丫—射线对酵母菌Saccharomyces cerevisiae的生理影响

1．酵母菌Saccharomyces cerevisiae 经γ-射线照射后,其存活菌数与剂量间的关系是指数曲彼;牛致死剂量(LD50)是57．6 Kr;平均致死剂量(LDB)是83.3 Kr。 2,在所用的剂量范围内(0一150kr),γ-射线剂量对对数期生长的曲线N=noekt式中的K值无影响。各种剂量处理后酵母菌的生长曲较完全或主要取决于存活的细胞数。 3．照射后二小时左右,被照射酵母菌的9％和9呱与对照酵母茵蠲漫有显著差刖。     

关于四个酵母菌种对乙醇耐受性的研究

本文报道了从存活,生长,发酵能力和氢离子渗漏等角度研究和比较四种酵母菌(Zygosaccharomyces bailii NCYC 1427,Saccharomyces cerevisiae NCYC 431,Harisenula anomala NCYC 711和 Kloeckera apiculata NCYC 468)对乙醇的耐受性。乙醇对酵母在上述特性的抑制程度,取决于乙醇的浓度。Z．Bailii NCYC 1427是四个酵母中乙醇耐受性最强的。在2M的乙醇溶液中,其存活率与无乙醇的对照组一样高。在低于1.5M的乙醇中,其生长率高于 S．Cerevisiae NCYC 431,氢离子渗入细胞的速率增长则低于 S．Cerevisiae 和 H．Anomala。S．Cerevisiae NCYC 431对于乙醇抑制生长的效应耐受性很强,在低于IM的乙醇溶液中,其发酵能力下降得较为缓慢,存活率几乎没有变化。H．Anomala NCYC 711在生长、发酵能力和氢离子渗漏方面对乙醇的抑制作用均表现敏感,但其存活率变化却与S．Cerevisiae NCYC 431很相似。K．Apiculata NCYC 468在存活、生长和发酵能力方面对乙醇的效应是四个菌种中最敏感的。研究结果还表明,乙醇对生长、发酵能力和氢离子渗漏的作用比它对存活的影响大得多。环境条件也影响酵母对乙醇的耐受性。     

在丫-射线(Co60)作用下Candida utilis 的维生素B1缺陷菌株的获得及其与原始菌株的生物学特性的比较

1．试验确定了Candida utilis的存活率随照射剂量的增加而减小,它与γ-射线(Co⁶⁰)剂量之间是成指数曲线的关系。其年致死剂量(LD₅₀)为52,200伦。 2．在获得的2,012株营养缺陷菌株中选出了31株稚生素B1的缺陷菌株,共占整个营养缺陷型的1.54％。 3．在细胞大小,菌落直径,氧的吸收以及假菌丝发达程度等方面;缺陷菌株均比原始菌株显出不同程度的差异。在生长曲线方面,缺陷菌株的对数期一般均比原始菌株有所延长。 4．在细胞色素系统方面,在整个维生素B1的缺陷菌株里,仅发现5株是缺细胞色素a的,其余的B1缺陷菌株与原始菌株溲有差别。 5．所获得的B1缺陷菌株经两年多、20—50次左右的转接保存,它们对稚生素B1需要的缺陷特性是稳定的。     

p18INK4C基因缺失增强造血干细胞在亚致死剂量

观察p18^INK4C (p18)基因缺失对造血干细胞(HSC)在亚致死剂量照射小鼠体内长期植入的影响. 供体为p18基因缺失型(p18^-/-)纯系C57BL/6小鼠(CD45.2表型), 竞争性细胞来源于C57BL/6-Ly5.1(CD45.1/2)双表型小鼠, 受体为野生型(p18^+/+)C57BL/6-Ly5.1(CD45.1)小鼠. 竞争性骨髓移植(cBMT)实验根据受体小鼠照射剂量的不同分为3个剂量组(10 Gy, 5 Gy和1 Gy). 供体细胞和竞争性细胞1:1混合后移植, 移植后采集外周血和骨髓细胞用流式细胞仪检测各细胞比例. 造血恢复移植实验: 移植后检测外周血白细胞计数评价移植后造血恢复速度. 10和5 Gy照射剂量组, 供体细胞和竞争性细胞成功植入, 而1 Gy照射剂量组无供体细胞植入. 无论在10 Gy或是5 Gy照射剂量情况下, 供体细胞在受体内的比例均高于竞争性细胞. 移植后6周, 10和5 Gy照射剂量时外周血中供体细胞比例分别为竞争性细胞的1.46±0.21倍和1.64±0.43倍, 14周时分别为竞争性细胞的1.84±0.25倍和2.00±0.49倍, 26周时分别为竞争性细胞的3.13±0.79倍和3.24±1.33倍. 移植后6个月, 10 Gy照射剂量时骨髓细胞中供体细胞比例为竞争性细胞的7.68±4.42倍, 5 Gy照射剂量时为竞争性细胞的10.83±2.98倍. 移植后6个月, 在10和5 Gy照射剂量组之间骨髓中造血细胞植入率相当, 分别为(85.53±8.71)%和(80.87±2.87)% (P = 0.457). p18^-/-细胞与p18^+/+细胞相比, 移植后造血恢复的速度相当. p18基因缺失可以显著增强HSC在亚致死剂量照射小鼠体内的长期植入能力.     

载ZnO/活性碳复合材料抗菌性能及安全性研究

废催化剂微波烧结法制备的ZnO/活性碳复合材料,在多孔活性炭表面附载有ZnO,是一种新型的环保材料。为评价其抗菌活性和使用安全性,本研究进行了材料对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌及酵母菌的抑菌试验,结果表明ZnO/活性碳复合材料有很好的抑制细菌增殖效果,低浓度下(0.1μg/mL)作用2h的抑菌率能达到90%以上,对真菌-酵母菌的抑制活性相对较低;经细胞毒性试验、动物口服急性毒性试验,皮肤过敏性试验发现,材料对小鼠经口灌喂半致死剂量(LD50)2000mg/kg,对兔皮肤刺激性积分为0,对细胞生长无影响,属于实际生物无毒级。试验结果表明ZnO/活性碳复合材料具有很好的抗菌效果及使用安全性。     

温度对谷胱甘肽分批发酵的影响及动力学模型

研究了24～32℃范围内产朊假丝酵母生产谷胱甘肽的分批发酵过程,发现较高温度对细胞生长有促进作用,而较低温度则更有利于谷胱甘肽产量的提高。应用改进的Logistic和LuedekingPiret方程分别对细胞生长动力学和谷胱甘肽合成动力学进行了模拟,得到不同温度下各种动力学参数。在此基础上,进一步研究了温度同细胞生长动力学参数之间的内在联系,得到谷胱甘肽分批发酵过程中细胞浓度的变化同温度以及底物浓度之间的一般关系式：dX-dt＝［0.0224(T+1.7)］2X(1-X/X_max)1+S｛8.26×10.6×exp［-31477/R/(T+273)］｝。验证实验结果表明,该模型具有很好的适用性。     

不同理化因子对雪莲培养细胞中黄酮类形成的影响

研究了不同理化因子对水母雪莲(Saussurea medusa Maxim)愈伤组织生长及黄酮类化合物生物合成的影响。结果表明,有利于细胞生长及黄酮形成的合适温度为25℃。白光对愈伤组织生长无促进作用,但有利于黄酮的形成。培养基中添加1mg／L NAA和O．2mg／L的KT组合对细胞的生长较有促进作用。5％蔗糖和1％葡萄糖的组合有利于细胞的生长和黄酮的形成。用⁶⁰C0-γ射线辐照愈伤组织,在剂量为4000Gy的条件下,获得一个合成黄酮能力高于原愈伤组织70％的细胞系。用高效液相和紫外分光光度法,测定离体培养光照条件下干细胞总黄酮的含量为3．2％,是暗培养的4．4倍。培养温度25℃时干细胞黄酮的含量为2．02％,分别为20℃,35℃时的5倍和3．2倍。     

丰产鲫细菌性败血症病原CSS-4-2的生长特性

对患败血症的丰产鲫 (Carassiusauratusofpenze (♀ )×Cyprinusacutidorsalis(♂ ) )脾脏中分离到的病原菌—豚鼠气单胞菌 (Aeromonascaviae)CSS-4-2菌株的生长特性进行了研究。CSS-4-2在胰蛋白胨液体培养基中振荡培养时 ,0～ 3h为延迟期 ,3～ 30h为对数生长期 ,30～ 36h为稳定期 ,36h后为裒亡期 ;其最适生长温度为 2 5℃～ 30℃ ,最适pH值为 5～10 ,最适培养液N     

低剂量率下高线性能量转移碳离子束辐照人类唾液腺细胞的存活效应

利用日本千叶重离子医用加速器 HIMAC 提供的碳离子束,对人类唾液腺细胞 (HSG) 在剂量率为 0.5 Gy/h 的低剂量率条件下进行了辐照,运用标准的克隆形成法得到了 3 种不同剂量平均线性能量转移 (LET) 碳离子束辐照 HSG 细胞的剂量存活效应 . 与先前 HSG 细胞在治癌剂量率 (1~5 Gy/min) 下对相近剂量平均 LET 碳离子束辐照的剂量存活效应数据相比, HSG 细胞对高 LET 碳离子束辐射表现出明显的剂量率效应 . 为在相同条件下得到碳离子束对 HSG 细胞的相对生物学效应 (RBE) ,利用 60Co-γ射线在剂量率为 0.5 Gy/h 的条件下辐照了 HSG 细胞,得到该细胞系对低 LET 射线响应的剂量存活效应 . 与先前在治癌剂量率下得到的 RBE 值相比,低剂量率条件下得到的 RBE 值总体减小 . 由实验发现的剂量率效应及低剂量率条件下 RBE 值的减小,表明由高 LET 碳离子束造成的辐射损伤在低剂量率条件下也存在着显著的修复效应 . 据此,对辐射造成细胞致死的原因进行了探讨 .     

枯草芽孢杆菌bgls基因在酵母染色体上整合

将枯草杆菌β－1,3—1,4－葡聚糖酶基因(bgls)2．7kbEcoRl片段和酵母染色体Rdna片段克隆到整合型不含酵母自主复制序列(Autonomusly replicating sequence)的大肠杆菌／酵母菌穿梭质粒YIP5上,构建成YIP5-bgls—Rdna的杂种质粒PCZH,转化S．Cerevisiae并得到表达。稳定性测定表明．Y 33(PCZH101)和Y 33(PCZH104)在无选择压力的YEPD培养基中繁殖70代以上,两个转化子90％以上的酵母细胞仍含有质粒并且遗传特征与染色体行为相似。以bgls基因作探针;与酵母染色体DNA的Southern bloot分子杂交证实bgls基因已整合到酵母菌染色体上。     

紫外线和60Coγ射线对钝顶节旋藻(Arthrospira platensis)的诱变效应

将对数期的钝顶节旋藻(Arthrospira platensis)(原名钝顶螺旋藻,Spirulina platensis)A9菌株用超声波40 s预处理破碎成2个~4个细胞大小的片断,分别用不同剂量的紫外线(UV)和60Coγ射线处理,诱变后经3小时避光预培养分别接种于液体和固体培养基进行培养。固体培养时UV照射70 s和60Coγ照射3 500 Gy后无菌体存活,而在液体培养中高剂量处理的样品可以部分恢复生长。将诱变后的菌液分别加入20μg.mL-1的ρ-氟苯丙氨酸(-ρfluorophenylalan ine,FPA)和20μg.mL-1的刀豆氨酸(L-canavan ine su lphate,CS),放入光照培养箱中预培养3 d~4 d后涂于含相同浓度的氨基酸类似物FPA和CS平板,培养30 d后计算抗氨基酸类似物突变株的突变率。UV对A9菌株的完全致死剂量LD和存活率37%时的剂量D37值分别为70 s和22 s,LD/D37=3.18。A9菌株经UV诱变25 s时存活率为28.7%,抗FPA和抗CS突变率分别为2.31×10-3和1.50×10-3,最大诱变效应比(MME)分别为48.53和52.63。60Coγ射线对A9菌株的LD和D37值分别为3 500 Gy、1 250 Gy,LD/D37=2.8。60Coγ射线显著提高A9菌株的突变率,当诱变剂量为2 000 Gy、存活率为10.49%时A9菌株突变率最高,抗FPA和抗CS突变率分别为5.07×10-3和0.964×10-3,最大诱变效应比(MME)分别为241.43和74.15。60Coγ射线对钝顶节旋藻A9菌株的损伤比UV造成的损伤强烈(低的LD/D37值),比UV具有较大的诱变效应(高MME值)。采用两种诱变剂获得的抗FPA突变率都要高于抗CS突变率。通过诱变获得了大量的抗氨基酸类似物突变株,为遗传重组研究提供携带重要遗传标记的材料。     

PER1对人肝癌细胞BEL-7402辐射敏感性的影响

本文通过X射线照射SMMC-7721、BEL-7402和HepG2三种肝癌细胞后,以克隆形成试验检测其存活分数,结果显示在梯度剂量X射线0、2、4、6、8、10 Gy照射下SMMC-7721、BEL-7402、HepG2三种细胞克隆存活分数逐渐下降,其中SMMC-7721在三种肝癌细胞系中对辐射最敏感,BEL-7402辐射抗性在三种肝癌细胞系中最高。Western blot检测发现PER1在SMMC-7721中的表达水平明显显著高于BEL-7402和HepG2(P<0.05)。过表达PER1蛋白以后,BEL-7402接受5 Gy X射线照射后凋亡明显增多,同时,western blot和RT-qPCR试验结果发现,X射线照射过表达PER1的BEL-7402细胞,抗凋亡蛋白Bcl-2表达明显降低,凋亡执行蛋白Caspase-3断裂明显增多。研究结果表明PER1蛋白的高水平表达可以促进X射线诱导的凋亡,增强肝癌细胞的辐射敏感性。     

γ射线对副溶血性弧菌辐射效应的PCR检测

目的:研究γ射线对副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)的辐射效应。方法:采用0kGy~7.0kGy内不同剂量的60Co-γ对浓度为2.0×108CFU/mL的副溶血性弧菌进行辐射,通过菌落计数计算该菌的致死率与存活率,并采用菌液PCR和常规PCR间接检测DNA浓度研究其致死效应。结果:菌落计数表明,在0kGy~3.0kGy内,该菌致死率随辐射剂量增加而呈线性增长;3.0kGy以上可全部杀灭试验浓度的副溶血性弧菌。常规PCR和菌液PCR结果表明,PCR扩增条带亮度都随着辐射剂量的增大而增强。常规PCR中,辐射剂量3.0kGy以上,电泳条带的亮度明显增加。结论:γ射线辐射剂量与存活副溶血性弧菌数、DNA的释放量都有明显的剂量-反应关系,辐射致死的主要原因是由射线对菌体细胞膜造成损伤、DNA外流造成的。     

宋内I相抗原和霍乱CT—B共表达的免疫保护效果观察

将编码宋内氏痢疾菌(Shigella sonnei)l相O抗原的基因和霍乱弧菌(Vibrio cholerae)的CT—B基因克隆至带asd基因的质粒PYA248．得重组质粒PMGLl05。将该重组质粒转入asd基因缺失的减毒伤寒沙门氏茵X4072．构成了一个不带抗药性基因的载体-宿主平衡致死景统。一系列实验表明．该重组苗X4072(PMGLl05)能稳定地表达宋内I相O抗原和霍乱弧菌的CT-B抗原．小鼠免疫保护实验表明,该重组菌对有毒的宋内氏I相痢疾杆菌及霍乱弧菌的攻击均具有良好保护作用。     

~(60)Co-γ射线辐照对豇豆M1代生长发育的影响

用~(60)Co-γ射线对3个豇豆品种(天畅9号、詹豇215、早生王)干种子进行200 Gy、400 Gy、~(60)0 Gy、800 Gy和1 000 Gy辐照处理,研究不同剂量对豇豆M1代生长发育的影响。结果表明:低剂量下效应不明显,高剂量对生育进程有延后和抑制作用,发芽势、发芽率、出苗率、生长速率及叶绿素含量下降,叶片变小,分枝数、有效花梗数、结荚数减少;豇豆不同品种对γ射线敏感性不同,天畅9号、詹豇215、早生王的半致死剂量分别为234 Gy、490 Gy、553 Gy。     

放射线处理种子对生长发育的影响研究(初步报告)

1.用X射线及Co~(60)照射种子以及用放射性同位素P~(32)浸种处理后,或仅作发芽观察,或盆栽或进行田间试验,以观察外照射和内照射对植物生长发育的影响。2.X 射线照射种子对发芽的影响不大但使发芽延迟。受高剂量照射的种子虽能发芽,不能继续生长真叶和新梢,根的发育亦受抑制。3.高剂量射线照射种子,显著的抑制生长发育,多半在2万伦琴左右起始。在有些植物中,1千伦琴左右的剂量有促进生长的表现。在另一些植物中,更高一些的剂量也出现生长优势。但一般的说,促进作用不十分明显。在有些重复试验中,其高峯不重迭在一点上。但可以说,低剂量的处理是无害的,且有促进生长发育的可能性。4.在用种子进行照射时,萝卜、白菜、菠菜、向日葵、玉米、蓖麻等对 X 射线的抵抗力较大,而大豆等的抵抗力较低。5.P~(32)浸种的结果,处理之间差异不显著。玉米和大豆经700以及无青甘蓝经衽500微居里/公斤种子的 P~(32)浸种处理,均无抑制生长。     

纱布固定丛粒藻细胞产烃的研究

用纱布作固相载体,研究了富含烃的群生绿藻——丛粒藻(Botryococcus braunii Kutz.)细胞的直接吸附。结果表明,纱布是固定化这类细胞维持生长(生物量)和光合话性(释放O2)的良好的新载体。固定在纱布上的B. braunii 细胞产烃速度比得上游离细胞。它们产生榴同的烃类,主要是c广c,．的奇碳数的二烯同系物。在气升式培养条件下,主要施外烃的分布不受固定化的影响。在光照摇床上培养H天,固定在纱布上的B. braunii 的O2释放量、生物量和产烃量分别为1．84μmol／min／L、1.44g／L和0.82g／L,与游离细胞的相似。扫描电镜的观察指出,固定化的丛粒藻细胞附着在纱稚的表面;在观察期间,其形态与游离细胞的相似。     

X射线对小白鼠雄性生殖细胞的作用

1.以400伦X射线全身照射昆明种雄性小白鼠,照射后隔1、3、6、12、24小时分别将动物杀死,以Dietrich-Parat法固定其睾丸。制成石蜡切片。观察第Ⅱ、Ⅳ、Ⅵ、Ⅻ期精小管横切面中各类细胞数量的变化。 2.X射线照射后,小白鼠雄性生殖细胞中出现各种坏死及异常细胞,按其性质可大致分为四类:细胞坏死、染色体畸变、异常分裂、巨细胞。类似的坏死及异常细胞在正常睾丸中几乎都能发现,但频率低得多。 3.根据细胞数量、细胞分裂周期各类细胞和细胞坏死频率的变化,可以把X射线对精原细胞的早期(24小时内的)效应大致分为三个阶段:原发效应期、恢复期和转折期。 4.精原细胞数量的减少主要由于细胞死亡。它们的辐射致死和细胞分裂周期有一定的关系。然而,当分裂抑制解除时,精原细胞可以在细胞分裂周期的各个时期中死亡。 5.X射线照射后1小时,三种精原细胞都出现了分裂延滞的现象,但对中-后期细胞分裂有一定的促进作用。实验结果表明X射线对精原细胞有丝分裂的抑制是可逆的。抑制的时期可能是在间-前期之间和分裂之前(前期)两个时期。这两个时期与细胞有丝分裂周期中的“不可逆点”(Point of no return)相符。 6.X射线对减数分裂前期细胞及精细胞的数量和显微结构影响不大,但大大地减少减数分裂中-后期正常细胞的数量     

表达幽门螺杆菌黏附素保守区的减毒鼠伤寒沙门氏菌株的构建

为构建表达幽门螺杆菌（Hp）黏附素保守区（AB）的无抗性减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗,采用缺失腺苷酸环化酶基因（Δcya）、环腺苷酸受体蛋白基因（Δcrp）以及天冬氨酸β-半醛脱氢酶基因（Δasd）的鼠伤寒沙门菌（X4072）作为宿主,将编码AB的基因插入Asd⁺的组成型表达载体pYA248,通过两次转化引入宿主菌,构建了表达AB基因平衡致死的减毒鼠伤寒沙门重组菌X4072（pYA248-AB）,采用桥联法ELISA测定X4072（pYA248-AB）培养上清液和裂解上清液中AB的抗原性,参照Meacock叙述的方法及重组菌生长曲线的测定来确定重组菌株的稳定性,通过C57BL/6小鼠口服测定半致死量来确定重组菌的安全性。成功构建了表达AB的减毒鼠伤寒沙门菌重组菌株S.typhimurium X4072(pYA248-AB),桥联法ELISA测定表明重组菌X4072（pYA248-AB）培养上清中AB的含量高于菌体裂解液,重组菌pYA248-AB在没有选择压力的情况下培养100代,随机挑选的重组菌全部都能生长,且在ELISA测定AB抗原时均显阳性。重组菌的生长曲线测定表明,X4072（pYA248）和X4072（pYA248-AB）的生长状态基本一致;口服重组菌株X4072(pYA248-AB)1.0×10¹⁰cfu.30d后,C57BL/6存活率仍为100%。成功构建了表达AB的无抗性的减毒鼠伤寒沙门菌疫苗X4072（pYA248-AB）,体外实验表明重组质粒是稳定的,动物实验证明重组菌株是安全的;为防治幽门螺杆菌感染提供了口服活菌疫苗候选株。     

微囊化K562细胞生长周期及代谢特性的研究

以K562细胞为模型,分别进行微囊化和游离培养,运用流式细胞术考察两种培养体系下细胞周期和生长代谢变化;建立数学模型,模拟了两种培养体系下细胞的生长活性和代谢特性。实验发现：微囊化培养过程中的K562细胞处于DNA合成期（S期）的百分含量显著高于游离培养,并且细胞保持较高的增殖活性。模型计算表明,所建模型动力学参数能够很好地描述微囊化和游离两种培养体系下细胞的代谢情况;对细胞活性的理论计算表明,微囊化的细胞具有较高的增殖和代谢活性,同时细胞能够较长时间保持此活性;模型参数表明,两种培养体系下,葡萄糖对细胞生长的影响无显著差别 (k^Free_L≈k^APA_L),乳酸对游离培养细胞的生长具有明显抑制作用,但对微囊化培养细胞抑制作用较小(kFreeL>≈kAPAL)。