黑曲霉果胶酶的研究Ⅲ工厂试验及酶作用方式

通过实验室和工厂试验,证明603菌株培养条件简单,生产周期短、酶活性高,是一株有生产价值的菌株。用CM-Sephabex C-50 Sephadex G-75提纯果胶酶,得六个园盘电泳均一性组份。对四个组份进行了酶学性质的初步研究,它们的最适作用温度和pH为:4-G-1 60℃、pH4.0～4.2;4-G-2 50℃,pH4.4-4.6;2-GC-2 50℃,pH3.6;2-GC-3 40℃ pH4～4.4。Km值分别为:0.446;0.392,0.274,1.634。层析图谱证明:4-G-1和4-G-2是内切酶,2-GC-2和2-GC-3是外切酶。     

黑曲霉GD-6纤维素酶液体发酵条件的研究

采用黑曲霉 (Aspergillusniger)GD 6液体发酵生产纤维素酶 ,研究了碳源、氮源、培养基起始 pH值、接种量、摇床转速、通气量对该菌株产纤维素酶活力的影响。结果表明 ,GD 6的最适发酵温度为 2 8～ 3 0℃ ,产酶pH为 5 .5～ 6.0 ,摇床最适转速为 1 5 0r/min ,最佳接种量为 1 0 %。在以 6.0 %稻草粉为碳源、1 %豆饼粉为氮源时产酶活力最高。在最适培养条件下 ,发酵周期为 1 2 0h,发酵液中CMC酶活为 1 88.6U/mL ,FP酶活为 2 7.0U/mL。     

草酸青霉液体发酵产果胶酶条件的优化及其产物的酶学性质

采用响应面分析法对草酸青霉（Penicillium oxalicum）L5菌株液体发酵产果胶酶条件进行了优化。结果表明：桔皮粉、米糠及硫酸铵的添加量分别为4.85%、5.89%、0.97%,摇瓶初始pH为6.0~8.0,接种量为9%时,优化后的果胶酶活达54 391.70 U,是初始酶活18 148.00 U的3倍。另外,对其果胶酶性质进行了初步探讨,结果表明：该酶较适反应温度和pH分别为50℃和5.0;30~50℃时有较好的热稳定性,pH值为5.0时稳定性最佳。     

黑曲霉固态发酵制备β-葡萄糖苷酶发酵条件优化

对一株黑曲霉菌固态发酵产β-葡萄糖苷酶的产酶条件进行了优化.通过单因素实验考察了不同碳源、氮源、固液比、诱导剂及产酶时间等6 种因素对产β-葡萄糖苷酶的影响.在单因素的基础上,进行了五因素四水平正交实验.结果表明,在培养基组分中秸秆与麦麸的比例为3:3,固液比为1:3,氮源为3% 硝酸铵,发酵时间为5d,采用CMCNa 作为诱导剂时得到的β-葡萄糖苷酶活力最高,可达40.06 U/g.     

黑曲霉产菊粉酶的发酵条件优化及诱变育种

对1株黑曲霉产菊粉酶的发酵条件进行了研究,确定了优化的发酵条件为菊粉2%,酵母膏2%,(NH4)H2PO40 5%,Na Cl0 5%,MgSO4·7H2O0 05%,ZnSO4·7H2O0 01%,初始pH6 5,接种量1 6%,装液量30ml,发酵5d,菊粉酶活最高可达26U/ml,I/S为1 15。经Co60诱变筛选出1株突变株C-32,在相同的发酵条件下菊粉酶活提高30%,I/S不变。     

黑曲霉固态发酵生产单宁酶的条件优化

研究采用响应面法优化黑曲霉固态发酵生产单宁酶的培养条件。应用Plackett—Burman试验筛选出重要影响因子：五倍子粉含量、（NH4）2SO4浓度以及接种孢子量,最陡爬坡试验逼近最大响应区域。应用Box．Behnken响应面试验对重要影响因子进一步优化。得到最佳培养条件：每250mL三角瓶中装入1．0g五倍子粉、4．4g稻壳和0．5g麸皮、液固比（mL／g）2：1且营养盐溶液组成为（NH4）2s0421g/L、MgSO4·7H2O1g／L、NaCl1g／L,培养基pH自然,接种5．7×10^7个孢子后在30℃温度下培养4d。在此条件下,单宁酶产量从40U／g提高到114U／g,3次重复验证性试验平均值为115U／g,验证了模型的可靠性。     

黑曲霉HG-1发酵苹果渣生产果胶酶的工艺优化及部分酶学性质

目的：采用价格低廉的农业废弃物苹果渣为主要原料生产果胶酶,优化其生产工艺,并对果胶酶的部分酶学性质进行研究。方法：以黑曲霉HG-1为生产菌种,采用单因子实验和正交试验进行固态发酵。结果：最适培养基为苹果渣10g、棉粕10g、（NH4）2SO40.2g、K2HPO40.06g、初始水分含量60%;最适发酵条件为装料量为20g干料/250ml三角瓶,30℃恒温培养48h,果胶酶酶活力可达22248U/g。果胶酶酶促反应最适温度为45℃,最适pH为5.0;在50℃以下,pH3.0～6.0时稳定性良好;Ca^2＋、Mg^2＋、Fe^2＋对该酶有激活作用,而Ba^2＋、Mn^2＋、Zn^2＋有抑制作用。结论：以苹果渣代替麸皮作为黑曲霉HG-1固态发酵生产果胶酶的主要原料在技术上具有可行性,可大幅度降低生产成本;同时还可以部分解决苹果渣的综合利用问题。     

黑曲霉生产β—葡萄糖苷酶发酵条件的研究

经多项式回归分析,研究了不同浓度Ｎ源、Ｃ源、无机盐等对酶产量的影响,确定出最佳培养基配方为：麸皮４．９％,（ＮＨ４）２ＳＯ４０．４％,ＫＨ２ＰＯ４０．２９％,ＣａＣｌ２０．０５％,ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．０４％,ＦｅＳＯ４·７５ｍｇ·Ｌ＾－ＺｎＣｌ２１．４ｍｇ·Ｌ＾－,０．２％油酸钠。并对培养温度１时间、培养基初妈ｐＨ、通气量、接种量、接种方式等培养条件进行优化,使黑曲霉生产β－葡萄糖苷酶的产量由     

鸡腿菇产溶栓酶液体发酵条件优化

采用鸡腿菇为实验菌株,对其生产溶栓酶的液体发酵条件进行了初步优化,确定的菌株产酶培养基组分及最适培养条件为:碳源为蔗糖,氮源为豆饼粉,蔗糖/豆饼比值为2:5,发酵培养基的初始pH值为自然(6～7),装液量为250mL三角瓶装40mL,接菌量为直径1cm的菌片1片,发酵温度21℃～25℃,CuSO4添加量为0.001%.液态发酵所得溶栓酶活力可稳定达到溶圈面积180mm2以上, 相当于尿激酶活力150IU/mL,较优化前提高5倍.     

产果胶酶的菌种选育及发酵条件

炭黑曲霉(Aspergillus carbonarius)AS 3.396经亚硝基胍和Co60r-射线诱变,获得一株高产果胶酶突变株G5512。该菌株的发酵滤液,以高酯果胶为底物的酶活力为860u／ml;以低酯果胶为底物的酶活力为1227u／ml。产酶活力水平约为原出发菌株的2—6倍。产酶最适培养条件为：起始pH4.0—4.5,30℃,72—90小时。酶作用最适条件为：高酯果胶为底物时,pH3.5,50℃;低酯果胶为底物时,pH4.5,50℃。pH稳定范围为2．0-6．5(高酯果胶)和4.5—5.0(低酯果胶)。酶在60℃保温15分钟,高酯果胶为底物的酶剩余活力71％,低酯果胶为底物的酶活力仅剩余1％。     

黑曲霉固态发酵及酶解玉米皮

以玉米提取淀粉后的玉米皮渣为主要原料,采用黑曲霉固态发酵法产酶再酶解的二步法降解玉米皮中纤维素类物质。经Plackett-Burman法及响应面设计优化发酵条件得:温度30℃,接种量10%,初始水分体积分数60%,物料厚度2.47 cm,初始pH 5.79,发酵时间6 d;滤纸比酶活可达11.01 U/g,较原始酶活提高了40.61%;产酶结束后加入pH 4.8醋酸-醋酸钠缓冲液,置于50℃下酶解144 h,中性洗涤纤维与酸性洗涤纤维降解率分别为46.09%、48.82%,还原糖质量分数达到9.02%。     

果胶酶高产菌株EIM-4的鉴定及其液体发酵条件优化

目的：通过了解高产果胶酶菌株EIM-4的背景信息及优化其最适的产酶条件,为下一步工业化生产提供依据。方法：通过基于18S rDNA序列的系统发育进化分析对果胶酶高产菌进行鉴定,通过单因素试验和均匀设计获得最适产酶条件。结果：通过对18SrRNA基因的分子系统进化分析,菌株EIM-4被鉴定为黑曲霉（Aspergillus niger）。通过单因素和均匀设计试验确定最佳产酶培养基为（g/L）：橘皮粉32.9,黄豆粉10.7,（NH4）SO42.1,CaCO31.0,pH自然。结论：Aspergillus niger EIM-4的液体发酵产果胶酶的活力可达15159.82U/mL。     

果胶酶CP-85211菌株的选育及其液体发酵条件的研究

黑曲霉(Aspergillus niger) CP-831经0.03％亚硝基呱在40℃处理30分钟,获得一株高产果胶酶突变株CP-85211。该突变株发酵滤液,当以果胶为底物时,酶活力为308u／m’;当以多聚半乳糖醛酸为底物时,酶活力为842u／ml。产酶活力水平约为出发菌种的5倍。产酶最适培养基组成为：8％麦麸,2％桔皮粉和2％硫酸铵。最适培养条件为：起始pH 3．5,如℃,72小时。     

放线菌果胶酶产酶条件及酶促反应条件的研究

从埋麻土壤中分离到放线菌２９８株,经初筛和复筛得到产酶活性较高的一株放线菌５－７１。最适产酶条件是：果胶０．５％,葡萄糖０．５％,蛋白胨０．５％,酵母粉０．１％,Ｋ２ＨＰＯ４ ０．１％,ＫＨ２ＰＯ４ ０．１％,ＮａＣｌ０．１％,ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０．０５％,ｐＨ８．０。２５℃培养３天达产酶高峰。通气量对产酶影响不大。酶促反应最适条件是：ｐＨ９．６,４５℃,底物果胶浓度０．７５％,作用时间９０ｍｉ     

黑曲霉产木聚糖酶固态发酵条件及部分酶学性质的研究

实验以棉粕和玉米秆为主要原料,采用单因素和正交实验方法对黑曲霉固态发酵产木聚糖酶的培养条件进行了优化,为了获得高酶活产品的发酵条件。结果表明,最适培养基组分为棉粕和玉米秆的比例为3∶2,固水比为1∶1.2,尿素的最适添加量为2%(以干重计),KH2PO4的最适添加量为0.2%。在此条件下,菌株产酶活性可达6 529U/g干曲。该酶的最适反应温度为55℃,最适pH为5.0,pH稳定范围较宽,在30℃、pH 3.5~6.0范围内处理100min,酶活保持在85%以上,但耐热性不是很理想,在60℃保温30min残余酶活只有17%。     

黑曲霉DB056产柚苷酶发酵条件初步优化

以α-鼠李糖苷酶活力和柚苷酶活力为考察指标, 研究了发酵条件对黑曲霉DB056产柚苷酶的影响。结果表明: 发酵温度、菌丝形态、培养基初始pH、接种量和装液量对黑曲霉DB056产柚苷酶都具有重要影响。初步优化得到黑曲霉DB056产柚苷酶的条件为: 培养基初始pH 8.0, 玻璃珠添加个数5个, 装液量45 mL, 接种量7%, 发酵温度34°C, 摇床转速190 r/min。采用此条件进行发酵, 高效液相色谱法检测α-鼠李糖苷酶活力最大可达1076.32 U/mL, 柚苷酶活力最大可达420.68 U/mL, 分别比初始条件提高了72.35%和78.03%。黑曲霉DB056不仅在对数生长期能快速合成柚苷酶, 在稳定期及衰亡期也会不断地分泌柚苷酶。阐明了发酵条件对黑曲霉DB056产柚苷酶的影响并获得了经过初步优化的发酵条件, 为进一步优化发酵条件, 提高黑曲霉DB056产柚苷酶的产量奠定了良好的基础。     

黑曲霉生产β-葡萄糖苷酶发酵条件的研究产

经多项式回归分析,研究了不同浓度Ｎ 源、Ｃ 源、无机盐等对酶产量的影响,确定出最佳培养基配方为：麸皮４ ．９ ％ ,（ＮＨ４）２ＳＯ４ ０ ．４ ％ ,ＫＨ２ＰＯ４ ０ ．２９ ％ ,ＣａＣｌ２ ０ ．０５ ％ ,ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ０ ．０４ ％ ,ＦｅＳＯ４·７Ｈ２ Ｏ５ｍｇ·Ｌ－ １ ,ＺｎＣｌ２ １ ．４ｍｇ·Ｌ－ １ ,０ ．２ ％ 油酸钠．并对培养温度、时间、培养基初始ｐＨ、通气量、接种量、接种方式等培养条件进行优化,使黑曲霉生产β葡萄糖苷酶的产量由１７Ｕ·ｍｌ－ １ 增至２１ ．３Ｕ·ｍｌ－ １ ．     

黑曲霉AF-98固体发酵产纤维素酶的产酶条件研究

通过单因子及正交试验,对黑曲霉AF-98固体发酵产纤维素酶的产酶条件进行了探讨。其优化的产酶条件为:甘蔗渣3g,麸皮2g,加含尿素为0.15%的Mandels营养液25mL(加水比1:5),调初始pH5.0,28℃发酵72h。在此优化条件下,纤维素酶活力可达7.56u/g干曲。     

黑曲霉过氧化氢酶发酵过程的数学模型

研究了黑曲霉发酵生产过程氧化氢酶的分批发酵动力学,并建立了发酵过程菌体生长,基质消耗及酶合成的随时间变化的数学模型。Logistic方程,Luedekin-Piret方程及与Luedeking-Piret方程相似的基质消耗方程能够很好地分别描述黑曲霉细胞的生长,发酵产酶过程及葡萄糖的消耗,过氧化氢酶的发酵合成是生长耦联的,研究中还将3个动力学模型的预测值和实验值进行了比较。     

黑曲霉生产β-葡萄糖苷酶发酵条件的研究产

经多项式回归分析,研究了不同浓度N源、C源、无机盐等对酶产量的影响,确定出最佳培养基配方为:麸皮4.9%,(NH₄)_2>SO₄0.4%,KH₂PO₄0.29%,CaCl₂0.05%,MgSO₄·7H₂O0.04%,FeSO₄·7H₂O 5mg·L^-1,ZnCl₂1.4mg·L^-1,0.2%油酸钠。并对培养温度、时间、培养基初始pH、通气量、接种量、接种方式等培养条件进行优化,使黑曲霉生产β葡萄糖苷酶的产量由17U·ml^-1增至21.3U·ml^-1.