黄喉wu高级发声中枢及其壳区的神经投射和P物质在发声听觉中枢的分布

用生物素示踪法和P物质(SP)免疫组化技术研究表明：黄喉wu的高级发声中枢(HVc)接受端脑听区(L)、新纹状体中部界面核、新纹状体巨细胞核(MAN)、丘脑葡萄形核、桥脑蓝斑核的传入，并有神经纤维投射到古纹状体栎核(RA)和嗅叶X区(X)；HVc壳投射到RA壳并接受L的传入。听觉控制与学习通路与发声中枢之间有许多神经联系，提示黄喉wu发声学习依赖于听觉反馈。在HVc、RA和MAN有SP阳性细胞体，在X、中脑背内侧核和延髓舌下神经核气管鸣管部、丘脑卵圆核壳区、中脑背外侧核壳区及中脑丘间核有SP阳性纤维和终末。SP广泛分布于发声-听觉中枢，可能参与了它们的活动。     

黄喉鵐高级发声中枢及其壳区的神经投射和P物质在发声听觉中枢的分布

用生物素示踪法和P物质 (SP)免疫组化技术研究表明 :黄喉的高级发声中枢 (HVc)接受端脑听区 (L)、新纹状体中部界面核、新纹状体巨细胞核 (MAN)、丘脑葡萄形核、桥脑蓝斑核的传入 ,并有神经纤维投射到古纹状体栎核 (RA)和嗅叶X区 (X) ;HVc壳投射到RA壳并接受L的传入。听觉控制与学习通路与发声中枢之间有许多神经联系 ,提示黄喉发声学习依赖于听觉反馈。在HVc、RA和MAN有SP阳性细胞体 ,在X、中脑背内侧核和延髓舌下神经核气管鸣管部、丘脑卵圆核壳区、中脑背外侧核壳区及中脑丘间核有SP阳性纤维和终末。SP广泛分布于发声 -听觉中枢 ,可能参与了它们的活动     

黄喉鹀高级发声中枢及其壳区的神经投射和P物质在发声听觉中枢的分布

用生物素示踪法和P物质(SP)免疫组化技术研究表明:黄喉(巫鸟)的高级发声中枢(HVc)接受端脑听区(L)、新纹状体中部界面核、新纹状体巨细胞核(MAN)、丘脑葡萄形核、桥脑蓝斑核的传入,并有神经纤维投射到古纹状体栎核(RA)和嗅叶X区(X);HVc壳投射到RA壳并接受L的传入.听觉控制与学习通路与发声中枢之间有许多神经联系,提示黄喉(巫鸟)发声学习依赖于听觉反馈.在HVc、RA和MAN有SP阳性细胞体,在X、中脑背内侧核和延髓舌下神经核气管鸣管部、丘脑卵圆核壳区、中脑背外侧核壳区及中脑丘间核有SP阳性纤维和终末.SP广泛分布于发声-听觉中枢,可能参与了它们的活动.     

鸣禽锡嘴雀(Coccothraustes coccothraustes)发声中枢的定位研究

用常规组织学,HRP 逆行示踪,电生理等方法确定了鸣禽锡嘴雀控制发声的神经核团及这些核团的定位坐标值。锡嘴雀控制发声的神经通路由四级神经核团组成。位于端脑上纹状体腹侧的尾部区域(HVc)是控制鸣禽发声的高位中枢,它发出的神经纤维投射到端脑原纹状体腹内侧的粗核(RA),由 RA 又发出两束纤维,分別投射到中脑丘间核(ICo)和延脑的中间核(IM)。左右侧发声控制神经通路并非严格单侧性,每侧气管鸣管肌群分別受双侧发声中枢的交叉控制。中脑 ICo 在控制发声行为中具有相对独立性。各级发声核团的定位坐标值为,HVc∶p1.3,L/R2.4,H0.8;RA∶1.4,L/R3.2,H6.0;ICo∶p0.3,L/R2.6,H8.5:IM∶P3.1,L/R1.0,H∶7.8。     

KF核及Btzinger复合体内GABA能神经元向膈神经核的投射

实验在 6只成年猫上进行。将WGA HRP微量注入C5膈神经核内 ,通过逆行追踪及GABA免疫组织化学FITC荧光双重标记方法 ,研究了脑干内GABA能神经元向膈神经核的投射。结果在脑桥KF核和面神经后核周围区 (即B¨otzinger复合体 )观察到GABA HRP双标神经元。另外 ,在中缝大核、旁巨细胞外侧核及前庭神经核也观察到双标神经元。本实验结果表明 :发自上述脑干神经核团 ,特别是KF核及B¨otzinger复合体的GABA能神经元的轴突可投射到膈神经核     

黄喉Jiu高级发声中枢及其壳区的神经投射和P物质在发声听觉中枢的分布

用生物素示踪法和P物质（SP）免疫组化技术研究表明：黄喉Jiu的高级发声中枢（HVc) 接受端脑听区（L）、新纹状体中部界面核、新纹状体巨细胞核（MAN）、丘脑葡萄形核、桥脑蓝斑核的传入,并有神经纤维投射到古纹状体栎核（RA）和嗅叶X区（X）;HVc壳投射到RA壳并接受L的传入。听觉控制与学习通路与发声中枢之间有许多神经联系,提示黄喉Jiu发声学习依赖于听觉反馈。在HVc、RA和MAN有SP阳性细胞体,在X、中脑背内侧核和延髓舌下神经核气管鸣管部、丘脑卵圆核壳区、中脑背我 核壳区及中脑丘间核有SP阳性纤维和终末。SP广泛分布于发声－听觉中枢,可能参与了它们的活动。     

外周伤害性刺激诱导大鼠脑干内延髓网状背侧亚核传入投射神经元的c-fos表达

用荧光金逆行追踪和 FOS荧光免疫组织化学染色相结合的方法对外周伤害性刺激下大鼠脑干内向延髓网状背侧亚核传入投射的神经元中 c- fos的表达进行了研究。在麻醉状况下将 0 .15 μl2 %荧光金注入大鼠单侧延髓网状背侧亚核 ,存活5 d后用 1%福尔马林刺激同侧前爪、后爪和口周 ,2 h后灌注取材 ,再行 FOS免疫荧光标记。结果发现在脑的中脑导水管周围灰质、中缝背核、线形核和中缝大核内观察到荧光金标记细胞、FOS样免疫阳性反应细胞及荧光金 / FOS双标细胞。在这四个核团中 ,双标细胞数分别占荧光金逆标神经元数的 2 5 % (中脑导水管周围灰质 )、 11.7% (中缝背核 )、 8.9% (线形核 )和 12 .1% (中缝大核 )。结果提示在脑干向延髓网状背侧亚核投射的神经元中 ,有一部分与外周伤害性刺激信息的调控有关 ,还有的神经元可能具有其它的功能。     

KF核及B(o)tzinger复合体内GABA能神经元向膈神经核的投射

实验在６只成年猫上进行。将ＷＧＡ－ＨＲＰ微量注入Ｃ５膈神经核内,通过逆行追踪及ＧＡＢＡ免疫组织化学ＦＩＴＣ荧光双重标记方法,研究了脑干内ＧＡＢＡ能神经元向膈神经核的投射。结果在脑桥ＫＦ核和面神经后核周围区（即Ｂｏｔｚｉｎｇｅｒ复合体）观察到ＧＡＢＡ－ＨＲＰ双标神经元。另外,在中缝大核、旁巨细胞外侧核及前庭神经核也观察到双标神经元。本实验结果表明：发自上述脑干神经核团,特别是ＫＦ核及Ｂｏｔｚｉｎｇｅ     

与咬肌运动神经元直接联系的运动前神经元在脑干的分布

目的为了定位向咬肌运动神经元投射的最后一级运动前神经元在脑干内的分布。方法注射麦芽凝集素结合的辣根过氧化物酶(WGA-HRP)至咬肌神经逆行跨突触追踪,然后通过免疫组织化学方法显示了该类神经元。结果这类神经元分布在双侧三叉上核(Vsup)、三叉神经感觉主核背侧部(Vpdm)、小细胞网状结构(PCR)和三叉神经脊束核吻侧亚核背侧部(Vodm),以及对侧三叉神经运动核(Vmo)。数量上,Vsup,特别是注射侧Vsup中,标记的神经元数量最多;其他核团内,双侧标记的神经元的数量无明显差别。结论一侧咬肌运动神经元直接接受脑干双侧多个区域调控。     

5—HT能纤维向猫脊髓膈神经核及延髓膈肌前运动神经元的投射

实验在6只成年猫上进行,将WGA－HRP微量注入C5膈神经核内,通过逆行追踪及5－HT免疫组织化学FITC荧光双重标记方法,研究了中缝核5－HT能神经元向脊髓膈神经核的投射,同时观察了延髓膈肌产运动神经元接受5－HT能纤维投射的情况,结果在中缝苍白核观察到较多的HRP－5－HT双标记神经元,在中缝大核,中缝隐核观察到少数散在的双标记神经元,在延髓疑核,孤束核腹外侧区域的HRP单核记神经元（即膈肌前运动神经元）周围观察到5－HT能轴突末梢,结构表明：发自中缝苍白核5－HT能神经元的传出纤维可投射到脊髓膈神经核,延髓膈肌前运动神经元接受5－HT能纤维的传入投射。     

外周伤害性刺激诱导大鼠脑干内延髓网状背侧亚核传入投入神经元的c—fos表达

用荧光金逆行追踪和FOS荧光免疫组织化学染色相结合的方法对外周伤害性刺激下大鼠脑干内向延髓网状背侧亚核传入投射的神经元中c-fos的表达进行了研究，在麻醉状况下将0.15μl2%荧光金注入大鼠单侧延髓网状背侧亚核，存活5d后用1％福尔马林刺激同侧前爪、后爪和口周，2h后灌注取材，再行FOS免疫荧光标记。结果发现在脑的中脑导水管周围灰质、中缝背核、线形核和中缝大核内观察到荧光金记细胞、FOS样免疫阳性反应细胞及荧光金／FOS双标细胞。在这四个核团中，双标细胞数分别占荧光金逆标神经元数的25％（中脑导水管周围灰质）、11.7%（中缝背核）、8.9%（线形核）和12.1%（中缝大核）。结果提示在脑干向延髓网状背侧亚核投射的神经元中，有一部分与外周伤害性刺激信息的调控有关，还有的神经元可能具有其它的功能。     

鸣禽白腰文鸟前脑古纹状体粗核性双态发育的神经机制

对鸣禽白腰文鸟 (Lonchurastriata)发声控制核团古纹状体粗核 (robustnucleusofarchistriatum ,RA)的性双态分化过程进行了组织学研究 ,并应用双向神经示踪剂 (biotinylateddextranamine ,BDA) ,追踪新纹状体外侧巨细胞核 (lateralnucleusmagnocellularisofanteriorneostriatum ,LMAN)和高级发声中枢 (highvocalcenter,HVC)与RA建立纤维联系的时间和过程。结果发现 :5～ 3 5日龄段为雌雄RA体积、神经元大小和神经元密度变化最集中的时间。在该时段内 ,RA体积、神经元大小均增加 3～ 4倍 ,而RA神经元密度减少约 4倍。这些变化在雌雄间无显著差异 (P >0 0 5 ,非配对 ,双尾t 检验 ) ,但与RA同LMAN、HVC建立神经联系的时间一致。RA同LMAN、HVC建立联系的时间分别为 5～ 15和 15～ 3 5日龄。 4 5日龄后 ,RA体积大小在雌、雄间出现显著差别 (P <0 0 5 )。 4 5～ 60日龄为雌鸟神经元凋亡数量最多时期 ,4 5和 60日龄神经元凋亡数分别为 19 4± 8 0和 17 9± 8 2 (× 10 3/mm3)。结果提示 :4 5日龄后雌雄鸟RA体积和神经元凋亡的变化可能是鸣禽发声核团性双态产生的主要原因。     

功能性ghrelin受体在内脏迷走和脊髓传入神经通路中的表达

本文在mRNA和蛋白水平观察了功能性ghrelin受体(growth hormone secretagogue receptor type la,GHS-Rla)在大鼠内脏迷走及脊髓传入神经通路中的表达.结果显示:(1)GHS-Rla免疫反应阳性神经元及GHS-Rla mRNA分布于背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)及结状神经节(nodose ganglion,NG).(2)应用免疫双标技术观察到DRG和NG中都有一些GHS-Rla免疫反应阳性神经元,同时降钙素基因相关肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)染色呈阳性,显示GHS-Rla和CGRP共存于同一神经元,表明内脏传入神经元存在许多亚核群.(3)应用荧光金(fluorogold)标记的神经逆行追踪技术对从胃投射到DRG和NG的神经元进行免疫组织化学染色,观察到一些表达CGRP的GHS-Rla免疫反应阳性神经元也被荧光金染色.上述实验结果证实了GHS-Rla在迷走神经和脊髓传入神经元中的表达,提示ghrelin参与了胃.脑轴的调节.     

雌百灵端脑新生神经前体细胞的产生和分布并与白腰文鸟的比较

用BrdU标记DNA的ABC免疫细胞化学方法,观察雌性蒙古百灵端脑神经前体细胞的产生和分布特点,并与白腰文鸟作比较。结果如下:1.在百灵和白腰文鸟胸肌注射BrdU短时程组(存活1天),在端脑室带区外侧壁(LVZ)有大量的标记细胞,新生神经细胞起源于端脑室带区(VZ)中的增殖细胞层,并在纹状体腹侧的VZ形成标记细胞增殖热点,如在百灵和白腰文鸟靠近中缝线处的外侧纹状体(LSt)与内侧纹状体(MSt)腹侧的LVZ形成标记最多的‘第1增殖热点’区;在靠近中缝线处LVZ的头端形成密集的新生标记细胞,形成‘第2增殖热点’区;在百灵LSt尾端的LVZ标记细胞形成‘第3增殖热点’,但白腰文鸟此脑区的标记细胞较少。2.在百灵胸肌注射BrdU长时程组中5天起,大量的LVZ的标记细胞开始迁移,存活5-30天期间在高级发声中枢(HVc)和高位发声运动中枢-古纹状体栎核(RA)有新生标记细胞,在端脑靠近LVZ的区域有较多的标记细胞。但在雌性白腰文鸟胸肌注射BrdU存活30天期间,在HVC、RA内未见到标记细胞。结果提示雌百灵端脑HVc和RA不断地产生新生神经细胞,这可能与雌性需要不断地感知、识别雄百灵鸣唱的新语句有关,而白腰文鸟不需要这种功能。     

γ-氨基丁酸能神经投射对纹状体功能的调节作用

γ-氨基丁酸(γ-aminobutyric acid,GABA)是纹状体(striatum,Str)中重要的抑制性神经递质,介导了纹状体中绝大部分抑制性的神经传递。根据纹状体接收的GABA来源不同将其分为:来自苍白球(globus pallidus,GP)和黑质(substantia nigra,SN)的外源性GABA能神经投射,以及来自纹状体MSNs和中间神经元的内源性GABA能神经投射。GABA能抑制性投射通过影响纹状体的神经调控网络来调节和控制运动行为,多种运动功能障碍性疾病的发生都与纹状体的GABA能抑制性神经投射异常有关。现以GABA为切入点,对GABA能抑制性神经投射对纹状体功能的调节作用进行综述。     

非鸣禽丘脑听区和内分泌下丘脑区神经通路的免疫组织化学研究

应用神经示踪物BDA(biotinylated dextran amine)和免疫组织化学方法对环鸽(streptopelia risoria)丘脑听区和下丘脑内分泌脑区间的神经通路进行了研究。结果发现,丘脑卵形核壳 (Ov shell)及周围区域存在丰富脑啡肽免疫反应神经元。丘脑卵形核尾侧(Ovp)有传出纤维直接投射至Ov壳和下丘脑腹内侧核(VMN)。卵形核壳周围和下丘脑内分泌脑区间的传出神经通路显示了丰富的脑啡肽阳性免疫反应细胞和终末标记,在下丘脑腹内侧核中亦存在大量脑腓肽终末标记。结果提示Ov周围的部分脑啡肽神经元发出的传出纤维可能参与了鸽丘脑听区向内分泌下丘脑区投射的神经通路。     

腹侧被盖区多巴胺神经元全脑神经环路示踪

摘要 目的：研究小鼠中脑腹侧被盖区（VTA）多巴胺能神经元接受的全脑输入性上游投射及其输出性下游投射,解析其全脑上下游神经环路连接。方法：用立体定位仪将辅助病毒AAV-EF1a-DIO-GT和AAV-EF1a-DIO-G的混合液（1：1）注射到DAT-cre转基因小鼠的VTA脑区,2周后将重组狂犬病毒（RV）EnVA-RV-mCherry微注射到VTA脑区,1周后RV病毒完成逆向跨突触感染并充分表达荧光蛋白,全脑冰冻切片,用全自动扫描荧光显微镜全脑拍片。用立体定位仪将顺行示踪病毒AAV-EF1a-DIO-GFP微注射到DAT-cre转基因小鼠的VTA脑区,2周后待病毒及荧光蛋白充分表达后,全脑冰冻切片,VTA区脑片用TH抗体行免疫荧光染色,全自动扫描荧光显微镜全脑拍片。结果：狂犬病毒逆向跨单级突触示踪结果显示,全脑许多脑区核团神经元表达RV病毒携带的红色荧光蛋白,主要包括前脑皮层、纹状体、伏隔核、下丘脑视前区、外侧下丘脑、下丘脑室旁核、杏仁核、腹侧被盖区、黑质、中缝背核、臂旁核、缰核。顺行示踪病毒结果显示,表达绿色荧光蛋白的纤维投射主要集中在内侧前额叶皮层、纹状体、伏隔核、背外侧隔核、杏仁核、外侧下丘脑几个脑区。结论：VTA多巴胺能神经元的上游输入性投射广泛的分布于全脑,包括前脑皮层、基底神经节区、下丘脑区、边缘系统、中脑的许多核团都向其发出纤维投射。VTA多巴胺神经元的下游输出性投射主要集中在基底神经节的伏隔核和纹状体,内侧前额叶皮层及下丘脑也有一定投射。     

利用单感器记录与神经元示踪结合对棉铃虫主要性信息素感器内神经元投射的鉴定

【目的】鉴定雄性棉铃虫Helicoverpa armigera成虫触角性信息素感器嗅觉受体神经元的功能、形态及中枢投射路径。【方法】利用单感器记录技术记录棉铃虫嗅觉受体神经元对性信息素的反应,同时采用荧光染料作为示踪剂染色标记嗅觉受体神经元;使用免疫组织化学方法处理相应的脑组织,标记脑内触角叶的神经纤维球结构;用激光扫描共聚焦显微镜获取图像数据,使用图形软件ZEN和Amira 4.1.1进行三维结构重建。【结果】记录到雄性棉铃虫成虫触角上长毛形感器对主要性信息素成分Z11-16∶Ald产生明显的电生理反应,并成功染色标记了该感器内的嗅觉受体神经元。染色标记显示该感器内具有两个嗅觉受体神经元,其轴突通过触角神经分别投射触角叶内的云状体神经纤维球和普通神经纤维球。【结论】单感器记录与神经元示踪两技术结合能够用于鉴定昆虫触角嗅觉受体神经元的功能、形态和投射至神经纤维球的路径。与赖氨酸钴方法比较,使用荧光染料法进行神经元示踪,操作更简便,且易于进行三维空间分析,为调查棉铃虫其他嗅觉神经元的投射路径以明确外周气味受体感受与中枢系统的联系提供了有力技术支持。     

脑桥呼吸调整中枢向延髓Botzinger复合体轴突投射的研究

实验在３３只成年猫上进行。Ｂｏｔｚｉｎｇｅｒ复合体内微量注入麦角辣根过氧化酶（ＷＧＡ－ＨＲＰ,３０－６０ｎｌ,５％,９例）后,在脑桥呼吸调整中枢结合臂外侧核及Ｋｏｌｌｉｋｅｒ－Ｆｕｓｅ核观察到大量ＨＲＰ标记神经元。在２０例动物中,检测了９１个在呼吸调整中枢记录到的呼吸神经元对电刺激Ｂｏｔｚｉｎｇｅｒ复合体的反应。其中１３个神经元（吸气性１１个,跨时相２个）可被逆行兴奋。实验结果表明,发自脑桥呼吸调整中枢神经元的轴突可投射到Ｂｏｔｚｉｎｇｅｒ复合体,这一投射通路可能与呼吸调节有关。     

鸣禽欧椋鸟带状核的传出投射—PHAL顺行示踪法研究

本实验应用顺行神经示踪物ＰＨＡＬ对鸣禽欧椋鸟（Ｓｔｕｒｎｕｓ ｖｕｌｇａｒｉｓ）带状核（Ｔｎ）的传出投射作了定位研究。Ｔｎ核的传出投射经背腹两条路线：（１）从Ｔｎ核背部进入端脑的ＰＨＡＬ标记纤维,分别终止在新纹状体内侧,隔内侧核（ＳＭ）,侧室腔外侧带和额上层腹侧带;（２）另一组标记纤维从Ｔｎ核腹侧直接向丘脑投射,在下丘脑腹内侧核（ＶＭＮ）和外侧核（ＬＨｙ）分别获得大量ＰＨＡＬ免疫反应纤维的终末标记。结果提示：Ｔｎ核可能为鸟类旁听觉神经通路的一个组成部分。