缺氧诱导因子-1在非小细胞肺癌胸水中的表达及其与肿瘤血管生成的关系

目的探讨缺氧诱导因子-1(hypoxia inducible factor-1,HIF-1)在非小细胞肺癌胸水细胞中的表达及其与肿瘤血管生成的关系。方法利用免疫组织化学、免疫细胞化学分别检测1180例非小细胞肺癌标本中HIF-1α和HIF-1β蛋白的表达以及非小细胞肺癌胸水细胞中血管生成标记物CD34和VEGF的表达情况,其中包括1060例非小细胞肺癌胸水标本以及用于对照的120例肺穿刺非小细胞肺癌组织标本。结果 HIF-1α在非小细胞肺癌穿刺组织中的表达率72.50%(87/120)明显高于非小细胞肺癌胸水中表达率17.55%(186/1060),差异有统计学意义(P0.05);HIF-1β在非小细胞肺癌穿刺组织中的表达率为77.50%(93/120),而在非小细胞肺癌胸水中表达率为81.42%(863/1060),差异无统计学意义(P0.05);CD34、VEGF在非小细胞肺癌胸水细胞中阳性表达率分别为77.92%(826/1060)、82.92%(879/1060)。HIF-1α与HIF-1β的表达呈显著正相关(r=0.093,P=0.002),HIF-1α与VEGF的表达呈显著正相关(r=104,P=0.001),HIF-1β与VEGF的表达无相关性(P0.05)。结论 HIF-1α在非小细胞肺癌穿刺组织与非小细胞肺癌胸水中的差异性表达,可能与非小细胞肺癌胸水细胞缺氧适应性调节有关,HIF-1与肿瘤血管生成密切相关。     

胸水中VEGF、TNF-α 的检测对良恶性胸水的鉴别诊断意义

目的:探讨检测胸水中血管内皮生长因子(VEGF)、肿瘤坏死因子(TNF-α)水平对良恶性胸水的鉴别诊断意义。方法:采用酶联免疫检测法(ELISA)测定34例良性胸腔积液患者和44例恶性胸腔积液患者胸水中VEGF、TNF-α水平。结果:良性胸腔积液组患者胸水中TNF-α水平显著高于恶性胸腔积液组(P<0.05);良性胸腔积液组患者胸水中VEGF水平显著低于恶性胸腔积液组(P<0.05)。结论:胸水中VEGF、TNF-α水平的检测对良、恶性胸水患者具有鉴别诊断意义。     

脑脊液中转移性腺癌细胞免疫表型的变化

目的探讨脑脊液中转移腺癌细胞在没有血供的条件下的生长特征,是否有血管内皮标记物CD34,CD105,FⅧ,淋巴管内皮标记物D2_40及碱性成纤维生长因子(b-FGF)的表达,并促进肺癌的脑转移及肿瘤细胞自我生存的调控。方法采集109例腺癌脑转移患者的脑脊液为研究对象,其中肺癌脑转移107例(包括49例肺癌术后5年内脑转移,58例无肺癌病史直接经脑脊液穿刺发现肺癌脑转移),乳腺癌2例。以40例主要成分为炎性细胞的脑脊液及40例原发性肺腺癌组织标本为对照,采用免疫化学染色方法检测脑转移腺癌细胞及腺癌组织中CD34,CD105,FⅧ,D2_40,b-FGF,VEGF及vimentin的表达。结果 109例脑脊液标本中,CD34,CD105,FⅧ,D2_40,b-FGF及VEGF在转移癌细胞中的阳性率分别为64.2%,67.9%,66.9%,63.8%,56.8%,70.6%明显高于脑脊液对照组(阳性率均为0)且差异具有统计学意义(P0.05)。vimentin在脑脊液转移腺癌细胞中阳性表达,表达率为88.1%。在原发肺癌标本中,CD34,CD105,FⅧ和VEGF表达较弱或不表达。D2-40在癌中不表达。B-FGF与Vimentin在原发肺腺癌中的表达率分别为50.1%和29.3%。结论在肺癌脑转移过程中,肿瘤细胞能够表达不同的血管生长因子,提示可能具备内皮细胞的生物学特性,可能有助于增强肿瘤细胞的转移能力和对环境的耐受能力。     

MMP-2 VEGF在肺腺癌细胞中的表达及其意义

目的研究探讨基质金属蛋白酶2(MMP-2)及血管内皮生长因子(VEGF)在胸腔积液、痰液中肺腺癌细胞的不同表达及二者在肺癌细胞侵袭转移过程中的相互关系。方法选择胸腔积液、痰液共计264例癌性及异型增生细胞标本经免疫细胞化学方法分别检测MMP-2 VEGF的表达情况。结果免疫细胞化学结果显示:MMP-2在胸腔积液中腺癌细胞、异型增生上皮细胞的表达率分别为71.7%(99/138)、16.7%(6/36),在胸膜炎和结核病变典型良性胸腔积液增生上皮细胞中不表达;在痰腺癌细胞中的表达率为39.1%(27/69),统计结果显示MMP-2在恶性胸腔积液腺癌细胞中的表达率明显高于在异型增生的上皮、增生的上皮及痰腺癌细胞的表达率(P均0.05)。VEGF在胸腔积液中腺癌细胞、异型增生上皮细胞的表达率分别为89.1%(123/138)、33.3%(12/36),在胸膜炎和结核病变典型良性胸腔积液增生上皮细胞中不表达;在痰腺癌细胞中的表达率为47.8%(33/69),VEGF在恶性胸腔积液腺癌细胞中表达率明显高于在异型增生的上皮细胞、增生的上皮细胞及痰腺癌细胞的表达率(P均0.05),且MMP-2同VEGF总阳性表达率之间成正相关(r=0.867,P=0.049)。结果 MMP-2 VEGF在胸水腺癌细胞中高表达,可能与肺腺癌的转移、侵袭有关;两者联合做免疫细胞化学检查对肺腺癌细胞病理诊断有辅助意义。     

兔骨髓基质干细胞向血管内皮样细胞的诱导分化

目的:研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)联合碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)促进兔骨髓基质干细胞向血管内皮样细胞的定向诱导分化,为血管化组织工程骨研究提供实验基础.方法:采集2周龄兔后肢长骨骨髓,用全骨骨髓贴壁法进行原代培养,将获得的第2代骨髓基质干细胞以1× 105/mL密度接种于内皮细胞条件培养基(含10 μg/L VEGF,10 μg/L bFGF,10％胎牛血清的DMEM/F12培养液)进行体外诱导培养,对诱导2周的细胞进行细胞形态观察和表型、功能鉴定.结果:经血管内皮细胞条件培养基诱导2周后的细胞呈扁平形,多边形,表达血管内皮细胞特异性标志CD31、VWF因子,细胞具有吞噬DiI-Ac-LDL和摄取FITC-UEA-1的功能,诱导的细胞可在BD基质胶内形成管腔样结构.结论:血管内皮细胞生长因子联合碱性成纤维细胞生长因子可以成功诱导兔骨髓基质干细胞为血管内皮样细胞,有希望作为组织工程骨的血管化的种子细胞.     

非小细胞肺癌中NF-κ B、VEGF 的表达及其与肿瘤血管形成的研究

目的:探讨核因子-κB(NF-κB)和血管内皮生长因子(VEGF)在非小细胞肺癌中的表达及其与肿瘤血管形成的关系。方法:应用免疫组织化学方法检测56例非小细胞肺癌及20例癌旁肺组织中的NF-κB P65、VEGF的表达,并用抗CD34测定肿瘤血管的密度(MVD)。结果:(1)在非小细胞肺癌中NF-κB P65、VEGF的表达阳性率分别为83.9%(47/56)、69.6%(39/56),明显高于癌旁组织(P<0.05);(2)NF-κB P65的表达在不同的TNM分期、淋巴结及胸腔积液、吸烟的分组之间差异有统计学意义,VEGF的表达在淋巴结及胸膜转移之间差异有统计学意义;(3)NF-κB P65、VEGF、MVD三者间存在明显相关性。结论:NF-κB、VEGF异常表达与NSCLC的发生、发展及肿瘤血管的形成密切的关系。     

非小细胞肺癌组织血管生成相关因子表达及临床病理分析

目的探讨血管内皮生长因子(VEGF)及其受体(Flt-1)、转化生长因子β1(TGF-β1)在非小细胞肺癌(non-smallcelllungcancer,NSCLC)组织血管形成中的意义及与肿瘤临床、生物学行为的关系。方法免疫组化染色观察VEGF、血管内皮生长因子受体-1(Flt-1)、TGF-β1在NSCLC组织中的表达,以CD34免疫组化染色来显示NSCLC组织中微血管生成情况和进行微血管密度判断。结果NSCLC组织中癌细胞不同程度地表达VEGF、血管内皮生长因子受体因子、TGF-β1,而对照组肺组织基本不表达(P<0·05);VEGF、Flt-1、TGF-β1阳性表达的NSCLC组织内微血管计数明显高于VEGF、Flt-1、TGF-β1表达阴性的NSCLC组织(P<0·05);NSCLC组织中VEGF、Flt-1、TGF-β1的阳性表达率和表达强度均与肿瘤淋巴结转移密切相关;随年龄增长,VEGF及其受体Flt-1的阳性表达率有所降低(P<0·05)。结论VEGF、Flt-1、TGF-β1的表达与NSCLC组织内肿瘤血管生成和淋巴结转移有密切关系,VEGF、Flt-1的表达与患者的年龄有一定关系。     

一种新的肿瘤血管生成模型

通过脂质体介导 gfp表达质粒转移及G418筛选获得了稳定表达 gfp的小鼠膀胱移行细胞癌细胞株BTT GFP。利用 gfp作为肿瘤细胞的标记 ,结合罗丹明标记的葡聚糖尾静脉注射作血管造影 ,建立了一种新的肿瘤模型 ,具有简便、可靠、无创伤的优点 ,特别是可以通过荧光显微镜动态观察肿瘤转移病灶形成最早期阶段肿瘤细胞生长与肿瘤局部宿主血管的变化。利用新型鼠耳肿瘤模型观察到移植的肿瘤细胞会主动向宿主血管迁移 ,当肿瘤生长至仅 0 .3mm直径大小时即可见血管生成。免疫组织化学染色观察到肿瘤内新生血管SMA及CD31染色阳性 ;肿瘤细胞不仅高水平表达VEGF ,也高水平表达VEGF的受体Flk 1。提示肿瘤局部存在VEGF自分泌与旁分泌通路 ,肿瘤细胞高水平表达VEGF是新生血管生成的主要原因     

NF—κB、VEGF在非小细胞肺癌中的表达及其与肿瘤血管形成的研究

目的探讨核因子-κB（NF-κB）和血管内皮生长因子（VEGF）在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其与肿瘤血管形成的关系。方法应用免疫组织化学方法,检测56例非小细胞肺癌及20例癌旁肺组织中的NF-κBP65、VEGF的表达,并用抗CD34测定肿瘤血管的密度（MVD）。结果（1）在非小细胞肺癌中NF-κBP65、VEGF的表达阳性率分别为83．9％（47／56）、69．6％（39／56）,明显高于癌旁组织（P〈O．05）;（2）NF-κBP65的表达在不同的TNM分期、淋巴结及胸腔积液、吸烟的分组之间差异有统计学意义,VEGF的表达在淋巴结及胸膜转移之间差异有统计学意义;（3）NF-κBP65、VEGF、MVD三者间存在明显相关性。结论NF-κB、VEGF异常表达与NSCLC的发生、发展及肿瘤血管的形成有着密切的关系。     

恶性胸腔积液中肺腺癌的EGFR、VEGF和P53的表达及分子生物学意义

目的探讨在恶性胸腔积液中肺腺癌细胞中EGFR、VEGF、P53表达的状态和关系及对临床治疗的分子生物学意义。方法利用液基薄层细胞学自动涂片技术方法和免疫化学方法筛查出恶性胸腔积液中肺腺癌77例和良性胸水10例,在用免疫细胞化学染色检测EGFR、VEGF、P53的表达情况。结果免疫细胞化学染色显示EGFR在肿瘤细胞中阳性表达55例,表达率为71.4%;VEGF和P53在恶性肿瘤细胞中阳性表达分别为57和31例,表达率分别为74%和40.3%,EGFR与VEGF表达具有相关性(r=0.609;P=0.000)。结论 EGFR、VEGF和P53在恶性胸腔积液的肺腺癌细胞中具有较高的表达率,且表达具有紧密联系,并可以对临床治疗有一定参考性。     

乳腺癌组织中转化生长因子-beta1 和血管内皮生长因子的表达 及其与血管生成的关系

目的:研究转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)在乳腺癌组织中的表达及其与血管生成的关系。方法:选取65例手术切除乳腺癌蜡块标本及其周围正常乳腺组织,分为两组:A组为对照组,检测标本为乳腺癌癌旁正常乳腺组织;B组为实验组,检测标本为乳腺癌组织,采用免疫组织化学染色和形态计量检测TGF-β1和VEGF在乳腺癌组织中的表达。利用CD34相关抗原标记血管内皮细胞,计数微血管密度(intratumoral mier oveseulardensity,MVD),并分析其与TGF-β1和VEGF表达的关系。结果:65例乳腺癌组织中,TGF-β1的阳性表达率为69.23%(45/65),TGF-β1阳性表达者MVD值(25.31±4.05)显著高于TGF-β1阴性表达者(21.23±4.29);VEGF的阳性表达率为78.46%(51/65),VEGF阳性表达者MVD值(26.62±3.41)亦明显显著高于VEGF阴性表达者(18.95±6.52)(均P<0.05)。不同病理类型的乳腺癌组织中TGF-β1、VEGF的阳性表达率比较差异无统计学意义(P>0.05),但TGF-β1、VEGF的阳性表达与乳腺癌的组织分级、淋巴结转移呈显著正相关(均P<0.05),且组织学分级越高、淋巴结转移越多,MVD值越大。结论:TGF-β1与VEGF在乳腺癌组织的表达高于正常乳腺组织,并与乳腺癌肿瘤血管的生成有关,二者有望作为乳腺癌恶性程度、浸润转移等生物学行为的评估指标。     

mESC衍生内皮祖细胞定向分化为血管内皮细胞促伤口愈合

缺血性功能障碍是重要的全球健康问题。血管内皮细胞 (vascular endothelial cell, VEC) 在血管生成和创面修复中发挥关键作用,血管重建不足可导致慢性不愈合伤口。因此,了解有效的血管内皮细胞生成策略有助于受损组织中的血管再生。胚胎干细胞 (embryonic stem cell, ESC) 在组织的内皮化研究中应用广泛。内皮祖细胞 (endothelial progenitor cell, EPC) 是血管内皮细胞发育中不可或缺的部分。本研究目的在于找到一种小鼠胚胎干细胞 (mouse embryonic stem cell, mESC) 衍生为内皮祖细胞的快速、易筛选且高重复性的方法,并从内皮祖细胞定向分化中获得存活率高和功能性好的血管内皮细胞。结果表明,胚胎干细胞通过10 ng/mL VEGF和5 ng/mL bFGF定向诱导分化为增殖能力强的“铺路石”样祖细胞。同时,差异贴壁法有助于EPC的筛选。而EPC可诱导3 d的祖细胞高表达CD133和CD34(相对表达量分别为0.88 ± 0.04和2.12 ± 0.02);采用acctuse酶消化祖细胞,并在50 ng/mL VEGF和25 ng/mL bFGF的条件下诱导7 d分化为血管内皮样细胞,该细胞不仅高表达内皮细胞标志基因CD31、CD144、LAMA5、Tek、KDR和vWF,高表达标志蛋白CD31、CD144、LAMA5(相对表达量分别为1.07 ± 0.03、0.60 ± 0.02和0.70 ± 0.02),而且具有良好的迁移、成管和Weibel Palade (W-P) 小体形成能力。随后,将PBS、EPC和VEC分别应用于大小相同的创面治疗,EPC和VEC均能加快组织愈合程度(相对愈合率分别为78.93 ± 75.35%、95.57 ± 83.73%和100.00 ± 0.00%),VEC明显增强了伤口的血管生成能力和炎症反应。该研究初步证实,mESC衍生的EPC定向诱导7 d后可分化为血管内皮细胞。此内皮细胞具有较好的组织修复功能,干细胞促进血管生成的生理途径有望成为组织重塑的新靶点。     

某些肿瘤组织中血管内皮生长因子基因的表达

血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factors,VEGF)是新发现的生长因子,特异作用于血管内皮细胞,促进其增殖及新生血管的生成.已确认,它和实体肿瘤的生长有着十分密切的关系.文章报道,利用力子杂交技术分析了胃癌、肾癌、结肠癌和膀胱癌及其癌旁相应组织中VEGF mRNA的表达,结果发现,癌组织较其癌旁组织中vEGF mRNA的表达增高.SGC-7901细胞加TPA 4h后则明显促进VEGF mRNA的表达.转染含人反义N-ras₁ DNA片段重组质粒的人膀胱癌BIU-87细胞系可抑制VEGFmRNA表达.     

Apatinib inhibits the growth of small cell lung cancer via a mechanism mediated by VEGF,PI3K/Akt and Ki-67/CD31

This study aimed to investigate the anti-tumour effect of apatinib on extensive-stage small cell lung cancer (SCLC) and elucidate the associated mechanisms. NCI-H345 cells were selected as model cells because of high expression of vascular endothelial growth factor (VEGF), VEGF receptor 2 (VEGFR2) and phosphorylated-VEGFR2 (pVEGFR2). Cells were exposed to recombinant human VEGF (rhVEGF) and apatinib. Cells were then divided into eight groups, namely, control, rhVEGF, apatinib, rhVEGF+apatinib, serum-free medium (SM), SM+rhVEGF, SM+apatinib and SM+rhVEGF+apatinib. In comparison with the control group, cell proliferation in vitro in apatinib, SM, SM+apatinib and SM+rhVEGF+apatinib groups was inhibited, particularly in SM+apatinib group. The effect of apatinib on tumour growth in vivo was investigated using a mouse xenograft tumour model. In comparison with the control group, tumour sizes were reduced in apatinib-treated group on days 34 and 37. Immunohistochemical and immunofluorescence staining revealed that VEGF, pVEGFR2, PI3K, AKT, p-ERK1/2, Ki-67 and CD31 in the tumour cells of apatinib-treated group were downregulated compared with control group. Haematoxylin and eosin staining revealed that apatinib promoted the necrosis of SCLC cells in vivo. In conclusion, apatinib inhibited the growth of SCLC cells by downregulating the expression of VEGF, pVEGFR2, p-PI3K, p-AKT, p-ERK1/2, Ki-67 and CD31.     

血管内皮生长因子与肿瘤

血管内皮生长因子是新近确定的一种具有旁分泌机制的生长因子,能特异作用于血管内皮细胞,促进其增殖及新生血管的形成,同时还有增加血管通透性的作用．由于其生物学活性与实体瘤的生长密切相关,因此对它的研究倍受关注,进展非常迅速．     

Three specific antigens to isolate endothelial progenitor cells from human liposuction material

Background aimsHuman endothelial progenitor cells (EPC) play an important role in regenerative medicine and contribute to neovascularization on vessel injury. They are usually enriched from peripheral blood, cord blood and bone marrow. In human fat tissue, EPC are rare and their isolation remains a challenge.MethodsFat tissue was prepared by collagenase digestion, and the expression of specific marker proteins was evaluated by flow cytometry in the stromal vascular fraction (SVF). For enrichment, magnetic cell sorting was performed with the use of CD133 microbeads and EPC were cultured until colonies appeared. A second purification was performed with CD34; additional isolation steps were performed with the use of a combination of CD34 and CD31 microbeads. Enriched cells were investigated by flow cytometry for the expression of endothelial specific markers, by Matrigel assay and by the uptake of acetylated low-density lipoprotein.ResultsThe expression pattern confirmed the heterogeneous nature of the SVF, with rare numbers of CD133+ detectable. EPC gained from the SVF by magnetic enrichment showed cobblestone morphology of outgrowth endothelial cells and expressed the specific markers CD31, CD144, vascular endothelial growth factor (VEGF)R2, CD146, CD73 and CD105. Functional integrity was confirmed by uptake of acetylated low-density lipoprotein and the formation of tube-like structures on Matrigel.ConclusionsRare EPC can be enriched from human fat tissue by magnetic cell sorting with the use of a combination of microbeads directed against CD133, an early EPC marker, CD34, a stem cell marker, and CD31, a typical marker for endothelial cells. In culture, they differentiate into EC and hence could have the potential to contribute to neovascularization in regenerative medicine.     

雷帕霉素对内皮细胞迁移和血管内皮生长因子表达的影响

目的：研究不同浓度的雷帕霉素对体外培养的人血管内皮细胞（rE）4移及血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法：用含10％胎牛血清的细胞培养基（DMEM）培养正常VE细胞,用10nM,50nM,100nM和200nM的雷帕霉素孵育vE细胞24h,Westernbloting测定雷帕霉素对VE中mTOR和VEGF表达的影响,Transwell迁移模型观察不同浓度的雷帕霉素对内皮细胞迁移影响。结果：①雷帕霉素可显著抑制VE的迁移,除了在100riM之外,基本呈浓度依赖性的。100nM雷帕霉素对VE迁移的抑制作用显著减弱（P〈0．01）。②雷帕霉素对mTOR和VEGF165的表达呈浓度依赖性的抑制;而VEGF121的表达则是先升高后降低,在100nM雷帕霉素时表达最高,远远高于该浓度雷帕霉素时VEGF165的表达,可以解释100nM雷帕霉素时VE迁移抑制显著减轻的现象。结论：雷帕霉素抑制了VEGF165的表达,并且其对VE迁移抑制的效应主要由VEGF165表达减少所介导。VEGF121的表达在一定雷帕霉素浓度范围内可显著上调,从而显著改善了雷帕霉素诱导的VEGF165表达减少所致的内皮细胞迁移抑制。