细胞周期素G1、G2在皮肤血管瘤组织中的表达及意义

目的探讨细胞周期素G1、G2与血管瘤发生发展及退化的关系。方法采用免疫组织化学S-P法对50例血管瘤和5例正常皮肤组织检测细胞周期素G1、G2的表达;对所获得的检测结果进行图像分析处理。结果增生期血管瘤内皮细胞胞浆或胞核内cyclin G1呈强阳性表达,退化期血管瘤内皮细胞胞浆内cyclin G1无表达;增生期血管瘤内皮细胞胞浆内无cyclin G2表达,退化期血管瘤内皮细胞胞浆内cyclin G2呈强阳性表达。增生期组与退化期组、正常皮肤组分别相比,细胞周期素G,阳性表达差异有显著性（P〈0．05）,退化期组与增生期组、正常皮肤组之间,细胞周期素G2的阳性表达差异有显著性（P〈0．05）。结论细胞周期素G1、G2在血管瘤发生、发展及退化中起着重要作用。     

NGX6基因对人结肠癌细胞HT-29细胞周期的影响

NGX6基因是新克隆的候选抑瘤基因,研究表明NGX6重表达可抑制结肠癌细胞的增殖.为进一步研究NGX6对细胞周期的影响,采用流式细胞仪检测NGX6重表达对结肠癌细胞HT-29细胞周期的影响,发现NGX6重表达可增加HT-29细胞在G0/G1期的分布比例,减少了S,G2,M期细胞数.利用蛋白质印迹和流式细胞术分析NGX6转染前后HT-29细胞周期素(cyclins)和细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制物(cyclin-dependentkinaseinhibitor,CKI)的表达变化,发现NGX6可下调HT-29细胞中cyclinE、cyclinD1的表达及上调p27的表达,对cyclinA和cyclinB的表达无明显影响,p16在三组结肠癌细胞中均无表达.研究结果表明,NGX6在HT-29细胞中通过下调cyclinE、cyclinD1和上调p27的表达,阻滞细胞周期于G0/G1期,从而发挥其在结肠癌中的抑瘤作用.     

蛋白激酶C与细胞周期

近年的研究表明,PKC涉及到细胞的周期调节。在酵母细胞和哺乳动物细胞均发现PKC参与细胞周期调控,从而提示PKC可能在进化上是一种保守的细胞周期调节子。一般认为PKC在两个点上对细胞周期起作用,即G1期和G2期到M期的过渡期（G2／M）。在G1期,PKC分别在早G1期和晚G1期作用有所不同,主要作用表现在使细胞停留在G1期的中末阶段,这一过程,主要涉及到抑制肿瘤抑制因子－成视网膜细胞瘤（Rb)蛋白的磷酸化。PKC的主要作用是降低周期素依赖激酶CDK2的活性、降低周期素E和A的表达和增加周期素依赖的周期抑制蛋白p21^WAF1和p27^KIP1的表达;在G2／M期,PKC对细胞周期的调节主要与Cdc2(CDK1)的活性抑制有关。     

Ubiquitin B在HSP90抑制剂17-AAG诱导人宫颈癌HeLa细胞周期阻滞中的作用

目的 研究Ubiquitin B（Ubb）在热休克蛋白90（HSP90）抑制剂17-AAG诱导人宫颈癌HeLa细胞周期阻滞中的作用及机制.方法 不同浓度17-AAG处理HeLa细胞后,流式细胞术检测细胞周期分布,荧光分光光度法检测细胞蛋白酶体活性变化;Ubb siRNA 转染HeLa细胞后,Real Time PCR法检测Ubb干扰效应,Western 印迹检测细胞周期相关蛋白的表达改变.结果 17-AAG可以诱导HeLa细胞阻滞于G2/M期,同时显著增强细胞内糜蛋白酶样蛋白酶体活性,并且两者的变化均呈现剂量依赖性;干扰HeLa细胞内Ubb后,可以逆转17-AAG引起的G2/M期阻滞;17-AAG可明显下调HeLa细胞周期相关蛋白Cdk1和Hec1的表达,并且这一变化也是Ubb依赖的.结论 Ubb在17-AAG诱导的HeLa细胞周期阻滞中发挥重要作用,Ubb和HSP90抑制剂17-AAG在功能上相互关联,可能成为宫颈癌治疗的新靶点.     

细胞周期依赖性激酶4(Cdk4)在肿瘤发生发展中的作用

细胞周期依赖性激酶4(cdk4)是丝氨酸/苏氨酸激酶家族的成员,调控细胞周期G1期的进程.Cdk4与周期蛋白D(cyclin D)结合形成复合物,在G1期的演进中起重要作用,一旦出现失调就可能导致癌症的发生,并且也有一系列的内在和外在的信号调控着这个复合物.Cdk4以及它的调控因子在肿瘤的发生和转移中都显示了重要的作用.     

细胞周期素G1和G2在膀胱癌中的表达及临床意义

目的探讨细胞周期素G1和G2在膀胱移行细胞癌（尿路上皮癌）中的表达及临床意义。方法收集武汉大学人民医院病理科2000-2006年有完整临床和病理资料的膀胱移行细胞癌存档蜡块50例和5例癌旁组织,采用免疫组织化学S-P法检测50例膀胱移行细胞癌和5例癌旁组织中细胞周期素G1和G2的表达水平。采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文报告管理系统,对细胞周期素G1和G2的表达进行定量分析,并用SPSS11.5软件对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率做单因素方差分析和SNK（q）检验。结果细胞周期素G1在膀胱移行细胞癌中呈高表达,癌旁组织中呈低表达。而细胞周期素G2在膀胱移行细胞癌中呈低表达,癌旁组织中呈高表达。膀胱移行细胞癌与癌旁组织相比,差异有显著性（P〈0.05）。随着移行细胞癌组织中细胞周期素G1表达的增高,周期素G2的表达却显著下降,两者呈显著负相关（P〈0.01）。结论细胞周期素G1和G2在膀胱移行细胞癌与癌旁组织中对细胞周期调控和/或DNA修复起了重要作用,并参与了诱导细胞凋亡的过程。     

鼻咽癌相关基因NGX6对鼻咽癌细胞周期的影响

为了探讨鼻咽癌（NPC）候选抑瘤基因NGX6对NPC细胞的细胞周期进程及细胞周期素的影响,阐明它的作用机制,通过建立稳定表达NGX6的鼻咽癌HNE1细胞株,采用细胞免疫组织化学,流式细胞仪检测与分析细胞周期及细胞周期素的改变,用western blot验证它对细胞周期的影响。结果显示稳定表达NGX6的HNE1细胞较对照组细胞周期中G0/G1期比值明显增加,而S期比例减少。细胞凋亡率无明显变化。流式细胞仪检测发现cyclinD1、A和E的表达明显减少,以cyclinD1的改变最为明显。Western blot检测也发现cyclinD1的表达明显下调。以上结果说明NGX6主要通过下调cyclinD1的表达,延缓细胞周期的G1→S的进程,从而抑制NPC细胞的过度增殖。     

Cyclin D1与细胞周期调控

细胞周期是细胞生命活动中一个最重要的过程,其关键是G1 期的启动.细胞周期蛋白(Cyclin)、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)和CDK抑制因子(CKIs)是参与钿胞周期调控的主要因子.Cyclin D1是调控细胞周期G1期的关键蛋白,是一个比其他Cyclins更加敏感的指标,对细胞周期调控至关重要.综述Cyclin D1的结构和功能及其在肿瘤组织中的表达特征,初步分析Cyclin D在昆虫细胞周期调控的研究.     

G6PD通过细胞周期蛋白D1/D2调控人黑色素瘤细胞周期的进程

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)在人皮肤黑色素瘤A375细胞中处于高表达与高活性状态, 但G6PD在黑色素瘤发生发展过程中的作用及其具体机制尚不明确.本文在前期运用 siRNA方法构建G6PD敲减的黑色素瘤A375稳转细胞(A375-G6PDΔ)基础上,构建表达载体pBabe-puro-G6PDWT在A375-G6PDΔ细胞中过表达野生型的G6PD基因,从而构建G6PD表达恢复的稳转细胞(A375-G6PDΔ-G6PDWT).3株细胞A375-WT、A375-G6PDΔ和 A375-G6PDΔ-G6PDWT经G6PD酶活性测定、MTT测定、克隆形成实验、流式细胞仪分析细胞周期和Western 印迹检测.结果显示,A375-G6PDΔ-G6PDWT细胞的G6PD蛋白表达量 (0.847 ± 0.080)及其活性(0.394 ± 0.029)分别是A375-G6PDΔ的3.28倍(P＜0.01) 和7.34倍(P＜0.01),分别是A375-WT细胞的91-57%和2.12倍(P＜0.05).与A375-WT细 胞相比,A375-G6PDΔ细胞G0/G1期细胞数增加,S期细胞数减少,增殖指数PI降低了25-70%（P＜0.05）,细胞周期蛋白D1/D2、细胞周期蛋白E表达分别下降37.4%、54.3% (P＜0.01)和17.3%;而A375-G6PDΔ-G6PDWT细胞呈现G1/S期阻滞解除,细胞周期蛋白D1/D2蛋白分别恢复到A375-WT细胞的89.5%和87.6%,细胞周期蛋白E表达未见 恢复,呈现生长增殖和克隆形成率的恢复并接近于A375-WT细胞. 结果提示,G6PD通 过细胞周期蛋白D1/D2调控人皮肤黑色素瘤A375细胞G1期向S期转换的进程,这为黑色 素瘤发病机制的研究提供了新的思路.     

曲古抑菌素A对结肠癌细胞株SW480细胞周期影响的机制研究

为了研究组蛋白去乙酰化酶(HDACs)抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对结肠癌细胞周期和凋亡的影响,初步探讨TSA作用细胞周期的可能机制,将人结肠癌细胞系SW480经TSA处理后,运用流式细胞术检测细胞周期、凋亡以及细胞周期素的变化,最后采用western-blot对细胞周期相关的基因进行检测.结果表明,TSA处理细胞后,TSA能够延缓细胞周期G1-S进程,阻滞细胞于G1期,并且影响细胞周期素cyclinE、cyclinA聚集,而对凋亡无明显的影响.Western-blot显示,TSA能够上调p21Waf1/Cip1、p27Kip1的表达,下调CDK2、cyclinE以及cycli-nA的表达.以上结果说明在结肠癌细胞中,TSA能够通过上调p21Waf1/Cip1、p27Kip1的表达以及下调CDK2、cy-clinE、cyclinA的表达,从而阻滞细胞周期于G1期,最终影响肿瘤细胞的生长,以上研究为HDAC抑制剂应用于结肠癌治疗提供了理论依据.     

DNA损伤反应中细胞周期检查点蛋白p27~(Kip1)表达及其调控机制

为了研究DNA损伤反应中p2 7Kip1的表达及其调控机制 ,应用免疫印迹的实验结果表明 :10Gy 60 Coγ射线照射后 3h ,HeLa细胞中p2 7Kip1蛋白水平开始下降并持续到 2 4h ,进而失去它对CDKs的抑制功能 .Northern印迹结果显示 ,电离辐射 (IR)对p2 7Kip1mRNA表达水平无明显影响 ,说明电离辐射诱导p2 7Kip1表达水平的降低主要与蛋白质降解相关 ,但其具体的调控机制还不清楚 .已知在G1—S期p2 7Kip1蛋白的降低主要依赖细胞周期蛋白E Cdk2激酶将其磷酸化后的泛素化蛋白酶体途径 (ubiquitin proteasomepathway) .酶动力学研究结果揭示 :电离辐射后细胞周期蛋白E Cdk2激酶活性增高 ,12h细胞周期蛋白E Cdk2激酶活性达到最大 .当在照前用细胞周期蛋白E Cdk2抑制剂olomoucine (10 μmol L)抑制细胞周期蛋白E Cdk2激酶活性时 ,p2 7Kip1蛋白表达水平增加 .此外 ,还观察到电离辐射可诱导p2 7Kip1泛素化水平的增高 ,而在使用蛋白酶体抑制剂MG 132 (5 μmol L)处理HeLa细胞后 ,可抑制辐射诱导p2 7Kip1蛋白水平的下调 .研究结果提示 :泛素化蛋白酶体途径参与了辐射诱导P2 7Kip1蛋白表达下调的降解机制 .     

HMBA对人肝癌SMMC—7721细胞周期相关基因表达的影响

本文研究HMBA对人肝癌SMMC－7721细胞周期G0／G1期阻滞相关基因表达的影响。免疫细胞化学和核酸原位杂交检测结果显示,HMBA可明显上调p21^WAF1/CIP1、p16蛋白表达并增强p21^WAF1/CIP1基因转录,同时对CDK4、Cyclin D1蛋白表达以及c-myc基因转录均具有明显的下调作用。结果表明,HMBA可通过增强p21^WAF1/CIP1、p16基因表达而抑制Cyclin D1-CDK4活性,最终导致细胞进入S期所需的c-myc等基因转录活性下降,从而将细胞周期阻滞于G0／G1期,诱导人肝癌细胞分化。     

盘基网柄菌突变型细胞allC的细胞周期异常

研究盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)细胞周期的相关问题可以为真核生物细胞周期调控研究提供理论基础。细胞计数和细胞倍增时间计算的结果表明,突变allC细胞的倍增时间为2.36 h,仅为KAx-3细胞倍增时间的1/3。进一步利用流式细胞术测定两种细胞的细胞周期,并结合实时荧光定量PCR技术测定cycB1和cdk1基因的相对表达量的比值,我们发现,培养16 h的allC细胞处于G2期的数目(1.51%)显著少于KAx-3细胞(16.61%)(P0.05)。allC细胞和KAx-3细胞的细胞周期素B1(cyclinB1,cycB1)基因相对表达量分别是2.5和0.24(P0.05),两者相差10倍。两种类型细胞中处于G2期的细胞数目差异十分明显,cycB1的相对表达量也存在显著差异,表明cycB1的过表达可能在一定程度上影响allC细胞的细胞周期正常的调控机制,与突变细胞的G2期异常有一定关系,但具体机制仍需进一步探究。     

盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)突变型细胞allC细胞周期异常的研究

细胞计数和细胞倍增时间计算的结果表明allC细胞的倍增时间为2.36h,仅为KAx-3细胞倍增时间的1/3。为了探究allC细胞倍增时间大幅度缩短、细胞周期异常的原因我们采用流式细胞术测定两种细胞的细胞周期,并结合实时荧光定量PCR技术测定cycB1和cdk1基因的相对表达量的比值。结果表明,16h突变型allC细胞处于G2期的数目(1.51%)显著少于KAx-3细胞(16.61%)。allC细胞和KAx-3细胞的细胞周期素B1(cyclinB1)cycB1基因相对表达量分别是2.5和0.25,两者相差10倍。这些数据表明,两种类型细胞中G2期的差异十分明显,cyclinB1的相对表达量也存在显著差异。提示cyclinB1的过表达可能在一定程度上影响allC细胞的细胞周期正常的调控机制,与突变细胞的G2期异常有一定关系。     

诱导型一氧化氮合酶在17β-雌二醇诱导的血管平滑肌细胞周期阻滞中的作用

利用大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMC)作为模型,观察17β-雌二醇(17β-estradiol,E2)对VSMC诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)活性和蛋白表达的影响,并探讨其在内皮素-1(endothlin 1,ET-1)刺激的VSMC周期循环中的作用。检测指标包括同位素法测定iNOS的活性,免疫印迹法(western blot)检测iNOS蛋白表达,流式细胞仪检测细胞周期,观察一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)抑制剂N^G-硝基左旋精氨酸甲酯(N^G-nitro—L—arginine methylester,L—NAME)对E2抑制VSMC细胞周期的影响。结果显示,E2明显增加iNOS的活性和蛋白表达,在30min和12h时能诱导VSMC的iNOS活性明显增加,而60min和24h时VSMC的iNOS活性与对照组无显著差异,不呈明显浓度依赖性,雌激素受体(estrogen receptor,ER)拮抗剂Tamoxifen和L—NAME能明显抑制E2诱导的VSMC iNOS活性增加;E2增加VSMC的iNOS蛋白表达的作用在3h时起效,12h达高峰,以后逐渐下降,呈浓度依赖性,Tamoxifen能明显抑制马诱导的VSMC iNOS蛋白表达;E2明显抑制ET-1诱导的S期细胞百分比和G2 S／G1增加,使VSMC在G1期发生细胞周期阻滞,这些作用可被预先给予L—NAME所明显减轻。上述结果提示,E2使ET—l刺激的VSMC细胞周期循环在G1期发生阻滞与增加VSMC iNOS活性有关,该作用至少部分通过ER介导。     

TGF—β与细胞周期调节

作为一类重要的生长负调节因子;TGF－β能够抑制多种类型细胞的生长,并将其阻断在GI期。TGF－β对细胞周期的调节作用是通过：（1）下调细胞周期驱动器如cyclin、cdk等的表达水平;（2）降低G1期cyclin／cdk复合物的活性;（3）调节p27、p21和p15等cdk抑制因子的表达及活性等。此外,一些原癌基因和肿瘤抑制基因的产物如c－myc、RB等也在这一过程中起着重要作用。     

LncRNA MIR31HG通过诱导细胞周期阻滞抑制食管鳞癌细胞增殖活性

本研究探讨lnc RNA MIR31HG对食管鳞癌细胞增殖活性的影响.利用定量PCR检测MIR31HG在食管鳞癌标本及其癌旁组织、人食管上皮细胞系Het-1A和食管鳞癌细胞系Eca-109、EC-1、KYSE30中的表达;采用过表达质粒pc DNA3.1-MIR31HG在食管鳞癌细胞系中过表达MIR31HG;MTT法和SRB法检测细胞增殖率;细胞周期分析试剂盒检测细胞周期进程;Caspase3活性检测试剂盒分析Caspase3活性;PCR和Western blot法检测p53、Caspase3及Bcl-2的m RNA和蛋白质表达水平.结果显示,食管癌组织中MIR31HG表达水平显著低于癌旁组织(P0.05);与Het-1A细胞相比,Eca-109、EC-1、KYSE30细胞中MIR31HG的表达均显著下调(P0.05),提示MIR31HG可能介导食管癌的发生发展.转染pc DNA3.1-MIR31HG可显著上调食管癌细胞中MIR31HG的m RNA表达(P0.01),且MIR31HG过表达可显著抑制食管癌细胞增殖活性(P0.05),减少S期细胞数(P0.05),增加G1期细胞数(P0.05),提示MIR31HG可能通过阻碍细胞周期G1期~S期进程抑制食管癌细胞增殖活性.此外,MIR31HG过表达显著增加Caspase3活性,增加Caspase3和p53的m RNA和蛋白质表达水平,同时抑制Bcl-2 m RNA和蛋白质表达水平.这表明,MIR31HG可通过抑制食管癌细胞的增殖活性阻碍食管癌的发生发展,这可能为食管癌的诊断和治疗提供新策略.     

瘦素对血管平滑肌细胞周期蛋白D1、CDK2表达的影响

目的观察瘦素对人平滑肌细胞周期时相及cyclin D1、CDK2表达的影响,探讨瘦素促进平滑肌细胞增殖的作用机制。方法取对数生长期的平滑肌细胞同步于G0期,分为加入浓度为0、20、40、80、100、200ng/ml瘦素的各组。作用24h后分别用MTT法检测细胞活性,用流式仪进行细胞周期时相的检测,Western blot法测定Cyclin D1、CDK2的表达。结果随着瘦素浓度的增加G0/G1期的平滑肌细胞逐渐减少,S期和G2/M期细胞逐渐增加,PI增殖指数逐渐增加。cyclin D1、CDK2蛋白的表达呈剂量依赖性的上升趋势。以上两项检测均在100ng/ml处达最高。结论瘦素上调cyclinD1、CDK2蛋白的表达,可能是促进平滑肌细胞增殖的机制之一。     

植物D型细胞周期蛋白

D型细胞周期蛋白(cyclinD,CycD)调控着细胞周期G1/S的转换,基本过程为CycD在外界环境刺激下积累,并与周期蛋白依赖激酶(cyclin-dependentkinase,CDK)形成有活性的激酶,促进成视网膜细胞瘤蛋白(retinoblastoma,Rb)磷酸化,使E2F因子释放,由此促使G1/S转换,这一调控系统在高等真核生物中具有很高的保守性。CycD与其他细胞周期蛋白表达有所不同,其受到生长因子的强烈诱导,去掉生长因子后,表达水平迅速下降,导致细胞被抑制在G1期。大量研究表明,CycD是细胞周期中一个关键的“感受因子”,CycD基因的表达是细胞周期进程中的限速因子,影响着植物的生长发育。现对植物CycD的特征以及在细胞周期中的功能进行综述,并探讨了其在植物生长发育中的作用。     

细胞周期蛋白和细胞周期

细胞周期是当前细胞生物学和分子生物学的热门研究课题之一。细胞生物学家、分子生物学家和遗传学家们运用了不同的材料对细胞周期G_1→S、S→G_2、G_2→M和M→G_1等过渡的调控问题进行了研究,其中以周期蛋白和p34~(cdc2)相互作用的研究最为引人注目。在G_2→M过渡期,p34~(cdc2)和周期蛋白B结合,经历一系列的磷酸化和去磷酸化过程,形成有活性的MPF,实现G_2→M期的过渡,在M期中/后期,周期蛋白B降解,致使MPF失活,细胞离开M期;在G_1→S期过渡时,p34~(cdc2)和G_1周期蛋白结合,引起DNA的复制,使细胞进入S期。此外还发现不少cdc 2的类似物在细胞周期各过渡期也有作用。因此,不同的周期蛋白和不同的cdc 2产物,参与细胞周期的方式不同。细胞周期的调控是多途径的和多层次的,这已成为进一步揭示细胞周期调控活动所必需研究的问题。