原代培养骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型的建立

目的:观察高脂负荷在胰岛素抵抗形成中的意义.方法:用不同浓度椋榈酸、胰岛素分别培养骨骼肌细胞2h、6h、12h、24h,对棕榈酸诱导组的一部分细胞给予1× 10-7M胰岛素刺激2h,用血糖检测试剂盒(GOD-POD)检测各组培养液中的葡萄糖含量,研究不同浓度棕榈酸、胰岛素对骨骼肌细胞摄取葡萄糖的影响,观察胰岛素的生理功效的变化.结果:0.6mM棕榈酸诱导12h以上或者5×101-M胰岛素诱导24h后,培养液中的葡萄糖浓度比正常组高且有显著性差异,表明细胞的糖代谢能力降低.经1×10-7M胰岛素刺激2h后的棕榈酸诱导组,培养液中葡萄糖的浓度与未经胰岛素刺激的棕榈酸诱导组相比无显著差异,胰岛素的生理功效降低,证实棕榈酸诱导组细胞已对胰岛素产生耐受.结论:高脂或高胰岛素条件均可诱导原代骨骼肌细胞胰岛素抵抗模型.     

葡萄糖激酶激活剂研究进展

葡萄糖激酶分布在体内多个脏器中,可感应葡萄糖和调节糖代谢激素,在稳定血糖水平方面起到重要作用。葡萄糖激酶激活剂系 针对这一靶点而开发,能够通过葡萄糖浓度刺激的胰岛素分泌、降低胰高血糖素浓度和肝糖输出、促进肝糖原合成以及调控肠促胰素释 放等机制来稳定体内血糖水平,近年来已成为2 型糖尿病新型药物研发的热点。介绍现有葡萄糖激酶激活剂药物的开发策略、作用特点 及临床研究进展。     

高浓度葡萄糖下调INS-1细胞血红素氧合酶1表达水平的研究

目的:观察高糖毒性对大鼠胰岛细胞系INS-1细胞中血红素氧合酶1蛋白表达的损害作用,并研究信号分子刺激下细胞损伤的自我保护机制.方法:分别采用不同葡萄糖浓度孵育或葡萄糖代谢物葡萄糖胺持续孵育培养INS-1细胞,造成高糖毒性损伤,进而采用胰岛素以及核转录因子Nrf2激动剂莱芜硫烷刺激细胞保护信号机制改善损伤,蛋白印迹法检测细胞中血红素氧合酶1的表达情况.结果:高浓度葡萄糖溶液中(25 mM)孵育INS-1细胞48小时,血红素氧合酶1的表达水平较正常情况显著下降(P＜0.05).高浓度葡萄糖与葡萄糖胺共刺激对实验细胞中血红素氧合酶1的表达下调具有协同作用.胰岛素对实验细胞中血红素氧合酶1表达具有上调作用,但上调作用强度随培养环境中葡萄糖浓度的增高而降低.核转录因子Nrf2激动剂莱芜硫烷孵育处理实验细胞后,胞内血红素氧合酶1表达水平在葡萄糖胺刺激下上调,且与培养环境中葡萄糖浓度水平无关(P＜0.05).结论:高糖毒性可损害胰岛β细胞内抗氧化酶-血红素氧合酶Ⅰ的表达,而胰岛素可激活下游通路尤其是Nrf2信号通路,对抗高糖诱导的氧化应激损伤,从而保护胰岛细胞.     

消炎痛对四氧嘧啶引起的大鼠糖耐量和胰岛素分泌改变的影响

本实验以糖耐量为指标,观察了消炎痛抗四氧嘧啶引起的大鼠胰岛Ｂ细胞的损伤作用。皮下注射四氧嘧啶（１５０ｍｇ／ｋｇ）的大鼠控口灌注葡萄糖（５ｇ／ｋｇ以后,血糖浓度急剧升高并在灌胃后１８０ｍｉｎ仍继续升高。在葡萄糖刺激后血清胰岛素浓度无明显升高,未出现正常的分泌高峰。在注射四氧嘧啶前１２ｈ预先皮下注射消炎痛的大鼠则口服葡萄糖后的第６０ｍｉｎ血糖浓度迅速升高达到高峰,然后逐渐下降。在葡萄糖刺激后血清胰岛素浓度出现明显高峰,并具有类似正常的分泌高峰。基础血糖浓度和在口服葡萄糖后３０,６０,１２０,１８０ｍｉｎ血糖浓度及相应时相的胰岛素浓度在两组之间有显著性差异。消炎痛对正常大鼠糖耐量及胰岛素分泌没有明显的影响。本实验结果提示,消炎痛预处理可能对四氧嘧啶引起的胰岛Ｂ细胞损伤具有一定的预防作用。     

枸杞多糖对四氧嘧啶损伤的大鼠胰岛细胞的保护作用

报道了枸杞多糖(Lb-PS)对4mmol／L四氧嘧啶(AXN)损伤的离体培养的大鼠胰岛细胞的保护作用。实验分为正常对照素、AXN损伤组和Lb-PS保护组。采用放射免疫分析法测定胰岛细胞内胰岛素水平以及葡萄糖刺激的胰岛素释放水平。分光光度比色法测定细胞内SOD和葡萄糖激酶的活性,以及培养基中NO和MDA的含量。结果表明,AXN显著抑制细胞内的胰岛素合成和葡萄糖刺激的胰岛素释放,以及SOD和葡萄糖激酶的活性。AXN促使培养基中N0和MDA浓度的显著增加。在同时加入AxN和105～102mg／ml Lb—PS的实验组中,均发现能不同程度地保护胰岛细胞免受AXN的损伤。Lb-PS能恢复AXN损伤的胰岛细胞的胰岛素合成和释放水平,以及SOD和葡萄糖激酶的活性,使其基本达到正常对照组的水平。Lb-PS还能降低培养基中NO和MDA的浓度。因此,Lb-PS可能通过减少胰岛β细胞的NO产量和维持SOD和葡萄糖激酶的活性,最终起到保护胰岛素合成和释放功能的作用。     

外源性胰岛素对斑马鱼血糖及其转运的影响

斑马鱼（Danio rerio）在糖负荷状态下表现出持续高血糖现象。与对照组（仅腹腔注射灭菌去离子水）相比,葡萄糖组（仅腹腔注射葡萄糖）血浆胰岛素水平无显著差异,胰岛素基因表达显著上调,肝胰脏葡萄糖转运蛋白（glucose transporters,GLUTs）基因表达无显著差异,说明斑马鱼自身胰岛素分泌不足和葡萄糖转运迟缓是导致其在糖负荷状态下持续高血糖的原因。为了观察外源性胰岛素对斑马鱼血糖及其在体内转运的影响,设计低（1.25 IU/kg）、中（12.5 IU/kg）、高（125 IU/kg）3个浓度的胰岛素,分别与葡萄糖溶液（0.1 g/mL）共注射斑马鱼并观察其血糖变化。结果表明,低剂量胰岛素能有效促进斑马鱼血糖的降低,且能直观反映糖负荷后血糖的变化情况,为最适注射浓度。此外,研究显示斑马鱼血糖变化不受性别影响。在胰岛素最适注射浓度下,与葡萄糖组相比,胰岛素组（葡萄糖与胰岛素共注射）可以显著减少斑马鱼血糖恢复到正常水平的时间,进一步分析发现,斑马鱼血浆胰岛素水平增加,肝胰脏葡萄糖转运蛋白基因表达显著上调,但胰岛素基因表达却被显著抑制。综上所述,胰岛素分泌不足和葡萄糖转运迟缓是造成斑马鱼持续高血糖的原因;外源性胰岛素能够促进糖负荷状态下斑马鱼血糖的降低,但是具有反馈抑制斑马鱼肝胰脏胰岛素基因表达的作用。     

电损毁海马CA_3区及连合前穹窿对大鼠血浆胰岛素水平及胰岛细胞的影响

电损毁大鼠海马CA_3区(HCA_3-EL)或连合前穹窿纤维(ACHF-EL)后,其血浆胰岛素基础水平明显升高。HCA_3-EL两周后,大鼠空腹血糖浓度增高,且糖耐量降低。但胰岛B细胞对葡萄糖刺激之分泌反应却显著增强。HCA_3-EL或ACHF-EL大鼠经静脉糖耐量试验(IVGTT)后,其胰岛A细胞内胰高血糖素样及B细胞内胰岛素样免疫阳性物质的相对含量均明显低于对照组。HCA_3-EL组大鼠胰岛中生长抑素样免疫阳性物质的相对含量及阳性细胞数目均较对照组减少,而胰岛中胰多肽样免疫阳性物质却无明显变化。上述结果表明,海马CA_3区(HCA_3)及连台前穹窿(ACHF)对胰岛素的分泌有紧张性抑制作用。     

胶原酶消化法分离制备罗非鱼和中华鳖的胰岛细胞及其生物活性

目的探讨罗非鱼、中华鳖胰岛细胞分离提取的方法及对比两者的生物学活性差异。方法采用胶原酶消化分离罗非鱼、中华鳖胰岛细胞,光镜下观察其形态结构。在体外用不同浓度的葡萄糖刺激胰岛细胞,测定其生物学活性。结果罗非鱼、中华鳖胰岛细胞在体外对不同浓度的葡萄糖刺激具有明确的生物学反应,并随着葡萄糖浓度的增加胰岛素的产生也相应增加。结论采用胶原酶消化分离罗非鱼、中华鳖胰岛细胞的方法可行,胰岛细胞在体外对不同浓度的葡萄糖刺激产生胰岛素并具有正相关,其为鱼纲、爬行纲与哺乳纲动物之间的胰岛细胞移植奠定了实验基础。     

饮茶与糖尿病相关性的研究进展

饮茶可改善糖代谢，降低糖尿病患病风险，可能的作用机制为茶的有效成分通过抗氧化、抗炎、抑制脂肪分解、上调葡萄糖转运蛋白IV及胰岛素抵抗相关基因表达等途径改善胰岛素抵抗，抑制糖代谢关键酶、消化酶活性且保护胰岛β细胞，从而降低血糖水平。本文综述饮茶与糖尿病的相关性及可能的机制的研究进展。     

胰岛素对葡萄糖经过细胞膜运输时的作用

刺激肌肉和其他组织使他们摄取葡萄糖一般认为是胰岛素最特殊与重要的作用之一。这一促进作用无疑是给与胰岛素后血糖降低的主要原因。在若干类型的糖尿病中血糖的异常升高大部分是由于缺乏这一作用。因此研究对摄取葡萄糖的促进作用,应该是研究胰岛素作用所在的适当方法。为了讨论方便,可将肌肉摄取葡萄糖分为三步:(1)葡萄糖从血浆转移到细胞。(2)糖经过细胞膜的运输。(3)葡萄糖在细胞内的代谢或利用。既然这些步骤是顺序衔接的,因此摄取的总速度     

沉默长链非编码RNA Meg3损伤小鼠胰岛细胞的胰岛素分泌功能

MEG3是一种长链非编码RNA。已有研究证明,鼠源Meg3参与小鼠诱导多能干细胞、神经元和视网膜的分化过程。最新报道,MEG3在人胰岛β细胞中高表达,但其对维持成年胰岛β细胞的功能尚不清楚。本研究旨在探讨Meg3在小鼠胰岛细胞胰岛素分泌功能中的作用。实时定量PCR揭示,与Balb/c小鼠心、肝、脾、肺、肌、肾等组织/器官比较,Meg3在胰腺组织中高表达。在非糖尿病小鼠发生自发性糖尿病的第8、12周,Meg3在胰岛中的表达水平分别下调24%±8%和29%±9% (P<0.01);而当血糖升高20 mmol/L,小鼠胰岛中Meg3表达下调72%±16%(P<0.01)。在MIN6细胞中采用RNA干扰敲减Meg3的表达,在高糖浓度（20 mmol/L）刺激条件下,胰岛素分泌显著减少。小鼠静脉注射siRNA,结合血糖测定或葡萄糖耐受试验（IPGTT）显示,si-Meg3小鼠血清胰岛素水平显著下降。注射葡萄糖前血糖升高,注射葡萄糖后耐受能力降低;免疫组化分析显示,si-Meg3小鼠胰岛素阳性细胞的面积减少。实验结果提示,Meg3通过参与胰岛素的合成和分泌维持成年小鼠胰岛功能。Meg3表达失调可能参与I型糖尿病（T1DM）发病过程。     

利拉鲁肽治疗2型糖尿病的临床研究进展

利拉鲁肽是一种新型胰高糖素样肽-1 GLP-1类似物,能迅速、高效、持久地降低血糖及糖化血红蛋白,具有改善胰岛β细胞功能、调节收缩压、保护心血管、降低血脂、减轻体重、延迟胃排空、增加饱腹感等作用。此外,利拉鲁肽具有葡萄糖依赖的促胰岛素分泌作用,仅在机体血糖水平高时刺激胰岛素的释放,但当患者体内血糖浓度恢复至正常时,GLP-1分泌促胰岛素的作用便消退,因而发生低血糖事件的几率较低,能有效地改善糖尿病患者的病情,已成为目前2型糖尿病治疗领域的研究热点。本文主要就利拉鲁肽治疗2型糖尿病的临床研究进展进行综述。     

NO-1886改善糖尿病小型猪的糖代谢

合成化合物NO-1886是一种脂蛋白脂酶活化剂,已被证明其可降低血浆TG并能升高HDLC的浓度．后又发现其还有降低高脂高蔗糖诱发糖尿病兔血浆葡萄糖浓度的作用．对高脂高蔗糖饲料喂养的小型猪脂肪细胞大小、血浆TNF—α和FFA的水平以及NO-1886对其影响进行了研究,结果发现,脂肪细胞明显肥大．血浆TNF-α和FFA以及空腹血糖水平均增高,且引起胰岛素抵抗．添加了l％NO-1886后．脂肪细胞增大被抑制,血浆TNF—α、FFA和空腹血糖的浓度均显著降低,血浆葡萄糖清除率和胰岛素分泌急性相都有了明显改善．以上结果说明,NO-1886可能通过抑制脂肪蓄积、降低血浆TNF-α和FFA的浓度而改善高脂高蔗糖饲料引起的小型猪的糖代谢紊乱．     

甲状腺、胰岛、垂体

甲状腺人体最大的内分泌腺,左右各一叶,腺体重约20—40克.主要分泌甲状腺素和三碘甲状腺氨酸. 甲状腺含碘约5—7毫克,占全身总碘量的90％.正常人每天从食物中摄取约150—500微克的碘,其中1/3为甲状腺所摄取,2/3由肾脏排出体外.有人估计,人体每天合成80微克左右甲状腺激素,每周需供应约1毫克的碘,每年需碘约35—50毫克. 甲状腺具有很强的选择性摄取、浓缩、转运碘的能力.正常甲状腺中与血浆中含碘浓度之比为25—50:1,即浓缩25—50倍.当腺体受刺激时,其浓缩能力可高达350倍. 甲状腺素能加速体内大多数细胞的氧化率、增加产热、使基础代谢率增高.据估计,1毫克甲状腺素可使产热增加1,000千卡,相当于250克葡萄糖或110克脂肪所产生的热量. 胰岛胰岛是胰脏的内分泌组织,正常成人的胰脏约有25万—175万个胰岛(有的书上估计约200万个胰岛)、约占胰腺总体积的1—2％.人胰腺的每克组织约含有1—2单位的胰岛素.正常人每天可分泌25—50单位胰岛素人血.成人空腹血浆胰岛素的浓度为10—20微单位/毫升(一个微单位是百万分之一单位). 胰岛素是调节糖、蛋白质和脂肪代谢,维持血糖于正常水平的主要激素.它可促进葡萄糖透过细胞膜进入细胞,正常人血糖浓度在80—     

INS-1E细胞葡萄糖毒性模型的建立

目的:建立胰岛细胞系INS-1E细胞的葡萄糖毒性模型。方法:将INS-1E细胞分别在不同葡萄糖浓度(5.5 mmol/L、16.7mmol/L、25 mmol/L、30 mmol/L)的1640完全培养基中培养不同时间(48 h、72 h、96 h、120 h),分别在不同时间点取细胞进行细胞功能检测,实时荧光定量PCR法检测胰岛素m RNA的表达,ELISA检测葡萄糖刺激的胰岛素的分泌。结果:与对照组相比,高糖浓度(5.5 mmol/L、16.7 mmol/L、25 mmol/L、30 mmol/L)培养基中培养48 h后,INS-1E细胞的胰岛素合成和分泌的功能均增加(P均0.05),随着培养基中葡萄糖浓度的升高以及培养时间的延长,INS-1E细胞胰岛素合成及分泌的功能逐渐下降,当在葡萄糖浓度为30 mmol/L的培养基中培养120 h后,胰岛素m RNA合成及葡萄糖刺激的胰岛素分泌均显著降低(P均0.01)。结论:INS-1E细胞在30 m M的葡萄糖中培养120 h形成稳定的葡萄糖毒性模型。     

消炎痛对四嘧啶引起的大鼠糖耐量和胰岛素分泌改变的影响

本实验以糖耐量为指标,观察了消炎痛抗四氧嘧啶引起的大鼠胰岛Ｂ细胞的损伤作用。皮下注射四氧嘧啶（１５０ｍｇ／ｋｇ）的大鼠经口灌注葡萄糖（５ｇ／ｋｇ）以后,血糖浓度急剧升高并在灌胃后１８０ｍｉｎ仍继续升高。在葡萄糖刺激后血清胰岛素浓度无明显升高,未出现正常的分泌高峰。在注射四氧嘧啶前１２ｈ,预先皮下注射消炎痛的大鼠则口服葡萄糖后第６０ｍｉｎ血糖浓度迅速升高达到高峰,然后逐渐下降。在葡萄糖刺激后血清胰岛     

肝脏和胰岛素在糖代谢中的作用

《生理卫生》课本中提到“肝脏有贮藏养分的作用,例如能够把血中多余的葡萄糖贮藏起来。当血糖浓度减少时又可将糖元分解为葡萄糖,供人体能量需要”。“胰岛素能使血糖合成糖元,加速血糖分解”。由于这些话,有的教     

硒化合物的拟胰岛素作用

硒的主要功能是它作为硒酶或硒蛋白的活性成分 ,能够清除自由基 ,保护细胞膜免于氧化 ,增强机体免疫的作用 ;此外 ,硒还能拮抗汞、砷、镉、铊的毒性。近年来 ,研究还发现 :具有降低血糖和调控胰岛素介导的代谢过程等拟胰岛素作用。1 .增强葡萄糖的运输和转化Ｏｓａｍｕ等[1] 报道了在大鼠脂肪细胞中 ,硒与胰岛素一样具有增强葡萄糖的转运能力 ,硒和胰岛素都能够刺激增强从胞内到质膜上的两个葡萄糖转运蛋白 (ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ,ＧＬＵＴ)移位活性 ,从而达到加速葡萄糖的运输 ,降低机体血糖的作用。研究还发现硒能够刺激增强每一个与胰…     

人肾小球血管内皮细胞胰岛素抵抗模型的建立

目的:采用不同浓度的棕榈酸与葡萄糖在体外诱导建立人肾小球内皮细胞(Human glomerular endothelial cells,HRGEC)胰岛素抵抗模型。方法:以人肾小球内皮细胞为研究对象,不同浓度棕榈酸(100,200,300,400,500μmol/L)与不同浓度的葡萄糖(20,30,40,50,60 mmol/L)分别作用细胞24小时和48小时,应用MTT法和葡萄糖氧化酶法检测棕榈酸和葡萄糖对HRGEC存活率与葡萄糖消耗量的影响,蛋白免疫印迹法检测P-IRS、IRS、AKT和p-AKT (Ser473)的影响。结果:1、当棕榈酸500μmol/L干预细胞24小时,与正常组比较,细胞活性显著下降(P0.01),棕榈酸浓度大于或等于300μmol/L干预细胞48小时,细胞存活率显著降低(P0.01)。与空白组比较,300μmol/L、400μmol/L、500μmol/L棕榈酸干预细胞24小时能够明显的降低细胞的葡萄糖消耗(P0.05);200μmol/L、300μmol/L、400μmol/L、500μmol/L干预细胞48小时能够明显的降低细胞的葡萄糖消耗(P0.01)。2、不同浓度葡萄糖刺激人肾小球内皮细胞(HGREC)24小时和48小时,与空白组比较,各组细胞的存活率与对照组比较均无显著变化(P0.05)。与空白组比较,40mmol/L、50 mmol/L、60 mmol/L葡萄糖干预细胞24小时能够降低人肾小球内皮细胞的葡萄糖消耗(P0.05)。与空白组比较,30mmol/L、40mmol/L、50 mmol/L、60 mmol/L葡萄糖干预细胞48小时能够明显降低人肾小球内皮细胞的葡萄糖消耗量(P0.01)。3、不同浓度的葡萄糖刺激人肾小球内皮细胞(HGREC)24小时后,结果显示,50 mmol/L、60 mmol/L葡萄糖刺激细胞24小时能降低P-IRS/IRS和p-AKT/AKT (Ser473)的水平(P0.01),而其他组无明显显著变化(P0.05)。结论:高糖诱导方法能够建立HRGEC细胞胰岛素抵抗模型,具有建模周期短、容易重复、可控性强的优点,可用于糖尿病胰岛素抵抗机制的研究和中药成分的筛选研究。     

胰岛素对3T3-L1脂肪细胞中极低密度脂蛋白受体基因表达的影响

体外培养3T3-L1细胞分化模型,研究不同浓度胰岛素及慢性胰岛素刺激对3T3-L1脂肪细胞中极低密度脂蛋白受体（VLDLR）基因表达的影响.在不同浓度胰岛素及胰岛素慢性刺激的干预下,用半定量RT-PCR检测细胞VLDLR mRNA水平的变化.微量化GOD-PAP法检测培养基中残存的葡萄糖.在细胞诱导分化过程中,胰岛素浓度的增高促进VLDLR的表达;胰岛素慢性刺激下,VLDLR表达因浓度差异呈现不同变化.研究结果表明,胰岛素的浓度及慢性刺激对3T3-L1脂肪细胞的成熟和VLDLR基因的表达有显著作用,而胰岛素抵抗明显减低成熟脂肪细胞VLDLR的表达.