粘虫胚胎细胞系的建立及对MsNPV敏感性的测定

用培养24h的粘虫受精卵成功地建立一株粘虫胚胎细胞后,命名为NEAU-Ms-980312,目前已传代201代,该细胞系主要含有圆形和纺锤形两种细胞,在28℃、120h的细胞群体倍增时间为47.82h.该细胞系对粘虫核型多角体病毒有较高的敏感性,用原代病毒以感染复数(m.o.i.)为0.08TCID50/细胞感染细胞,在接毒后10d,病毒感染率和每细胞产生的多角体数量分别是为62.10%和33.59PIB.     

粘虫胚胎细胞系的建立及对MsNPV敏感性的测定

用培养24h的粘虫受精卵成功地建立一株粘虫胚胎细胞后,命名为NEAU－Ms-980312,目前已传代201代,该细胞系主要含有圆形和纺锤形两种细胞,在28℃,120h的细胞群体倍增时间为47.82h。该细胞系对粘虫核型多角体病毒有较高的敏感性,用原代病毒以感染复数（m.o.i.)为0.08TCID50/细胞感染细胞,在接毒后10d,病毒感染率和每细胞产生的多角体数量分别是62．10％和33.59PIB。     

东北地区粘虫的季节性迁飞行为(英文)

粘虫Mythimna separata是我国农业生产上的重要害虫, 为了明确其季节性迁飞行为参数, 本研究采用垂直监测昆虫雷达（vertical-looking radar, VLR）及相关辅助设备的长期自动观测, 结合基于GIS的大区环流和轨迹模拟, 调查分析了2005年东北地区粘虫季节性迁飞行为。结果表明： 粘虫在不同季节和夜间不同时间空中飞行高度具有明显差异, 空中飞行行为受气象条件尤其是空中风场影响较大; 春季和秋季主要借助气流运载进行大规模长距离迁飞, 夜间持续飞行时间可达9 h, 多数个体能完成整夜飞行, 春季迁飞高度主要在300~600 m, 秋季飞行高度相对较低主要在300 m以下和400~500 m。夏季雷达回波有明显的成层现象, 最高可达1 000 m, 主要集中在500 m和700 m两个高度层。轨迹分析显示： 5月29日由山东潍坊、 临沂等虫源地起飞的黏虫, 顺西南气流越海迁飞, 6月1日在气旋天气影响下, 在吉林省白城等地降落; 7月中旬主要为当地黏虫受对流天气影响进行短距离迁飞扩散; 9月11日虫源来自内蒙古呼伦贝尔, 顺西北气流向吉林省东南方向迁飞。研究结果为东北地区粘虫的有效防控提供了技术支撑。     

家蝇胚胎细胞系的建立及其生物学特性

昆虫细胞系在许多领域得到广泛的应用。以家蝇Musca domestica L.卵(胚胎)为材料,用含20%胎牛血清的M3培养基培养,原代培养35d左右形成单层,每7d传代1次,连续传代60代次。细胞群体倍增时间为44h,染色体2n=12,可在液氮及4℃冰箱中保存复苏,命名为MDEC-07114。     

从C57BL/6J小鼠胚胎中分离ES细胞系(英文)

ＥＳ细胞（ＥｍｂｒｙｏｎｉｃＳｔｅｍＣｅｌｓ）是来源于小鼠早期胚胎的细胞系,它可以在体外大量培养而不失去其发育的多潜能性。ＥＳ细胞不仅可以用来制作转基因动物,而且能够作为载体进行基因打靶等多种研究。目前,国际上常用的胚胎干细胞系都是来源于１２９小鼠的胚胎。因而,有必要探讨用其它品系小鼠建立ＥＳ系。１９９１年,Ｌｅｄｅｒｍａｎｎ等人首次报道从Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠胚胎中建成了ＥＳ细胞系,但是没有对建立的细胞系进行特性分析。国内柴桂萱等人虽然做了特性分析,但是他们所建细胞系的细胞直径较大,生长速度较慢,不同于常见的ＥＳ细胞系。我们从Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ品系小鼠胚胎中共分离了四个ＥＳ细胞系,分别命名为ＣＥ１、ＣＥ２、ＣＥ３、ＣＥ４（Ｆｉｇ．１ａ＆ｂ）。这四个细胞系核型正常率均达到７０％以上。我们检查了ＣＥ２细胞的分化能力,当将ＣＥ２细胞注入同基因型小鼠的皮下后,获得的畸胎瘤（Ｆｉｇ．３）组织切片检查的结果表明：该细胞能够分化成多种组织（Ｆｉｇ．２）。我们也研究了ＥＳ细胞的嵌合能力,用ＩＣＲ小鼠胚胎作为受体胚胎,采用囊胚显微注射法构建嵌合鼠。在幸存的幼鼠中我们获得了来源于ＣＥ２细胞的嵌合鼠（Ｔａｂｌｅ１,Ｆｉｇ．４）。综     

小鼠孤雄单倍体胚胎干细胞系建立

单倍体细胞,如酵母,是遗传学研究的重要工具。自然状态下存在的单倍体细胞只有结构和功能均已特化的配子,包括卵子和精子。然而卵子和精子不能在体外进行培养,因此也不能对其进行基因操作。如果能够在体外建立哺乳动物的单倍体细胞系,那将极大地促进哺乳动物遗传学及相关生命科学的研究。     

小鼠胚胎卵巢卵泡体外无血清培养体系的建立(英文)

调节原始卵泡形成、起始生长的信号目前仍知之甚少。一个重要的原因就是缺乏一个良好的研究模型。我们以妊娠１３天昆明白小鼠胚胎卵巢为研究材料,经过５天的贴壁培养后,分别用牛血清（ＦＢＳ）、无血清（ＩＴＳ）和含有人卵泡刺激素（ＦＳＨ－ＩＴＳ）培养液继续体外培养到第１９天,发现ＩＴＳ组培养的胚胎卵巢卵泡发育要显著优于ＦＢＳ组（Ｐ＜０．０１）,如：培养至第７天时（Ｐ１,相当于出生日）,卵泡数分别为２９５±１８和 ２０６±１７;培养至第１３天时（Ｐ７）,卵泡数分别为 ５９４±３１和 ２６２±２８;培养至第１９天时（Ｐ１３）,卵泡数分别为 ３７１±２５和 ５０±１１（Ｆｉｇ．１,２＆４）。ＩＴＳ处理组的绝大部分卵巢在培养早期（如：Ｐ５前）都形成了皮质－髓质样的卵泡生长模式,而ＦＢＳ处理组超过半数卵巢不能形成皮质一髓质样的卵泡生长模式;ＦＳＨ－ＩＴＳ处理组和ＩＴＳ处理组的胚胎卵巢卵泡发育并无显著差异（Ｆｉｇ．２,４＆５）。 结果提示所建立的以ＩＴＳ为血清替代物的无血清培养模型更益于小鼠胚胎卵巢卵泡的体外发育;ｈＦＳＨ不是小鼠胚胎卵巢早期发生发育所必须的。     

家兔胚胎细胞核移植的研究(英文)

本研究以兔为实验材料,对细胞核移植过程中显微操作、电融合、电活化以及移核胚的培养等基本问题进行了研究。对兔进行ＰＭＳＧｈＣＧ超数排卵,收集成熟卵母细胞和１６细胞胚;后者经胰蛋白酶消化,去除胶膜和透明带,在不含Ｃａ２＋、Ｍｇ２＋的分离液中分成单个卵裂球;然后,分别对两者做ＣＢ预处理;首次尝试采用Ｗｉｌａｄｓｅｎ法,去除卵母细胞核、并将单个卵裂球注入透明带,同时、与ＭｃＧｒａｔｈＳｏｌｔｅｒ法进行比较;通过电融合使供体核进入去核的卵母细胞内;将所得移核胚在体外或在中间受体内培养并观察。结果表明：一、Ｗｉｌａｄｓｅｎ法与ＭｃＧｒａｔｈＳｏｌｔｅｒ法比较,核移植操作的成功率及以后的电融合率均无明显差异（Ｔａｂ．１）。相对于后者,Ｗｉｌａｄｓｅｎ法更简便、易于掌握并提高去核率。二、ｈＣＧ超排注射后１３～１５ｈ,观察卵母细胞发现：其中,６７８％保留有第一极体。此时的卵子若去除１／３胞质量,去核率可以达到５８３％。若推迟去核时间,笫一极体退化,失去去核标志。三、比较不同电脉冲条件,发现强度为０６３ｋｖ／ｃｍ,持续１６０μｓ的一次电脉冲可获较高移核胚的融合率（７０．８％）（Ｔａｂ．２）;并可使６１１％的成熟     

两株棉铃虫胚胎新细胞系的建立及其对杆状病毒侵染的反应

昆虫细胞系的建立在病毒学和昆虫学等领域的研究和应用中发挥着重要的作用。本研究由棉铃虫Helicoverpa armigera胚胎组织建立了两株细胞系, 分别命名为QB-Ha-E-1和QB-Ha-E-5, 在含10％胎牛血清的TNM-FH培养基中已传代60余代。两株细胞系均以圆形和短梭形细胞为主。DAF鉴定结果表明, 两株细胞系均来源于棉铃虫胚胎, 其扩增谱带与其他几种昆虫细胞系明显不同; QB-Ha-E-1和QB-Ha-E-5的第30代细胞群体倍增时间分别为63.7 h和66.9 h。两株细胞系均能被棉铃虫核型多角体病毒（HaSNPV）感染, 4 d的感染率分别为86.6％和56.5％, 对甘蓝夜蛾Mamestra brassicae核型多角体病毒（MbNPV）7 d的感染率均为15％左右, 但对苜蓿银纹夜蛾Autographa californica核型多角体病毒（AcMNPV）侵染的反应不同。DAPI染色和基因组DNA电泳结果表明, AcMNPV可诱导QB-Ha-E-5细胞发生凋亡, 极少数细胞内可形成多角体, 但不能诱导QB-Ha-E-1细胞发生凋亡, 其感染率为55.3％; 两株细胞系均可被1.25 μg/mL的放线菌素D诱导发生凋亡。两株细胞系具有相同的遗传背景, 但对AcMNPV侵染的反应不同, 可作为昆虫病毒和细胞之间相互关系以及细胞凋亡机制研究的理想材料。     

东方田鼠胚胎成纤维细胞永生化细胞系的建立

目的建立东方田鼠胚胎成纤维永生化细胞系,为全面研究东方田鼠抗日本血吸虫机制以及开展不同动物成纤维细胞间比较研究奠定基础和提供细胞实验材料。方法运用脂质体介导的基因转染法将pSV3neo质粒导入第3代东方田鼠胚胎成纤维细胞,经G418筛选抗性克隆并扩大培养,建立永生化细胞系;用PCR检测细胞株中SV40T基因的整合,RT-PCR鉴定SV40T基因在转染细胞中的表达;绘制东方田鼠胚胎成纤维永生化细胞生长曲线。结果阳性细胞克隆已扩大培养并稳定传代50代,经鉴定SV40T抗原已整合到东方田鼠胚胎成纤维细胞中且稳定表达。结论成功建立东方田鼠胚胎成纤维永生化细胞系。     

NEW CELL LINE FROM EMBRYOS OF MYTHIMNA SEPARATA (LEPIDOPTERA: NOCTUIDAE)

Abstract  A new cell line was established from 2-d-old embryonated eggs of Mythimna separata and has been designated as NEAU-Ms-927311. This cell line consists of a mixture of cell types, including spherical and spindle-shaped cells. The cell line has a population doubling time of 58. 8h. Chromosome analysis revealed its typical lepidopteran karyology. Isozyme characterization of esterase showed that the band pattern was different from that of other two cell lines (Xc-920730, and SF-21AE). Virus infectivity tests revealed this cell line can support replication of M. separata nuclear polyhedrosis virus.     

粘虫的胚胎发育

粘虫(Mythimna separata)胚胎发育经过卵裂及胚盘形成、胚带及原肠发生、胚带分节及附肢形成、体壁形成及背向闭合、胚胎反转和器官发生与形成6个时期。粘虫卵在25℃,胚胎发育至12h,胚带呈新月形或“C”字形。随着原肠发生,首先出现口陷与肛陷,与此同时,胚带逐渐伸长并开始分节。胚胎发育至32h,胚带头尾相接并呈波浪形弯曲,在胚胎反转前,胚胎发育至42h,前肠、后肠及马氏管已经形成。胚胎发育至54h时,胚动完成之 后,中肠才明显可见。同时将大量卵黄包围起来。神经系统的发生与气管形成始于原肠发生之后,至胚胎反转之前,神经节索才出现,随着胚动发生,神经节体积不断增大,腹神经索逐渐形成,纵走气管明显可见。     

早熟素Ⅱ处理粘虫蛾对两性吸引的影响

本文首次报道早熟素Ⅱ对鳞翅目重要害虫粘虫Mythimna separata Walker的作用。试验证明羽化24小时以内未交配的粘虫蛾(雌雄比为1:1)与10微克/平方厘米的早熟素接触24小时后即明显地降低两性吸引的能力;雌雄比为2:1时,处理组的交配率比对照组降低60—70%。不同的配对(正常雄×正常雌、正常雄×处理雌、正常雌×处理雄、处理雌×处理雄)证明早熟素Ⅱ对雄、雌蛾均有影响,但对雄蛾的影响更大。已知昆虫咽侧体(CA)分泌的保幼激素(JH)对某些昆虫成虫的两性吸引有调控作用(Barth,1961;1962),本文对此进行了探讨,对早熟素处理后的雌、雄蛾咽侧体逐日进行了测量,它们都比对照小,雄蛾差异更大。雄蛾CA的组织切片也表现出明显的异常:细胞核变形,染色体颗粒凝聚、出现大量空斑,腺体腔内分泌物较少等。同位素标记甲硫氨酸测定离体CA合成JH的结果表明:早熟素处理的雄蛾CA合成JH能力下降,在正常情况下出现高峰的第四天左右差异更为明显,雌蛾也有降低的趋势。     

粘虫飞行与产卵的关系

利用昆虫飞行数据微机采集系统对粘虫Mytkimna separata(W&lker)蛾飞行能力的测定结果表明：产卵前,雌蛾的飞行能力随蛾龄的增长而增加;产卵后,以产卵l天后的飞行能力最强,之后随产卵历期延长和产卵量的增加而下降。产卵超过6天或1 200粒的成虫飞行能力已基本丧失。由此认为：粘虫蛾的迁飞是在产卵前进行;成虫的飞行能力与卵巢发育同步,因而在粘虫中可能不存在卵子发生飞行拮抗症。最后对粘虫产卵后仍具有一定飞行能力的生物学意义进行了探讨。     

粘虫飞翔能源物质及其消耗

根据粘虫Mythimna separata(Walker)具有远距离迁飞能力的特性,在室内条件下,测试其长时间飞行的能源种类及消耗;试验设6h、12h、24h、36h和48h等5种吊飞处理和不 吊飞对照。结果表明,粘虫飞翔后体重显著下降,体重的减少量与吊测时间、实际飞翔时间及距离呈正相关;粘虫飞翔前后体内脂肪含量差异显著,而蛋白质含量则无明显变化;脂肪含量的下降趋势与虫体重下降一致,脂肪消耗量占体重消耗量的60%以上,说明脂肪是粘虫远距离飞行的主要能源物质。随飞翔时间的增加,脂肪消耗的速率有逐渐减缓趋势：飞行每小时每克体重消耗脂肪雌蛾为23.6→8.9mg/(h·g),雄蛾为11.8→9.2mg/(h.g);飞行每公里每克体重雌蛾消耗脂肪为4.0→1.7mg/(km·g),雄蛾为2.2→1.4mg/(km·g)。     

粘虫幼虫密度对成虫能源物质含量的影响

通过粘虫Mythimna separata幼虫密度(1头/瓶、20头/瓶、40头/瓶)对成虫水分、甘油酯和糖原含量影响的研究结果。不同幼虫密度处理的初羽化成虫水分含量无明显差异,但1～5日龄40头/瓶的雄蛾及1～3日龄雌蛾高于单头处理的;20、40头/瓶的初羽化成虫甘油酯含量没有显著的差异,但均显著地高于单头饲养的;20头/瓶羽化的雌、雄成虫l～5日龄甘油酯含量随日龄的增加而增加,到5日龄达到最大值后才开始下降,40头/瓶的在3日龄达到最大值后即开始下降,而单头饲养羽化的在1日龄达到较高值,2日龄降至最低后再缓慢回升。幼虫密度对初羽化成虫及1～7日龄雄蛾的糖原含量没有显著的影响,但20、40头/瓶条件下羽化的1～7日龄雌蛾糖原含量随日龄的增加而增加,而单头饲养的则随日龄的 增加而下降。这些结果表明幼虫密度不仅影响到初羽化成虫能源物质的含量,而且也可能影响到成虫能源物质特别是甘油酯的代谢。     

粘虫飞行对生殖及寿命的影响

该文报道了粘虫Mythimna separata（Walker）成虫飞行后产卵、交配及寿命的研究结果。1日龄成虫飞行6 h、12 h、18 h、24 h后的产卵前期均显著短于对照的,其中飞行6 h、12 h的比对照的短2天以上,产卵量均比对照的高。对1～5日龄成虫分别飞行23.5 h后的研究结果表明,1日龄飞行的产卵前期和上述结果相一致。2～4日龄飞行的与对照的没有显著差异,但产卵量则随飞行日龄的延迟而逐渐减少。5日龄飞行的产卵前期显著延长,产卵量已不到对照的一半。所有经过飞行的成虫产卵高峰日比对照的早1天。不同日龄成虫飞行时间、距离与成虫产卵量的关系为：1～3日龄飞行时间、距离长的个体产卵量也高;但4～5日龄的成虫飞行时间与距离越长,其产卵量越少,表现出明显的卵子发生飞行拮抗症(oogenesis-flight syndrome)。除了5日龄飞行的成虫交配率有所下降以外,所有经过飞行的成虫产卵历期、交配率及寿命与对照的没有显著差异。最后,根据这些结果,对粘虫迁飞的起飞时期,迁飞在粘虫生殖、种群动态及成灾规律中的作用进行了讨论。     

东方粘虫的飞翔活动和脂肪酸利用

应用GC和GC-MS分析了东方粘虫Mythimna separata(Walker)成虫脂肪体、血淋巴和飞翔肌内总脂类脂肪酸组成.它们的组成成分为肉豆蔻酸(C14:0),棕榈酸(C16:0),棕榈油酸(C16:1),硬脂酸(C18:0),油酸(C18:2),亚油酸(C18:2)和亚麻酸(C18:3);组成百分率为1-2:35:9-11:1:32:12-17:3-6.在吊飞1h后,脂肪体内的脂肪酸水平显著下降(20μg/mg组织·h~(-1),血淋巴内脂肪酸浓度明显升高,然而,飞翔肌内脂肪酸含量的变化不明显.从脂肪体、血淋巴和飞翔肌内脂肪酸组成成分的百分率变化可以发现东方粘虫飞翔肌在飞翔活动中主要选择性利用棕榈酸和油酸.     

粘虫飞行肌中与能量代谢有关的酶活性研究

该文报道粘虫Mythimna separata (Walker ) 蛹及不同日龄成虫飞行肌中与3 种代谢途径有关的5 种酶,即3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、3-磷酸甘油脱氢酶(GDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、3-羟酰辅酶A 脱氢酶(HOAD)、柠檬酸合成酶(CS)活性的变化。成虫羽化后,这5 种酶的活性大多数都高于蛹期,表明成虫飞行肌与能量代谢有关的活动比蛹期高。不同日龄成虫飞行肌的能量代谢特点为：成虫羽化后糖酵解循环的活性增加;1 日龄进行糖酵解的能力较强,2 日龄即具备较强的脂肪代谢能力,2～5日龄糖及脂肪代谢的能力基本相当,但7日龄脂肪代谢的能力较强。1～7日龄粘虫蛾飞行肌具有较高的GDH 和LDH活性,这既是粘虫蛾飞行肌能进行高度有氧代谢的重要标志,也是其具有一定无氧代谢能力的最好说明,而飞行肌中较高的CS活性则是粘虫蛾具有较强飞行能力的重要保证。对成虫GAPDH∶HOAD 活性进行分析比较的结果还显示,粘虫蛾持续飞行的能源物质既有脂类也有糖类,而不仅仅只限于脂类。     

夜蛾科新种记述(鳞翅目)

本文记述夜蛾科3新种。模式标本均保存于中国科学院动物研究所。 1.白点风夜蛾Anartomor Pha albistigma新种 翅展33—36mm,雄蛾触角线形,复眼有纤毛,头部与胸部黑褐色杂有少许白色,颈板大部红棕色,下胸褐色,足外侧大部黑褐色,有小白点,前足胫节无刺,中、后足胫节具刺;腹部黄褐色,背面大部带黑色;前翅黑褐色,前缘区、后缘区、端区及亚中褶基部有明显的红棕色,基线双线黑色,波浪形,只达1脉,线间有少许白色,内线双线黑色,波浪形,剑纹