘,为相关检测试剂的质量控制和评价提供了参考标准。     

EB病毒衣壳抗原IgM抗体检测试剂参考品的建立

目的 建立EB病毒衣壳抗原IgM抗体检测试剂国家参考品并制定质量标准。方法 收集并筛选EB病毒衣壳抗原IgM抗体阳性和阴性血浆样本,建立EB病毒衣壳抗原IgM抗体检测试剂国家参考品并进行均匀性和稳定性研究,经10个实验室的协助标定,确定参考品的质量标准。结果 建立的EB病毒衣壳抗原IgM抗体检测试剂国家参考品包括阳性参考品6份、阴性参考品10份、重复性参考品1份和检测限参考品3份。参考品均匀性变异系数(coefficient of variation,CV)为3.1%,满足行业标准CV≤15.0%的要求;2～8℃放置7 d、室温放置3 d和反复冻融3次对参考品均无影响。质量标准为：阳性符合率应≥4/6,阴性符合率应为10/10,重复性(2个浓度水平)的检测结果应均为阳性且CV均≤15.0%,检测限参考品L1应为阳性,L2～L3不作要求。结论 建立的EB病毒衣壳抗原IgM抗体检测试剂国家参考品可用于相关试剂研发的质量控制及评价。     

应用捕获ELISA法检测人巨细胞病毒特异性IgM抗体的研究

应用捕获ＥＬＩＳＡ法检测人巨细胞病毒感染者血清特异性ＩｇＭ抗体。通过与间接ＥＬＩＳ地４７例临床标体的检测比较,该法灵敏度及特异笥均高于间妆法,且不受ＲＦ的影响。试验表明,ＣＭＶＩｇＭ捕获法特异敏感、简便、快速、重复性好。ＣＭＶＩｇＭ捕攻法试剂的研制成功,将为血清学的检测、流行病学的调查及临床诊断等提供可靠的科学诊断依据,有助于优生及伏育。     

HIV-1 P24抗原国家参考品的研制

收集正常人、HIV感染者和疑似感染者血浆以及HIV-1病毒培养裂解液,对其进行HIV抗体、HIV P24抗原、HCV抗体和HBsAg检测,对HIV P 24抗原阳性者进行HIVRNA检测,并对部分样品进行基因分型.以NIBSCP 24抗原标准品的系列稀释样品作为线性灵敏度参考品.经过实验筛选出20份阴性参考品,10份阳性参考品,10份线性灵敏度参考品,2份精密性参考品,共同组成HIV-1 P24抗原国家参考品,经多家不同的试剂进行标定,制定了相应的标准.稳定性研究结果表明,反复冻融三次对该参考品的稳定性没有影响.由此,初步建立了HIV-1 P24抗原国家参考品,该参考品将对HIV-1 P24抗原、HIV抗体/P 24抗原联合检测试剂的质量控制提供重要依据.     

应用捕获ELISA法检测人巨细胞病素特异性IgM抗体的研究

应用捕获ELISA法检测人巨细胞病毒感染者血清特异性IgM抗体。通过与间接ELISA法对 4 7例临床标体的检测比较 ,该法灵敏度及特异性均高于间接法 ,且不受RF的影响。试验表明 ,CMVIgM捕获法特异敏感、简便、快速、重复性好。CMVIgM捕获法试剂的研制成功 ,将为血清学的检测、流行病学的调查及临床诊断等提供可靠的科学诊断依据 ,有助于优生及优育     

应用捕获ELISA法检测人巨细胞病素特异性IgM抗体的研究

应用捕获ELISA法检测人巨细胞病毒感染者血清特异性IgM抗体。通过与间接ELISA法对47例临床标体的检测比较,该法灵敏度及特异性均高于间接法,且不受RF的影响。试验表明,CMVIgM捕获法特异敏感、简便、快速、重复性好。CMVIgM捕获法试剂的研制成功,将为血清学的检测、流行病学的调查及临床诊断等提供可靠的科学诊断依据,有助于优生及优育 。     

人巨细胞病毒IgG 抗体标准品研究进展

人巨细胞病毒(CMV)是威胁人类健康的最重要病原之一。高CMV抗体效价的免疫球蛋白G(IgG)制剂,为临床医生在预防和治疗用药上提供了一个有价值的选择。而CMV免疫球蛋白标准品对于制品的CMV抗体效价测定以及高效价血浆的筛选都至关重要。该标准品对于器官移植/输血安全测试,以及临床诊断都是不可或缺。本综述提供了一种人巨细胞病毒IgG标准品制剂方法以及目前研究进展的概述。此外,本文还关注应用于不同领域的不同CMV IgG抗体效价单位。故本文为人巨细胞病毒免疫球蛋白的开发,人巨细胞病毒IgG抗体诊断试剂的标准化,以及为其质量控制提供参考。     

HIV-1 P24抗原国家参考品的研制

收集正常人、HIV感染者和疑似感染者血浆以及HIV-1病毒培养裂解液,对其进行HIV抗体、HIVP24抗原、HCV抗体和HBsAg检测,对HIVP24抗原阳性者进行HIVRNA检测,并对部分样品进行基因分型。以NIBSCP24抗原标准品的系列稀释样品作为线性灵敏度参考品。经过实验筛选出20份阴性参考品,10份阳性参考品,10份线性灵敏度参考品,2份精密性参考品,共同组成HIV-1P24抗原国家参考品,经多家不同的试剂进行标定,制定了相应的标准。稳定性研究结果表明,反复冻融三次对该参考品的稳定性没有影响。由此,初步建立了HIV-1P24抗原国家参考品,该参考品将对HIV-1P24抗原、HIV抗体/P24抗原联合检测试剂的质量控制提供重要依据。     

鼠疫耶尔森菌F1抗体检测试剂国家参考品的研制

为研制鼠疫耶尔森菌F1抗体检测试剂国家参考品,本研究制备了6份F1抗体阳性参考品、8份F1抗体阴性参考品、1份最低检出限参考品和1份重复性参考品,组成了鼠疫耶尔森菌F1抗体检测试剂国家参考品。对参考品进行均匀性检查及稳定性评估,并组织4家实验室进行协作标定。结果显示,参考品均匀性及稳定性良好。协作标定结果显示,6份阳性参考品阳性率均为100%;8份阴性参考品阴性率均为100%;最低检出限参考品的检出水平介于1～100倍稀释度;重复性参考品检测结果一致(其中酶联免疫法及上转发光法试剂检测结果的变异系数均小于15%)。结果表明,本研究建立的鼠疫耶尔森菌F1抗体检测试剂国家参考品基本符合体外诊断试剂参考品的要求,可用于相关试剂的质量评价。     

人巨细胞病毒特异性免疫球蛋白原料血浆的筛选

用北京贝尔公司的人巨细胞病毒(HCMV)IgG检测试剂盒检测5~6月入库的武汉生物制品研究所(WIBP)下属四个浆站共7433份普通血浆,HCMV-IgG阳性率为36%~55%。建立内部参考品Pc1、Pc2、Pc3、Pc4,用德国赛润公司的HCMV-IgG定量检测试剂盒对内部参考品进行标定,效价分别为648、962、1757、2940PEI-U/ml。以A450值>Pc1为标准确定HCMV-IgG阳性的献血员名单,按照检疫期的要求,利用浆站管理系统软件查找献血员前3个月的血浆编号,统计建档。逐批检测符合检疫期的建档血浆,以A450值>Pc2为标准收集阳性血浆,以A450值>Pc3为标准投料,进行人巨细胞免疫球蛋白(HCMV-IG)的低温乙醇纯化。通过成品的中和试验结果决定收浆方案是否可行。     

麻疹减毒活疫苗国家参考品的制备及标定

为了制备麻疹减毒活疫苗国家参考品,选用国内麻疹疫苗生产株沪191制备麻疹疫苗参考品。生产过程中严格控制精密性、水分含量,对候选参考品进行鉴别试验、水分含量、病毒滴度及无菌检查等检验。检验合格后组织进行候选参考品病毒滴度协作标定,共有5个实验室参加了协作标定。协作标定完成后,对实验室内变异、实验室间变异及国际参考品在不同实验室间的变异进行了分析。此外还对疫苗进行了热稳定性和实时稳定性分析。结果显示经5个实验室协作标定后,麻疹减毒活疫苗国家参考品的滴度为4.96±0.26 lgCC ID50/m l,实验室内部变异在1.09%～4.64%之间,实验室间变异为2.62%。国际参考品在不同实验室间的变异为4.19%。稳定性考核数据表明制备的参考品具有较好的稳定性,符合作为麻疹减毒活疫苗国家参考品的要求,滴度为4.96±0.26 lgCC ID50/m l。     

人巨细胞病毒大外膜磷蛋白pp150羧基末端的高效表达及初步应用

以基因工程抗原取代天然抗原用于人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染的诊断,具有广阔的前景。为此,分离ＨＣＭＶ大外膜磷蛋白ｐｐ１５０基因ＯＲＦ３端４３４ｂｐ（编码羧基末端ａａ９４３～ａａ１０４８）的ＤＮＡ片段,导入带有高水平转录启动子Ｐｔｒｃ和六个串联组氨酸的原核表达载体ｐＴｒｃＨｉｓ,在大肠杆菌中得到高效表达,ＳＤＳ ＰＡＧＥ显示一明显的分子量为１５６ｋＤ的融合蛋白条带,ＬＫＢ激光扫描占菌体总蛋白的５１％以上,并且以可溶性形式存在。表达产物经高效特异性纯化后,ＥＬＩＳＡ结果表明其能够与ＨＣＭＶＩｇＭ阳性血清呈特异反应,为建立新一代ＨＣＭＶＩｇＭ检测试剂盒打下了基础。     

对HCMV UL54 mRNA 片段特异性切割的M1GS构建

人巨细胞病毒是一种DNA病毒,在人群中一般呈亚临床感染和潜伏感染。为研究病毒基因沉默工具和抗病毒制剂,以人巨细胞病毒UL54基因mRNA序列设计互补的外部引导序列,共价结合到大肠杆菌来源RNaseP催化核心M1RNA上,从而构建成M1GS-T6核酶。通过对DNA聚合酶UL54基因亚克隆片段转录产物体外切割研究,证实该核酶具备对UL54mRNA片段的特异切割能力。     

激活补体试验检测静注人免疫球蛋白Fc段生物学活性的优化

优化激活补体试验的条件,完善静注人免疫球蛋白Fc段生物学活性的检测方法。方法采用补体活化经典途径的原理,分别探讨致敏红细胞密度和贮存时间对人免疫球蛋白Fc段生物学活性检测结果的影响;比较手工法和微孔板分光光度法检测Fc段生物学活性的检测结果。结果在致敏红细胞A541 nm=1.3和致敏红细胞贮存5 d时,检测结果较稳定。微孔板分光光度法检测优于手工法。结论完善了人免疫球蛋白Fc段生物学活性的检测方法,检测结果准确、重复性好。     

静注人免疫球蛋白中白喉抗体效价对其Fc段生物学活性检测结果影响的分析

目的分析静注人免疫球蛋白(IVIG)中白喉抗体效价对其Fc段生物学活性检测的影响。方法检测20批IVIG的白喉抗体效价水平和Fc段生物学活性结果,进一步探讨白喉抗体效价与Fc段生物学活性的关系。结果20批IVIG中白喉抗体效价水平均符合中国药典的要求,在3~60 HAU/g之间,其中有两批IVIG的白喉抗体效价水平相对较高,其他18批IVIG的白喉抗体效价水平变化趋势不明显。20批IVIG的Fc段生物学活性均较高,在60%~140%之间。白喉抗体效价水平高者,其Fc段生物学活性并非高,反之亦然。结论 IVIG的Fc段生物学活性与其白喉抗体效价水平无明显的相关性。     

Establishment of national diagnostic reference levels (DRLs) for radiotherapy localisation computer tomography of the head and neck

Aim

The aim of this research is to establish if variation exists in the dose delivered for head and neck (HN) localisation computed tomography (CT) imaging in radiation therapy (RT); to propose a national diagnostic reference levels (DRLs) for this procedure and to make a comparison between the national DRL and a DRL of a European sample.

利用人脐带血干细胞制备人鼠肝组织嵌合体模型

目的利用人脐带血干细胞研究制备HBV感染人鼠嵌合小鼠模型。方法将人脐血干细胞,经尾静脉分两次注射到裸鼠体内。分别于第7,14,21天取肝组织,进行AFP免疫组织化学检测,分析人肝细胞在裸鼠体内嵌合生长情况,并进行乙肝病毒感染实验,定量检测感染后小鼠血清中AFP、ALB。结果实验组小鼠在第7、14、21天肝脏内AFP持续阳性表达,AFP表达于细胞质内。HBV感染后小鼠肝脏HBsAg组化显示密集成片的阳性细胞。实验组和对照组表达差异显著（P〈0.05）。结论将人脐血干细胞移植裸鼠肝脏内可以存活并分化成人肝细胞形成嵌合鼠,并能被HBV感染。     

荧光定量PCR检测土拨鼠肝炎病毒核酸方法的建立

目的建立土拨鼠肝炎病毒（woodchuck hepatitis virus,WHV）核酸的荧光定量PCR（Real-time PCR）检测方法,应用于土拨鼠肝炎病毒模型的研究。方法分别根据土拨鼠肝炎病毒核心抗原（WHcAg）和表面抗原（WHsAg）的DNA序列设计13对扩增引物,从中筛选无非特异性扩增及引物二聚体且灵敏度高的引物,用于土拨鼠血清中WHV DNA的Real-time PCR检测。建立感染土拨鼠肝炎病毒的土拨鼠血清中WHV核酸的Real-timePCR检测方法。结果根据WHsAg基因的5＇端设计的一对引物WHVSF1与WHVSR1,检测灵敏度可达1×101拷贝/μL,病毒拷贝数与Real-time PCR Ct值的标准曲线的R2值为0.997,且电泳未见明显非特异性条带及引物二聚体。结论建立了土拨鼠血清中WHV DNA的Real-time PCR检测方法,该方法为进一步研究土拨鼠肝炎病毒模型奠定了基础。     

改良线栓法大鼠大脑中动脉阻塞模型的建立

目的对大鼠大脑中动脉阻塞（MCAO）再灌注模型进行改良,通过比较再灌注24h时大鼠神经功能评分、梗死率、模型制作时间、成功率和死亡率等指标评价改良线栓法大鼠MCAO再灌注模型的有效性。方法12只SD大鼠随机分为对照和模型两组,对照组采用分离结扎翼腭动脉,从颈外动脉插入线栓至大脑中动脉。模型组采用不分离结扎翼腭动脉,从颈总动脉分叉处插入线栓至大脑中动脉。阻断大脑中动脉血供2h后将线栓拔出实现再灌注。于再灌注24h时观察脑组织组织病理学改变,计算比较两组大鼠神经功能评分、模型制作时间、模型成功率和死亡率以及鼠脑切片TTC染色测量脑梗死率。结果两组MCAO模型在再灌注24h后大鼠神经功能评分、梗死率、模型成功率和死亡率等方面没有显著差异;模型组的模型制作时间显著少于对照组（P〈0．05）。结论采用不分离结扎翼腭动脉,由颈总动脉插入线栓的改良线栓法是稳定和可靠的MCAO造模方法。