金属离子和氨基酸对Eupenicillium sp.E-UN41生物合成咪唑立宾的影响

为考察金属离子和氨基酸对Eupenicillium sp.E-UN41菌体生长及其产生的次级代谢产物咪唑立宾(MZ)的生物合成影响,在培养基中添加了无机盐和氨基酸.结果表明在发酵培养基中添加适量的镁、钠、锰、钾、钙等金属离子可提高咪唑立宾产量5％～15％,添加1.0％L-组氨酸,MZ产量提高94％.添加适宜的L-天门冬氨酸和L-甘氨酸对产MZ亦有促进作用,而L-精氨酸明显抑制Eupenicillium sp.E-UN41生物合成MZ.本研究为咪唑立宾发酵的产业化奠定了基础.     

聚球藻Synechococcus sp.中活性物质分离及活性研究

分别采用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇对聚球藻(Synechococcus)乙醇浸膏进行萃取,获得三种有机相粗提物,其后跟踪检测其抗菌、抗氧化活性,并采用GC-MS分析粗提取的化学组成,确定了石油醚相和正丁醇相的各20种成分.活性跟踪结果显示,石油醚相萃取物的抗菌和抗氧化效果最好,其次为乙酸乙酯相和正丁醇相,水相提取物没有抗菌和抗氧化活性.对活性较好的石油醚相依次进行硅胶柱层析,凝胶Sephadex LH-20层析,制备薄层层析,分离获得一单体化合物,应用1H NMR、13C NMR等波谱技术分析鉴定化合物结构为β-谷甾醇.     

UV与NTG复合诱变选育咪唑立宾高产菌

为选育咪唑立宾的高产菌株,对咪唑立宾产生菌Eupenicillum sp.E-0509-2的孢子分别进行了紫外线照射(UV)、亚硝基胍(NTG)和UV+NTG复合诱变处理筛选突变株。结果表明试验所确定的咪唑立宾产生菌的孢子诱变适宜条件为:将孢子悬液在电磁搅拌下,经紫外线照射处理60s后,以3.0g/L NTG处理20min。经发酵筛选试验,获得了一株遗传性状稳定、高产咪唑立宾的诱变菌株Eupenicillum sp.E-UN41,其咪唑立宾产量较出发菌株提高13倍。     

海绵共生真菌产黄青霉LS16抗菌活性物质的分离及结构鉴定

海洋真菌能够产生大量活性独特的次级代谢产物。为了探明海绵共生真菌产黄青霉LS16发酵液中抗副溶血弧菌Vibrio parahemolyticus的活性物质,本实验对副溶血弧菌Vibrio parahemolyticus的抑菌活性进行跟踪,采用VLC（vacuum liquid chromatography）、Sephadex LH-20柱层析、薄层层析和高效液相色谱等技术,从海绵共生真菌LS16乙酸乙酯发酵液中分离纯化得到5个化合物。进一步实验证明,化合物2具有抗副溶血弧菌Vibrio parahemolyticus活性。根据该化合物的波谱数据（¹H NMR、¹³C NMR）对其化学结构进行鉴定,确定其分子式为C₁₅H₁₅NO₃,为生物碱类化合物。     

Beta proteobacterium sp.T1菌株产壳聚糖酶的分离纯化

目的:分离纯化Beta proteobacterium sp.T1菌株所产的壳聚糖酶.方法:采用(NH4)2SO4(20%～70%)分级盐析、阴离子交换树脂DEAE Cellulose 52柱层析、SephadexG-100柱层析技术进行分离纯化,采用SDS-PAGE鉴定酶的纯度、分子量.结果:经DEAE Cellulose 52柱层析,壳聚糖酶纯化了13.19倍;经Sephadex G-100柱层析,壳聚糖酶纯化了26.32倍.结论:纯化后的酶经SDS-PAGE鉴定已达到电泳纯,分子量29.5kDa.     

产氢菌Enterobacter sp.和Clostridium sp.的分离鉴定及产氢特性

在高温水体中分离得到2株具有较高产氢活性的微生物菌株Z-16和C-32。根据两菌株的16SrDNA序列分析,初步鉴定菌株Z-16为Enterobactersp.,菌株C-32为Clostridiumsp.。研究了起始pH值、反应温度、碳源等对菌株放氢活性的影响。菌株Z-16的最适产氢条件为:反应系统起始pH7·0,反应温度35℃,以蔗糖为产氢底物。在最适条件下,菌株Z-16的氢转化率为2·68molH2/mol蔗糖。菌株C-32的最适产氢条件为:反应系统起始pH8·0,反应温度35℃,以麦芽糖为产氢底物。在最适条件下,菌株C-32的氢转化率为2·71molH2/mol麦芽糖。以葡萄糖为碳源时,菌株Z-16和菌株C-32的氢转化率分别为2·35和2·48molH2/mol葡萄糖。     

杨树溃疡病生防菌株N6-34抗菌活性物质的分离纯化与结构鉴定

【背景】杨树溃疡病是一种主要由葡萄座腔菌引起的杨树枝干病害,危害严重。前期从杨树中分离到一株内生拮抗细菌N6-34,研究表明该菌株拮抗效果好,对多种植物病原菌均有较强的拮抗作用。【目的】对拮抗细菌N6-34产生的抗菌活性物质进行分离纯化,并鉴定了活性物质组分的结构。【方法】通过硫酸铵盐析、甲醇抽提、分子筛、高效液相色谱等方法分离纯化N6-34菌株的抗菌活性物质,并对其进行结构鉴定。【结果】N6-34菌株发酵液经多步分离纯化,共获得14个组分,其中有13个组分具有抗菌活性,经一级质谱分析,获得了13种抗菌活性组分的分子量;经二级质谱分析,将13种抗菌活性物质鉴定为Fengycin A或Fengycin B的同系物或同分异构体。【结论】从N6-34菌株发酵液中分离获得了13种抗菌成分,为杨树溃疡病的生物防治提供了理论依据。     

灰绿拟青霉U—2发酵液杀蚜活性物质的分离提取

采用活性炭吸附、甲醇洗脱、高效液相色谱分离方法从灰绿拟青霉Ｕ－２发酵液中提取获得一种脂溶性杀蚜性组分,暂名为组分Ａ,为淡黄色棒杆状结晶。通过乙酸乙脂反复萃取证明发酵液中水溶性杀蚜活性成分存在,但暂未获得纯品。     

滑桃树种子内生菌Streptomyces sp.WXC抗菌化合物的分离和结构鉴定

本文对分离自滑桃树种仁的内生菌WXC进行初步的分类研究,其形态特征和系统发育分析表明该菌属于链霉菌属(Streptomyces sp.)。其发酵产物具有抗菌活性,以抗菌活性为指导,采用硅胶层析、凝胶层析和反相中压柱层析对Streptomyces sp.WXC发酵代谢产物进行分离纯化,得到2个吡喃萘醌类化合物,通过核磁共振、质谱等波谱技术确定它们分别为frenolicin B(1)和deoxyfrenolicin(2)。     

吸水链霉菌BS-112产生的抗真菌活性物质的分离纯化与结构鉴别

【目的】分离纯化吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)BS-112产生的抗真菌活性物质,究明各活性组分的结构,测定其对黄曲霉的抑制作用,为该菌株及其产生的抗真菌活性物质的应用提供依据。【方法】通过大孔吸附树脂柱层析、硅胶柱层析及制备HPLC等方法,对该菌株产生的抗真菌活性物质进行分离纯化;利用质谱(MS)和核磁共振谱(NMR)解析各活性组分的结构;采用微量液体稀释法测定各活性组分对黄曲霉的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MFC)。【结果】从BS-112菌株发酵液中分离获得4个抗真菌活性组分,利用波谱技术确定其结构分别为Tetrins A和B、Tetramycins A和B。96孔板法测得这4个化合物对黄曲霉的MIC分别为3.13μg/mL、12.56μg/mL、1.56μg/mL、6.25μg/mL,MFC分别为6.25μg/mL、25.0μg/mL、3.13μg/mL、12.56μg/mL。【结论】BS-112菌株产生的抗真菌活性物质由Tetrins A和B、Ttramycins A和B 4个化合物组成,它们对黄曲霉均具有良好的抑制作用。     

Isolation and Structure Elucidation of a New Indole Metabolite from Aspergillus ruber

A bacterial two-component signal transduction system, WalK/WalR, is essential to the cell viability of Gram-positive bacteria and is therefore a potential target for the development of a new class of antibiotics. We have solved the X-ray crystal structure of the DNA-binding domain of the response regulator WalR (WalRc) from a Gram-positive pathogen Staphylococcus aureus, currently causing serious problems in public health through the acquisition of multi-drug resistance. The structure contains a winged helix-turn-helix motif and closely resembles those of WalRs of Bacillus subtilis and Enterococcus faecalis, and also that of PhoB of Escherichia coli. Gel mobility shift assays with mutant WalRs revealed specific interactions of WalR with the target DNA, as elaborated by in silico modeling of the WalRc-DNA complex.     

Isolation of Plasma and Thylakoid Membranes from the Heterocystous Cyanobacterium Anabaena sp. PCC 7120

具异型胞蓝细菌 Anabaena sp.PCC 7120质膜和类囊体膜的分离纯化 李斌 徐冬一 赵进东*     

20#-5菌株代谢产物中抗菌成分的纯化和结构测定

为弄清假单胞菌20#-5菌株代谢产物中的抗菌活性成分物质种类,先通过有机溶剂萃取、硅胶柱层析分离和HPLC C-18柱纯化得到纯品,再利用UV、IR、MS、1H-NMR及13C-NMR等光谱分析,确定其中的两个活性成分为phenazine-1-carboxylic ac id和3-n-heptyl-3-hydroxy-1,2,3,4-tetrahydroqu inoline-2,4-d ione。     

海蒿子多糖DEⅠ、DEⅡ组分分离纯化、结构及抗癌活性研究

海蒿子干粉经热水抽提、乙醇沉淀、DEAE-Sephadex A-25柱层析分离,得到多糖DEⅠ、DEⅡ,总糖含量分别为52.40%、38.8%.经酸降解、薄层层析、气相色谱-质谱分析,证明其单糖组成均为木糖、岩藻糖、半乳糖、果糖、甘露糖、葡萄糖.其中岩藻糖含量最高.多糖DEⅠ、DEⅡ对P388肿瘤具有抑制活性.     

海绵内/共生稀有放线菌Dermacoccus sp. X4次级代谢产物分离纯化及结构解析

从中国南海西沙群岛10 m深海水中采集得到一株未鉴定海绵样品,对其进行共附生微生物的分离,得到真菌及细菌共16株。通过分子生物学鉴定及菌株发酵液抑菌活性测定,发现其中一株稀有放线菌皮生球属菌株Dermacoccus sp.X4对金黄色葡萄球菌具有较好抑菌活性。大量发酵制备该菌株发酵液,通过硅胶分配层析、ODS反相层析、SephadexTMLH-20凝胶过滤层析及C18反相层析等分离方法对发酵液成分进行分离,并使用液相质谱连用、一维核磁及二维核磁分析对分离得到的单一化合物进行鉴定,确定二酮哌嗪类化合物1个,吲哚酸酯类化合物2个。本研究中吲哚酸酯类化合物为首次从微生物次级代谢产物中得到,为丰富海洋微生物药用资源作出贡献。     

紫云英根瘤菌107菌株酸性胞外多糖的分离纯化及结构分析

用化学沉淀法和柱层析法,分高纯化了紫云英根瘤菌野生型107菌株、胞外多糖合成缺陷型变种NA02及其回复子NA02（R'－11）产生的酸性胞外多糖（EPS）。结构组成分析表明：菌株107与NA02（R＇－11）产生的EPS糖组分均由葡萄糖、半乳糖、核糖和葡萄糖醛酸构成;而变种NA02产生的EPS只含葡萄糖、半乳糖和葡萄糖醛酸,与野生型显著不同。3个菌株的EPS均有乙酰基取代,而无其它形式的取代基。EPS的酸性来自葡萄糖醛酸。1H－NMR分析表明,野生型菌株107和回复子NA02（R＇－11）的EPS糖残基通过α和β糖苷键方式连接,而变种NA02EPS的糖链中均为α连接方式。     

微小毛霉凝乳酶的分离纯化研究

研究微小毛霉(HL-1)凝乳酶的分离纯化条件及方法。研究酶的最适浸提温度、酶的浸提pH值和最适浸提时间,探讨离子浓度、加水量对浸提效率的影响,利用高速冷冻离心法、有机溶剂沉淀法,膜分离法和层析法等对粗酶液进行了分离。利用光谱法对纯化样品进行检测。酶的最适浸提温度为30℃;最适pH为6.0;浸提10 h活力最高;1%的氯化钠有利于酶的分离,加水比例为15时有利于提取,在10 000 r/min下离心10min澄清效果最好,95%的酒精沉淀效果最好,利用0.2μm的微滤膜可除去发酵液中的菌体,8 000的超滤膜可拦截凝乳酶蛋白,S300的填料可有效分离凝乳酶,纯度达95%以上。     

Isolation and Structural Analysis of an Acidic Polysaccharide from Astragalus membranaceus （Fisch.） Bunge

A new water-soluble hetero-polysaccharlde, APSID3, was obtained from a hot-water extract of the roots of Astragalus membranaceus （Flsch.） Bunge by DEAE-Sepharose Fast Flow and Sephacryl S-300 chromatography. The molecular weight of APSID3 was estimated to be 5.79 × 10^5 Da. Based on a sugar composlUon analysis, methylatlon analysis, partial hydrolysis and 13C nuclear magnetic resonance experimentation, It was concluded that the minimal repeat unit of APSID3 was composed of one terminal arablnose, one 1,5-1Inked arabinose, one 1,3-1Inked rhamnose, one 1,3,4-1Inked rhamnose, five 1,4-1Inked methyl galacturonates and six 1,4-1inked methyl glucuronates.