RNA干涉及其在抗病毒感染中的应用前景

1998年,Fire等[1]在研究控制线虫的基因表达方法时,意外地发现由正义和反义RNA退火形成的双链RNA(double-stranded RNA,ds RNA)引起的基因表达的抑制程度远远高于单独应用正义或反义RNA.     

反义RNA技术

反义RNA(antisence RNA)是一种与特异mRNA互补的RNA分子,它通过配对碱基间氢键作用与对应的RNA形成双链复合物,抑制RNA的翻译过程。利用人工合成或生物体合成特定互补RNA片段(或其化学修辞产物)抑制或封闭基因表达技术,称为反义RNA技术。本文综述了反义RNA作用机理,合成途径,并展示了该技术在研究基因功能,防治肿瘤、遗传病以及人工免疫等方面广阔的应用前景。一、反义RNA抑制基因表达机理许多实验证明,原核类生物如细菌、粘菌,     

反义RNA生物工程与防治病毒性疾病的新途径

反义RNA(antisense RNA)的同义词为干扰mRNA的互补RNA(mRNA-interfering Complemeatary RNA)简称mic RNA。反义RNA与某mRNA(正义RNA)精确互补,它能在转译水平上特异性地阻断某mRNA合成蛋白质。 反义RNA首先在自然界的细菌中被发现。Mizuno等在研究大肠杆菌外膜蛋白Omp C基因时,发现该基因是双向转录的,在Omp C基因上游逆向转录174个碱基的mic F-RNA,其中有一段序列与Omp     

反义RNA 技术在花色育种中的应用

反义RNA技术是用反义RNA链去抑制靶基因的活性, 从而达到对目的基因调控的一项分子生物学技术。该项技术应用于观赏植物的花色育种已有16年的历史并且取得了一定的成就。到目前为止, 已经利用该技术对14种花卉花色形成过程中的3大类基因进行了正义和反义导入, 获得了花色改变的转基因植株。本文简要回顾了反义RNA技术的产生与发展, 并在介绍花色形成的分子生物学的基础上, 综述 了国际园艺育种中利用反义RNA技术调控花色基因表达的研究进展, 以期为花色改良的分子育种提供参考资料。     

反义RNA技术在花色育种中的应用

反义RNA技术是用反义RNA链去抑制靶基因的活性,从而达到对目的基因调控的一项分子生物学技术.该项技术应用于观赏植物的花色育种已有16年的历史并且取得了一定的成就.到目前为止,已经利用该技术对14种花卉花色形成过程中的3大类基因进行了正义和反义导入,获得了花色改变的转基因植株.本文简要回顾了反义RNA技术的产生与发展,并在介绍花色形成的分子生物学的基础上,综述了国际园艺育种中利用反义RNA技术调控花色基因表达的研究进展,以期为花色改良的分子育种提供参考资料.     

苹果α-法尼烯合成酶基因双链RNAi载体的构建

RNA干扰属于转录后后基因基因沉默机制(PTGS),是一种新型的基因沉默手段,用于基因表达和功能的研究。以成熟苹果的果皮RNA为模板,经RT-PCR扩增并克隆α-Farnesene合成酶基因(AFS),设计特异引物从AFS基因中扩增515bp和396bp的反义和正义基因片段,将正义和反义基因片段串联,把构成的长为911bp的DNA插到PBI121表达载体中,构建成可表达α-Farnesene合成酶双链RNA载体PBI-AFS。     

《反义RNA和DNA》

《反义RNA和DNA》(Antisense RNA and DNA)由James A.H.Murray编著,1992年 Wiley-Liss出版社出版,401页。反义RNA和DNA是对基因活动进行高度选择性操作的技术。“反义”顺序互补编码链,能特殊地阻断基因表达。反义顺序通过碱基配对,同编码RNA结合,干扰蛋白质的翻译,从而降低蛋白质生产总量。该技术同选择作用相结合,有着广泛应用,可以降低或完全阻断任何基因表达。它对在生物体内,操纵基因功能,进行科研、医药或农业活动,都具有巨大潜力。     

酶促RNA

阻止活体基因表达的反义RNA已普遍成为当今生物技术公司最热门的研究领域之一。然而,却面临着许多技术障碍.一旦反义RNA位于细胞内部就被酶所破坏,这意味着RNA不具有重复使用性.解决此问题的诸多办法是化学改变反义物质以阻止上述降解发生,或者控制其过量投入.但是,澳大利亚联邦科学与工业研究组织(CSIRO)的研究人员设计出了另一种不同方法.他们试图遗传加工微生物以获得一些RNA片段,在RNA合成蛋白之前切断人们希望“静止”的基因的RNA.     

硫化寡聚核苷酸作为基因表达抑制剂的研究进展

1983年Light等人在原核生物中发现了一种新的基因表达调控系统——反义RNA参与调控。经过近九年来的发展,反义RNA概念的覆盖面变得更广了,即能通过互补到靶基因链上并干扰或抑制靶基因表达RNA片段通称反义RNA。这样就提供了用人工方法来干扰或抑制基因表达的新机会,使反义RNA作为基因表达的抑制剂得到蓬勃发展。由于反义RNA在医学临床上有着重要的应用前景,因此国外许多生物工程公司、许多大制药公司和研究所都纷纷投入大量人力物力来开发这些新一代的药物。     

天然反义转录物及其调控基因的表达机制

天然反义转录(NATs)是一组编码蛋白质或非编码蛋白质的RNAs, 与其他(有义)转录物具有互补序列, 可以调节有义链的表达。这种调节可以发生在转录水平或转录后水平, 调节方式有转录干扰、RNA封闭、双链依赖机制或染色质重建(修饰)等。正义链和反义链分别加工成小RNAs调节基因表达, 也是NATs调节基因表达的重要方式, 如piRNAs的“乒乓机制”。实验或计算机研究已经证明了NATs在生物中广泛存在, 是一种重要的基因表达调节方式。文章论述了NATs的重要作用和机理, 重点论述了NATs的调节机制和相关的小RNAs。     

定量测定黑鲷生长激素受体mRNA的液相杂交/RNase保护法

目的　建立液相杂交 核糖核酸酶保护测定 (RibonucleaseProtectionAssay,RPA)技术定量检测黑鲷(Sparusmacrocephalus)生长激素受体mRNA水平。方法　将黑鲷生长激素受体cDNA片断亚克隆至pGEM T载体 ,制备特异性的放射性反义RNA探针及正义RNA ,将反义RNA探针与正义RNA及样品总RNA进行液相杂交 ,用RNaseA和RNaseT1 降解杂交产物的单链RNA ,双链杂交体得到保护 ,然后检测杂交体的分子大小及放射强度。结果　检测出了黑鲷生长激素受体反义RNA探针与正义RNA及样品总RNA的特异性杂交片断 ,由此建立了定量测定黑鲷生长激素受体mRNA的液相杂交 RNase保护法 ,并采用该方法在黑鲷的多种组织中检测出了生长激素受体基因的表达 ,表达水平在肝脏中最高。该结果与我们曾采用生长激素放射受体分析法对黑鲷生长激素受体所研究的结果相吻合。结论　为进一步深入研究鱼类生长激素受体分子内分泌的调控理论提供了有力手段。     

地高辛标记Ucp2基因RNA探针的制备和应用

目的:制备用于检测小鼠胚胎早期Ucp2基因表达的地高辛标记的特异性RNA探针。方法:提取小鼠胚胎脑组织总RNA,设计引物,通过RT-PCR方法获取Ucp2基因片段,将其克隆到pGEM-T载体。分别利用Sp6、T7和Ucp2特异性引物,PCR扩增获得转录模板,通过Sp6及T7 RNA聚合酶,获得地高辛标记的正义、反义Ucp2 RNA原位杂交探针。检测标记探针的效价后,通过全胚胎原位杂交分析制备探针的特异性和杂交效果。结果:成功获得Ucp2基因正义、反义探针,反义探针能高效灵敏检测到Ucp2基因在小鼠胚胎Ed9.5、Ed10.5神经系统呈现高表达,而正义探针未能检测到表达信号。结论:成功制备了特异高效的地高辛标记Ucp2 RNA原位杂交探针,为进一步研究Ucp2基因在小鼠胚胎组织中的表达,尤其在神经组织的定位奠定基础。     

反义及正义表达癌基因c-Ha-ras重组质粒的构建

c-Ha-ras癌基因通过其产物p21蛋白的点突变或过量表达使细胞恶变。国外一些实验室的初步研究表明,导入一段与c-Ha-ras基因转录出的mRNA(sense RNA,正义RNA)顺序互补的RNA(anti-sense RNA,反义RNA),有可能通过阻断DNA复制,RNA转录或蛋白质翻译等过程,减少p21蛋白的合成,从而使转化细胞逆转。为了进一步系统研究反义c-Ha-ras RNA在转化细胞逆转中的     

反义RNA及其抗病研究现状

反义RNA(antisense RNA)是一种与特定mRNA互补的RNA分子,它天然存在于原核细胞中.反义RNA与特定的mRNA结合后可阻止后者的转录和翻译,具有调节基因表达的功能.因此,利用这一特性,人工构建一些相应的反义RNA系统不仅可用于癌症的治疗,抑制病毒的生长以及其它抗病治疗,还可结合转基因技术培养出抗病动物.(一)反义RNA的作用机理反义RNA作用的基本原理是通过碱基配对原则与mRNA结合,形成双链以阻止后者的正常表达.反义RNA的作用方式推测有以下几种:1.在细胞质内与mRNA形成RNA:RNA二聚体,使后者不能与核蛋白     

真核基因反义RNA研究进展

反义RNA是指能与特定mRNA互补的RNA片段。本文介绍了近年来真核基因反义RNA研究的一些进展,包括不同基因反义RNA的作用,反义RNA抑制作用的特点,以及反义RNA的抑制机理。反义RNA对基因表达具有高度专一性的调控作用,因此可利用它研究特定基因在细胞生长、分化中的作用,同时,反义RNA系统也可用于抑制有害基因的表达,从而为治疗提供新的途径。     

甲基化寡聚核苷酸作为靶基因抑制剂的研究进展

反义RNA对靶基因的抑制作用近来越来越受到人们的重视,这是因为反义RNA能在分子水平上有效地抑制有害的靶基因表达,为发展新一代治疗药物提供了可靠的理论基础。当反义RNA和靶mRNA的起始编码区(initiation coding region)互补结合或和一个靶mRNA前体的拼接区(splicing junction)互补结合形成三螺旋结构(triple stranded complexes),则这个mRNA的翻译或mRNA前体的拼接加工将被抑制,最后阻断这些靶基因正常表达。故反义RNA既可作为遗传分析的强有力的工具又可促进发展新一代基因型治疗试剂。因此,     

RNA干涉在基因治疗中的应用

RNA干涉(RNA interference,RNAi)是一种可以在细胞内抑制特定基因表达的现象.它由双链RNA产生,可以特异性地降解具有相同或者相似序列的RNA（包括mRNA）.它是一种比反义技术更为有效的方法,具有更高的特异性,逐渐成为研究者关注的焦点.人们已经开始探讨使RNA干涉成为一种比反义药物更为有效药物的可能性及其具体的实施方案, 但是也发现它在成为一种安全有效治疗手段之前还有很长的一段路要走.将从RNA干涉的基本理论入手,分析目前这项技术在治疗研究中的应用以及可能遇到的一些问题.     

反义RNA转录——基因表达调控的一种表观遗传学机制

反义RNA(antisense RNA,AS-RNA)是一种存在于细胞内的非编码RNA,反义转录在哺乳动物基因组中广泛存在,可能在基因表达的相关调控机制中起着重要作用。目前研究发现,ASRNA主要是通过表观遗传学上的改变,对基因进行调控。DNA甲基化水平的改变,组蛋白修饰引起的染色质构型重塑,以及其它非编码RNA的调控作用均与AS-RNA有着密切的关系。     

PRSV-CP正义、反义RNA植物表达载体的构建

利用基因工程方法构建了RNA介导的正义、反义植物表达载体,并通过电激法导八农杆菌中．经PCR和酶切鉴定证实,成功构建了PRSV-CP正义、反义RNA植物表达载体及其相应的农杆菌工程菌株．这为后续转基因研究及番木瓜抗PRSV分子育种奠定了基础．