SARS-CoV 中国株基因组全长cDNA的构建及其恢复病毒的生物学性质

严重急性呼吸综合征是SARS_CoV引起的一种重要新发传染病,其致病机制的研究对于防治该病十分必要。为了利用反向遗传学技术研究SARS_CoV的致病机制,将覆盖SARS_CoV BJ01株基因组全长的7个cDNA片段纯化后进行体外连接,构建基因组全长cDNA分子,以其为模板,使用 T7 RNA 聚合酶系统在体外进行转录, 获得病毒RNA。用电穿孔转染法将转录体RNA导入Vero E6细胞,可观察到典型的SARS_CoV致细胞病变作用。对收获的恢复病毒采用 RT_PCR方法进行鉴定,结果表明获得的恢复病毒与SARS_CoV BJ01株原病毒序列一致。以针对SARS_CoV的抗体对感染细胞作间接免疫荧光反应,证明获得了具有特异感染性的恢复病毒。同时用细胞病变法和空斑试验测定了恢复病毒及其亲本毒株的病毒滴度, 结果表明二者在致病性上没有明显差异,恢复病毒具有与原型株相似的生物学特性。SARS_CoV BJ01株基因组全长cDNA的成功构建及对恢复病毒生物学性质的研究将为进一步探索SARS_CoV致病的分子机制及研制新型疫苗奠定良好的基础。     

SARS病毒与其他冠状病毒的基因组比较

本文利用生物信息学方法比较SARS病毒和其他冠状病毒基因组。通过数据库搜索,找出与SARS病毒基因组相似的核酸或蛋白质序列,并对相似序列进行比对,分析它们的共性和差异。结果表明,SARS病毒在基因组的组织上及结构蛋白质方面与现有冠状病毒有比较大的相似性,SARS病毒基因组与冠状病毒基因组相关。但是,SARS病毒基因组还存在一些特异性序列,ORF1a和S蛋白(特别是S1)的变化以及SARS—CoV特异性的非结构蛋白可能是SARS发病机理与传染特性区别于其他冠状病毒的分子基础。在全基因组水平上进行核酸单词出现频率分析,结果表明,SARS病毒远离已知的其他冠状病毒,单独成为一类。     

SARS起源于污染对病毒进化的加速诱导

针对当前广为流传的SARS病毒“太空起源说”和“野生动物来源说”两种理论,本文根据污染进化生态学原理和SARS病毒发病传染特征,以有关实验结果为科学依据,阐述了SARS病毒的起源问题,指出：我国当前环境日益严重的复合污染为SARS致病病毒的产生提供了适宜的外部生态条件和物质基础,SARS致病病毒可能起源于多个病毒的基因重组或融合,更可能是一种来自于感冒病毒进化而形成的超级感冒病毒．可以预料,这一推断将为彻底解决SARS的病源提供有价值的理论指导．     

SARS冠状病毒分离培养和鉴定的实验研究

建立严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒分离、培养方法,为SARS冠状病毒动物模型的建立提供实验依据,并根据病毒在体内存活的时间确定检测指标。选用已鉴定为SARS冠状病毒的毒株,经过鼻腔接种感染恒河猴。定期采集咽拭子标本,分离血清或血浆,用Vero细胞进行病毒培养、分离。结果显示,在SARS冠状病毒感染恒河猴后2、5、7天,可以从拭子中分离到病毒,5～15天可在猴肺、脾、肝、肾和淋巴组织中分离到病毒,并用免疫荧光法和RT-PCR方法进行了确定。首次实验证实了SARS冠状病毒可在恒河猴体内复制。SARS病毒的成功分离是SARS冠状病毒动物模型建立的主要依据,在进行疫苗安全性和药效评价等工作中,病毒分离可作为药物筛选、疫苗评价的重要指标。     

SARS病毒与其他冠状病毒的基因组比较

本文利用生物信息学方法比较SARS病毒和其他冠状病毒基因组.通过数据库搜索,找出与SARS病毒基因组相似的核酸或蛋白质序列,并对相似序列进行比对,分析它们的共性和差异.结果表明,SARS病毒在基因组的组织上及结构蛋白质方面与现有冠状病毒有比较大的相似性,SARS病毒基因组与冠状病毒基因组相关.但是,SARS病毒基因组还存在一些特异性序列,ORF1a和S蛋白(特别是S1)的变化以及SARS-CoV特异性的非结构蛋白可能是SARS发病机理与传染特性区别于其他冠状病毒的分子基础.在全基因组水平上进行核酸单词出现频率分析,结果表明,SARS病毒远离已知的其他冠状病毒,单独成为一类.     

SARS冠状病毒中的核衣壳蛋白

严重急性呼吸综合征(SARS)的元凶是一种新冠状病毒,研究病毒结构蛋白的功能有助于了解病毒的感染、复制和包装等生理过程。其中核衣壳蛋白是SARS冠状病毒中含量最丰富和最保守的结构蛋白,自身聚合后包被病毒RNA基因组形成螺旋状核壳体是SARS冠状病毒成熟的关键步骤;核衣壳蛋白能与病毒或宿主细胞中多种蛋白质相互作用,还能影响宿主细胞的多个通路。因此核衣壳蛋白是一个重要的多功能蛋白质,参与了病毒感染、复制和病毒包装等过程。     

人源抗严重急性呼吸综合征(SARS)病毒基因工程抗体的初步研究

严重急性呼吸道综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)或称传染性非典型肺炎,已严重威胁人民健康和生命安全。快速研制一种可用于紧急预防SARS病毒感染的基因工程抗体预防制剂迫在眉睫。为此,运用噬菌体表面呈现技术,从多个SARS病人恢复期血中获得淋巴细胞,通过基因工程手段,构建了人源抗SARS病毒基因工程抗体文库,并筛选获得37株特异抗SARS病毒基因工程Fab抗体,其中ll株人源抗体结合基因工程重组的SARS病毒核(N)蛋白,其中的1株在Western blot分析中与SARS病毒结合,识别SARS病毒N蛋白线性位点。对所获抗体的功能鉴定及基因分析正在进行中。人源抗SARS病毒基因工程抗体的获得,将对SARS疾病的特异性预防,治疗和诊断提供新的途径。     

药物所研究人员发现可同时治疗SARS和感冒的双效天然产物

日前,中国科学院上海生命科学研究院药物研究所和新加坡理工学院的研究人员通过合作,成功找到一种天然产物,可以和SARS冠状病毒及感冒病毒中负责病毒复制和传播的蛋白酶强烈结合,导致该蛋白酶的功能丧失,从而阻断SARS病毒和感冒病毒在人体细胞内的进一步复制与传播,达到预防或治疗SARS和感冒的目的。     

中国科学家在野生蝙蝠体内发现“SARS病毒”

据《科学》杂志在线报道,在2002年至2003年冬季暴发的SARS曾造成全球700多人死亡,并且导致8000多人被传染。研究发现,在中国南方动物市场上贩卖的一种与黄鼠狼类似的动物——果子狸可能与SARS的最初发病有关。然而研究人员怀疑,果子狸仅仅是SARS传播中的一个环节,但并不是SARS病毒的真正宿主,这是由于在生活于养殖场或野外的果子狸体内并没有发现SARS病毒。为了找到SARS病毒的真正宿主,中国香港大学(HKU)的微生物学家袁国勇(Kwok-yung Yuen)和同事对猴子、啮齿动物以及生活在香港郊区的几种蝙蝠进行了采样分析。在中国蹄鼻蝠的…     

SARS病原体特征与临床实验室诊断

SARS的全球性流行带来了严重的公共卫生问题和社会经济问题。目前,在SARS病原体鉴定、基因组结构和序列变异、SARS流行特征和实验室诊断等方面获得了很大的进展。现已证实SARS的病原体为SARS冠状病毒。SARS冠状病毒是一种与原来已知冠状病毒在某些方面类似、但又独具特征的新型冠状病毒,该病毒的起源可能源于野生动物。多个SARS冠状病毒的全基因组核酸序列测定现已完成,在SARS冠状病毒的实验室诊断方面,现已有了免疫学方法检查抗体和分子生物学方法检查病毒RNA。直接检测病毒抗原和定量检测病毒多靶点基因是今后的发展方向。     

《病毒学杂志》：科学家发现新型SARS样冠状病毒

近日发表在国际核心学术期刊《病毒学杂志》的论文称。我国军事医学科学院军事兽医研究所研究员涂长春等人在云南蝙蝠体内检测出了新型SARS样冠状病毒。经全基因组序列测定与抗原性分析表明,该病毒具备感染人的能力。推断其很可能是SARS病毒的祖先或“亲属”,为理清SARS来源提供了重要数据。     

中国科学家完成SARS病毒基因克隆和主要蛋白的表达

中国科学家已成功克隆SARS病毒的 6个主要蛋白基因 ,完成SARS病毒中 3个主要蛋白的表达。这是继SARS病毒分离成功和病毒全基因组测序成功之后 ,科学家对SARS病毒研究取得的又一重要阶段性成果。中国科学院上海生命科学研究院院长裴钢 5月 16日宣布 :经过联合攻关 ,研究人员成功     

中科院完成SARS病毒重要蛋白基因克隆和表达

中国科学院上海生命科学院日前宣布 ,药物所、生化与细胞所的科学家已实现对 SARS病毒 6种主要蛋白基因的克隆 ,并完成其中 3个关键蛋白的表达 ,1种蛋白已开始应用于抗 SARS病毒药物的体外筛选。有关这些工作的学术论文已被 SCI期刊《中国药理学报》接受。这些工作标志着我国科学家在认识和征服 SARS病毒的道路上取得重要进展 ,对 SARS病毒的生物学功能研究 ,特别是对研制抗 SARS病毒疫苗和药物 ,以及 SARS病原学研究都将产生重大推进作用。在 SARS病毒对人体构成感染的过程中起重要作用的蛋白质已被发现有 6种 :E蛋白、S蛋白…     

SARS病毒NS-1株稳定性及培养条件的研究

用SARS病毒NS-1株接种Vero细胞,37℃培养,于培养1、2、3、4d收获病毒液,分别置-70℃冻融和4℃释放,于不同时期取样进行病毒滴定。结果显示,SARS病毒NS-1株各代次培养特性和形态学变化完全相同,有较好的抗原特异性,病毒滴度稳定,4℃保存125d,滴度下降2．25lgCCID50／ml,-70℃保存6个月,滴度未见明显下降。SARS病毒NS-1株未经冻融或释放,1d收获的病毒滴度比2、3、4d收获的病毒滴度低,经冻融或释放,1、2、3、4d收获的病毒滴度无明显区别,病毒收获时的病毒滴度与形态学变化成正相关。不同接种条件收获的病毒液,病毒滴度无明显区别。SARS NS-1株有较好的遗传稳定性和保存稳定性,培养2d,4℃释放收获病毒液,细胞悬液与病毒混合接种更简单,易操作,更适合疫苗规模生产。     

SARS冠状病毒感染Lewis大鼠模型的建立

目的通过观察SARS-CoV感染Lewis大鼠后,病理学、免疫学以及病毒的复制与外排情况变化,探讨其能否作为有效的SARS动物模型。方法SARS病毒感染9只Lewis大鼠,在感染后不同时间安乐死动物,应用光镜对动物的各脏器进行病理观察研究;用病毒分离和RT-PCR方法检测病毒外排与复制的情况;用ELISA法检测动物产生特异性抗体情况。结果在SARS-CoV感染Lewis大鼠后,肺组织出现一定的与人类SARS疾病相似的病理改变,在动物体内可检测到活病毒或病毒核酸,并可检测到特异性IgG抗体的存在。结论Lewis大鼠出现了特异的免疫反应及特征性病理改变,可做为灵长类SARS动物模型的有益补充用于SARS发病机理及疫苗的研发等。     

冠状病毒与SARS

最近在世界部分地区流行的非典型肺炎是病毒引起的严重急性呼吸综合征,它是由一种新的冠状病毒引起的,这种病毒被称为SARS病毒。结合SARS病毒对冠状病毒的研究现状进行了简单概括,并概述了SARS的流行特点和可能的发病机理。     

中草药对SARS病毒感染的抑制作用

[目的]严重急性呼吸综合征(Severe Acute Respiratory Syndrome,SARS)是一种有很高病死率的传染性非典型性肺炎。SARS的病原体是SARS轮状病毒(SARS-Cov)。我们建立了SARS-Cov S/HIV假型(SHP)病毒系统和细胞融合检测系统,以检测抑制SARS-Cov入侵情况。[资料和方法]将pCMV△R8·2,pHR’CMV-Luc和pCMV/R-SARS-S或pMDG质粒转染到293T细胞构建SHP和VSV-G病毒(VHP)系统。每个感染加5ng SHP或VHP病毒的p24。选取12种被证实有效治疗SARS病人的中药,并通过提取制备药物。利用细胞记数kit-8试剂盒进行药物的毒性分析…     

SARS病毒M蛋白的二级结构和B细胞表位预测

以SARS病毒基因组序列为基础,采用GarnierRobson方法、ChouFasman方法和KarplusSchulz方法预测蛋白质的二级结构;按KyteDoolittle方案、Emini方案和JamesonWolf方案预测SARS病毒M蛋白的B细胞表位。预测结果表明,在SARS病毒M蛋白N端第11～20、27～36区段和第133～141区段可能是α螺旋中心;M蛋白分子N端第20～27、34～37,44～56,61～64,70～76,79～97,117～132,142～147,165～176区段和第216～221区段可能是β折叠中心。在M蛋白N端第5～6、40～44、105～107、112～116、189～190、202～203区段和第210～215区段具有较柔软的结构,有可能进行一定幅度的摆动或折叠而形成较复杂的三级结构。SARS病毒M蛋白N端第1～15、37～47、99～120、181～192区段和第196～215区段内或附近很可能是B细胞表位优势区域。以蛋白质的二级结构预测作为辅助手段,用抗原指数,亲水性参数和可及性参数预测SARS冠状病毒M蛋白的B细胞表位,为实验确定SARS病毒M蛋白的B细胞表位和免疫识别研究奠定了基础 。     

SARS-CoV假病毒中和试验技术的建立及评价

为避免传统的SARS病毒中和试验需要操作活毒而存在的生物安全隐患,建立了基于假病毒系统、操作较安全的SARS中和试验技术平台。本研究应用高效表达SARS-CoV S(密码子优化的全长S蛋白,简称S)的真核表达载体(pVRC8304),与HIV慢病毒包装质粒(p CMV△8.2)及转移质粒(pHR′CMV EGFP)3个质粒载体系统共同转染人胚肾细胞293T,包装了SARS假病毒;通过SARS假病毒感染的RD-A细胞中标记基因EGFP表达的分析,确定SARS假病毒能有效进入细胞,建立了可在BSL-2级实验室操作的SARS病毒中和试验技术平台。用该技术平台对不同免疫血清进行了中和抗体分析,并比较了基于假病毒和基于SARS活病毒的中和试验效果。结果显示:SARS假病毒和SARS活病毒两个中和试验系统获得中和抗体滴度变化趋势一致,表明本研究构建的SARS假病毒可替代SARS活病毒用于建立操作上安全的SARS病毒中和试验技术平台。     

严重急性呼吸综合征（SARS）病毒的形态及其形态发生机制

将SARS患者的咽拭子感染VeroE6细胞 ,用电子显微技术等对SARS病毒进行了研究。结果表明 ,新分离到的病毒粒子没带囊膜时直径大多约 5 0nm ,带有囊膜的直径约 10 0nm。通过RT PCR等证明 ,该病毒是新的冠状病毒。这些病毒可与SARS康复患者的血清呈强烈的阳性反应 ,表明此新的冠状病毒是引起SARS的主要病原。文中还对病毒的发生机制和细胞中的分布进行了探讨。