从金霉素链霉菌38选育产去甲基金霉素的突变株

用紫外线和乙烯亚胺处理四环素生产菌株金霉素链霉菌(Streptomyces aureofaciens)38的孢子,从棕红色的突变菌落中得到三株突变株：金霉素链霉菌38—2、38—14和38—42。在沉没培养条件下,于产生金霉素的同时,它们都能产生一定量的去甲基金霉素。该菌株经诱变因子处理后,能提高棕红色变异菌落的出现率。本实验的结果表明用紫外线照射,棕红色突变菌落的出现率比用乙烯亚胺处理的显著提高。     

产去甲基金霉素突变株的选育II．金霉素链霉菌635突变株的选育

金霉素链霉菌(Streptomyces aureofaciens)38-2-14突变株叫,用紫外线处理和紫外线及异氰酸苯酯复合处理,以菌落产生赤褐色色素,作为挑选高产去甲基金霉素和去甲基四环素突变株的指标,选出金霉素链霉菌635突变株。在改变种子养培基成份的基础上,缩短了母瓶种子培养时间,去甲基金霉素和去甲基四环素的摇瓶单位达2925徽克／毫升,为今后工业生产创造了条件。     

产去甲基金霉素突变株的选育I．金霉素链霉菌38-2-14突变株的获得

作为合成二甲胺基四环素的原料——去甲基金霉素(去甲基四环素),可以通过发酵途径制备。出发菌株Sir．…eofaciens 38—2在产生去甲基金霉素的同时,还产生大量的金霉素。以Str. Aureofaciens 38-2作为出发菌株,采用紫外线、乙烯亚胺及二者复合等诱变处理,根据菌株在固体培养基中菌丝体呈赤褐色,并有可溶性色素分泌的特征,挑选出54株变株,在紫外线的处理中,得到了一株颜色突变株,编号为38-2-14。经过纸谱层析、生物显影及紫外线吸收光谱等测定,证明系一株仅产生去甲基金霉素和去甲基四环素,而不产生金霉素的菌株,在用培养基(2)时,摇瓶培养96小时的生物效价测定,发酵单位为1075微克／毫升。     

去甲基金霉素发酵的研究

我们在1971年用紫外光照射处理金霉素链霉菌(Streptomyces aureotaciens)38,获得颜色变株38-2,经鉴别证明此菌株除产生金霉素和四环素外,还产生去甲基金霉素。 同年开始进行去甲基金霉素试制研究,由38-2菌株的原始发酵单位100—150单位/毫升出发,通过一     

一个鼻咽癌家系中存在COX7B2基因的低频变异

在中国南方鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma, NPC)高发地区, 遗传易感性在鼻咽癌发病中起重要作用, 在4p11-4p14区域存在一个鼻咽癌易感位点. 采用PCR-直接测序法对位于该区域内的细胞色素C氧化酶亚单位Ⅶb2 (COX7B2)基因进行单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism, SNP)筛查, 对发现的变异在家系患者、散发病例和正常人群中进行分型分析, 探讨COX7B2基因变异是否与鼻咽癌有关. 在COX7B2基因中共发现5个新的SNP位点, 分别位于上游启动子区(−158101G>T和−157322G>A)、第2内含子区域(−109602A>G)、第3外显子区(78T>A)和3′-非翻译区(354T>A). 位于第3外显子编码区的78T>A变异导致CAT26CAA (His26Gln)改变, 在31号鼻咽癌家系中与患者易感单体连锁, 但不存在于其他家系患者和散发病人中. 在广东地区和华东地区对照个体中78T>A变异的频率分别为0.45%(2/448)和0.26%(1/384), 在白人、黑人样本中没有发现该变异. 蛋白质序列比对显示COX7B2亚基26His位点在人、大猩猩、黑猩猩、长臂猿、大鼠和小鼠中十分保守. 上述结果提示COX7B2基因26His是一个保守的位点, 低频的His26Gln变异可能与31号家系的鼻咽癌高发有关.     

SKW6细胞在转导6A8 α-甘露糖苷酶反义cDNA后对抗Fas抗体诱导的凋亡

鉴于蛋白质糖基化的重要生物学意义,以腺相关病毒为载体,把编码6A8 α-甘露糖苷酶的cDNA 3′端1358 bp的反向片段转导入EB病毒转化的B细胞株SKW6,探讨6A8 α-甘露糖苷酶表达抑制对抗Fas抗体诱导凋亡的影响.反义6A8转导成功及表达用Northern杂交及RT-PCR检测,6A8 α-甘露糖苷酶表达用Con A结合试验检测.Giemsa染色,AnnexinⅤ染色及梯形DNA电泳显示,Fas抗体能诱导SKW6细胞凋亡,但6A8 α-甘露糖苷酶表达抑制的细胞对Fas抗体诱导的凋亡发生抵抗,而转导正义6A8或空载载体则无影响.6A8 α-甘露糖苷酶表达状况对SKW6细胞表面Fas分子表达没有影响.     

四环素生产菌抗噬西体面株的选育

从四环素生产菌金霉素链霉菌(Streptomyces aureofaciens) 849号菌株的不正常发酵液中分离出了噬菌体。这些噬菌体为蝌蚪形,对金霉素链霉菌具有专一性,并且裂解能力很强,命名为HF噬菌体。用N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍诱变井结合噬菌体处理的方法,获得了一批抗噬菌体的金霉素链霉菌菌株,其中的一些菌株生产四环紊的能力不低于原来的敏感菌株,已用于生产。     

pBR322-Red在大肠杆菌lac操纵子基因敲除和敲入中的应用

pBR32 2 - Red是一种新型重组工程系统 ,它携带了λ-噬菌体Red重组酶基因和一系列调控元件。对pBR32 2 Red最优重组条件进行探索后应用该质粒提供的体内同源重组功能 ,在菌株W3110体内 ,对染色体上的lac操纵子进行了基因修饰 ,包括 :①运用kan-sacB选择反选择方法和重叠引物方法敲除了阻遏基因lacI,②运用kan -sacB选择反选择方法和线性双链DNA介导的DNA重组方法将报告基因lacZ敲入lacA和lacY的位置 ,并且首次测定了报告基因lacZ在这三个结构基因位置的组成性表达情况。结果表明运用不同的重组策略 ,pBR32 2- Red系统都能方便有效地对大肠杆菌W3110染色体进行基因敲除和敲入修饰。     

一些芽孢杆菌噬菌体的形态和结构

通过电镜观察描述了生产中三株芽孢杆菌(B.subilis BF7658,B.subsilis AS 1.398和B licheniformis 2709)的噬菌体的形态和结构。它们的形态和大小多种多样。根据修正的Ackermaun和Eisenstark的形态分类法,它们包括了噬菌体分类中3个科(肌尾噬菌体科、长尾噬菌体科和短尾噬菌体科)以及9种有尾噬菌体中的4种形态型(即A1,B1,B2和c2型),并对其形态进行了讨论。     

类大麦属高分子量谷蛋白基因Kx的序列测定及表达

利用SDS_PAGE检测了2份类大麦属(Crithopsisdelileana)材料的高分子量谷蛋白亚基组成,并对其中1份材料的x型亚基进行了克隆和测序。结果表明,2份材料具有完全相同的蛋白电泳图谱。在小麦的高分子量区域仅检测到一条蛋白质带,与小麦y型亚基的迁移率接近,但克隆测序表明其为x型高分子量谷蛋白亚基,其编码基因命名为Kx。Kx基因编码区序列长度为2 0 5 2bp ,编码长度为6 6 1个氨基酸残基的蛋白质,其序列具有典型的x型高分子量谷蛋白亚基的特征。Kx基因能在原核表达系统内正确表达,其表达蛋白与来源于种子中的Kx亚基的迁移率完全一致。Kx亚基与小麦属A、B和D ,山羊草属C和U以及黑麦属R染色体组编码的高分子量谷蛋白亚基氨基酸序列非常相似,但在N和C保守区的氨基酸组成以及重复区长度上与它们存在明显差异。聚类分析可将Kx与Ax1聚类为平行的分支。由此可见,来源于C .delileana的Kx基因为一新的x型高分子量谷蛋白亚基基因。     

苏氨酸操纵子的克隆与诱变

本文报道用Hind I+BamHI双酶切方法,从大肠杆菌K12的野生型菌株染色体上克隆苏氮酸操纵子的三个基因(thr A,thr B和thr C)到载体pBR322上,在合成培养基上筛选带thr操纵子的转化子。所得杂种质粒pTH1经羟胺体外诱变,筛选得到抗氨基酸类似物a-氧基-β-羟基戊酸(AHV)的突变质粒pTH2和pTH3,在宿主大肠杆菌C600中产苏氨酸最比初级克隆株高20倍以上,在解除天冬氨酸激酶—高丝氨酸脱氢酶(AKI—HDI)反馈抑制的宿主大肠杆菌A56—121中产苏氨酸量可达11g／L,比初级克隆株大肠杆菌 c600(pTHl)高100倍以上。     

维生素B12对大腸杆菌β-半乳糖苷酶合成的作用

(一)大腸杆菌Escherichia coli K12M-1 的营养试验及细菌细胞内游离氨基酸变化的分析,确定为稚生素B12缺陷型变种。 (二)在诱导形成β-牛乳糖苷酶时,甲硫氨酸为其必需的物质,如果同时加入B₁₂,则形成诱导酶的活力显著提高。 (三)当有甲硫氨酸存在于诱导系兢中时,a-硫代尿嘧啶有抑制大腸杆菌K12M-1菌株对β-半乳糖苷酶合成的作用,以B12代替甲硫氨酸,这种抑制作用不明显,如果甲硫氨酸与B12同时加入,则B₁₂有抵制a-硫代尿嘧啶对酶合成的抑制作用。 (四)应用标记甘氨酸-1-C14作试验,分析甲硫氨酸与B12对β一半乳糖苷酶合成的作用, 结果指出,甲硫氨酸或B12均能增加甘氨酸-1-C14的参入。如B12加入到含有甲硫氧酸的诱导系统中,则酶此活力较甲硫氨酸或B12单独存在时为高。     

中国石蕊属地衣的地理学分析

将中国92种石蕊属地衣划分为8个地理成分：广布成分19种,占总种数的21％,环北极成分32种（35％）,泛热带成分8种（9％）,欧亚成分5种（5％）,东亚-北美成分7种（8％）,东亚成分13种（14％）,中国喜马拉雅成分1种（1％）,中国特有成分7种（7％）。对中国石蕊属地衣所属的主要地理成分的形成进行了初步讨论,提出东亚特有种云南石蕊（Cladoniayunnana）和北美特有种拟胀石蕊（C.transcendens）为一对地理替代种;比蒙氏石蕊（C．Beaumontii）,圆筒石蕊（C.cylindrica）,丛杯石蕊（C.mateocyatha）和大翅石蕊（C.macroptera）等4种为东亚-北美间断分布种。指出中国喜马拉雅成分戴氏石蕊（C.delavayi）及欧亚成分中的细枝石蕊（C.corymbescens）在中国分布的北界是秦岭山脉。     

籼稻半矮秆基因sd-t(t)的遗传定位及定位区间物理距离的估计

矮秆和半矮秆基因的利用及作用机制一直是作物育种和分子遗传研究的重要内容. sd-t(t)是从籼稻矮秆材料矮泰引-2中发现的一个与sd-1不等位的新半矮秆基因.利用由矮泰引-2与无叶舌标志基因系B30杂交产生的包含474个单株的F₂群体, 将sd-t(t)基因定位在水稻第4染色体上RFLP标记R514和R1408B之间, 距R514和 R1408B的遗传距离分别为1.1和4.5 cM. 利用水稻品系IRBB56 的BAC文库构建了sd-t(t)位点的跨叠克隆群, 并确定 R514与R1408B之间的物理距离大约为147 kb, 为进一步克隆sd-t(t)基因奠定了基础.     

几株丛粒藻烃类的气相色谱—质谱分析

用气相色谱-质谱分析定性鉴定了三株不同来源的丛粒藻(Botryococcus braunii)产生的烃类组分。丛粒藻株A(USA)和B(Germany)产生以C_nH_(2n-2)和C_nH_(2n-4)为主的烯基直链烃,丛粒藻C得自我国云南省抚仙湖,产生以丛粒藻烯和异丛粒藻烯为主的多分枝烃。讨论了不同丛粒藻产生不同烃类的原因。     

阿维链霉菌中aveD基因阻断对阿维菌素合成的影响

利用用于基因破坏的重组质粒pCZ2 (pKC1 1 39∷ 475bpaveD)对阿维菌素 (Avermectin)产生菌阿维链霉菌 (Streptomycesavermitilis) 76- 9的aveD基因进行插入失活 ,将获得的aveD破坏子进行摇瓶发酵和阿维菌素初步提取和HPLC检测 ,发现破坏子仅产生四个主要组分 ,但它们的保留时间分别比Bla、Blb、B2a和B2b的略长。进而将粗提液纯化并获得晶体 ,以UV、IR、NMR ( 1H NMR和13C NMR)和MS进行结构分析 ,并结合HPLC检验 ,证明它们属于C5 氧 阿维菌素B。说明阿维链霉菌的aveD基因破坏 ,不仅丧失了合成阿维菌素A组分的能力 ,也造成了其下游的aveF基因不能表达 ,因此只产生了C5 氧 阿维菌素B。     

甘油脱水酶再激活因子的克隆表达及活性鉴定

运用PCR技术从克雷伯氏菌的基因组中分别扩增得到了编码甘油脱水酶再激活酶α、β两个亚基的基因gdrA、gdrB。将gdrA、gdrB克隆至Pmd-18T载体上,构建克隆载体Pmd-gdrAB。经测序正确后,将gdrAB亚克隆至表达载体Pet-28a(+)上构建表达质粒Pet-28gdrAB。利用双抗生素筛选法,将Pet-28gdrAB与连有甘油脱水酶基因的表达载体Pet-32gldABC在大肠杆菌菌株BL21(DE3)中共表达,鉴定了甘油脱水酶再激活酶的活性。     

乙酸菌糖磷酸化作用的研究

对7种乙酸菌(Acetitomaculum ruminis, Acetobacterium woodii, Eubacterium limosum和分离株A2、A4、A10、H3HH)的葡萄糖和2脱氧葡萄糖磷酸化作用进行了研究。尽管所有机体都存在磷酸化反应,但它们在依赖PEP和ATP的比例上有实质性区别。分离菌株A10具有最高的依赖PEP的葡萄糖磷酸化活力(1162nmol·L-1·mg-1·min-1),A10、H3HH和E.limosum都具有葡萄糖磷酸转移酶系统(phosphotransferase systemPTS)。相反,Ａ.ruminis、A.woodii、A2和A4则不具有PTS活力。这七株菌的葡萄糖依赖ATP的磷酸化活力都高于依赖PEP的磷酸化活力,但其程度有所不同。A10和H3HH的葡萄糖PTS可通过胞外葡萄糖诱导,并且其比活在对数期随培养时间延长而增加。此外,还检测到A10和H3HH对麦芽糖和果糖的依赖ATP和PEP的磷酸化活力。     

啤酒酵母对杀假丝菌素抗性的遗传分析

杀假丝菌素(Candicidin)在0．8μ／ml的YEPG平板上能完全抑制呻酒酵母(Saechar-mycescerevisiae) H802-1B (a,lys2)及H802-5D(a,ade,ural)的生长。将H802-1B涂布在含有5—70μg／ml的抗生素平板上分离得到抗性突变体。第一次突变体的最高抗性水平是50μg／ml,从5—50μg／ml 抗生素平板上共获得39株自发突变株,第二次抗性突变株是将第一次突变体涂布在更高浓度(70—90μg／ml)的抗生素平板上分离到的。部分抗性突变株(70μg／ml和90μg／ml)与亲株H802-5D交配,测其分离子的抗性,所有杂合二倍体表现：抗性：敏感性为2：2分离现象。H1121-1A(a,lys2,CADR9)XH113-8A(a, ural,CADR30)的杂种抗性分离行为：PD(17个子囊),NPD(2个子囊)T(4个子囊)口遗传分析证明,实验用的抗性突变体有两个显性抗性基因CADHr30和CADR90．     

金霉素链霉菌的诱变育种

从金霉素链霉菌(Streptomyces aureofaciens)重组体2U一84经紫外线处理得到A3-32突变株,产量比2U一84提高10．6％以上。A3—32突变株又经紫外线处理,得到一株分泌金黄色色素的突变株5一43,产量为A3-32的60—70％。而5一43突变株经不同诱变因素：紫外线、乙烯亚胺及氮芥处理,均得到色素形成能力消失的突变株,这些菌株的产量均比5—43高,提高的幅度也较大。其中紫外线处理得到的u一42突变株比5—43突变株提高78％,比重组体2u 8{提高21．5％。色素形成能力愈小者,其产量愈高,这说明产量与色素之间存在着一定的相关性。由弱孢子型6—15突变株经乙烯亚胺与紫外线复合处理,得到孢子丰富,产量明显提高的EU-63突变株,比重组体2U一84提高49．6％。