β-干扰素与多发性硬化症的治疗

多发性硬化症(MS)是一种慢性中枢神经系统疾病,目前在临床上难以治愈。β-干扰素(IFN-β)是一种多功能细胞因子,具有抗病毒、抑制生长、诱导凋亡和免疫调节等作用。近年来IFN-β在缓解MS急性发作和延缓病程方面表现出很好的效果,但IFN-β对MS的作用机制却仍不明了。本文简要综述近年来有关IFN-β治疗MS的作用机理。     

人β-干扰素粗制品的浓缩与纯化

本文报道了采用Millipore超滤膜浓缩人β-干扰素粗制品,滤速快,活性回收率高,同时又具有一定的纯化作用。浓缩后的干扰素样品,再经过一次蓝色葡聚糖——Sepharose CL-6B柱层析,可将其纯化2800倍,特异活性可达10⁶μ／mg蛋白以上的国际临床标准。     

聚乙二醇修饰β-干扰素的研究

采用平均分子量为5kD的已活化的单甲氧基聚乙二醇(mPEG)对重组人β-干扰素(rhIFN-β)进行化学修饰。优化修饰条件,选择对rhIFN-β反应性高的修饰剂,制备三种不同修饰程度的修饰物,并对修饰物进行初步检定。三种修饰物的修饰率分别为10．12％、22．99％、42．47％;比活性分别保留为原来的93．53％、48．69％、13．18％;PEG修饰后的rhIFN-β在pH7时的溶解度增加。     

Repligen公司签订一项关于木质素降解酶的协议

<正> 目前,用于纸浆和造纸工业的两种木质素降解酶系统已由 Repligen 公司(坎布里奇,马萨诸塞州)和 Research 公司(塔克森,亚利桑那州)得到生产许可。Repligen 公司已和 Ce-llulose dupin 公司(法国)签订了一份在欧洲、非洲、中东和南美的木质素降解和修饰(LDM)酶计划的合同,并还与一些美国公司协商保留地理面积的专有权。Repligen 的 LDM     

日本武田药品公司和美国PE公司签订使用Celera公司染色体信息数据库的合同

《日经生物技术》2000年4月10日号第1页报道：日本武田药品工业公司和美国PE公司3月30日宣布双方已就PE公司下属Celera Genomics公司染色体信息数据库的使用权签订了合同。签订了数据库的使用合同在日本还是第一家。 根据合同,武田公司可以使用Celera公司的人染色体信息、人cDNA信息、赤蝇染色体信息、人染色体多型(SNPs)信息、小鼠染色体信息等各种数据库。还可以使用Celera公司开发的Blaus(ブラゥザザ-)和解析软件等生物信息磁盘(バィ才ィンフ才マティクス)系统。合同期限为5年,未公开合同金额等条件。 这次合同是关于数据库的非独占性使用权。使用数据库而获得的成果只要不与Celera公司的专利相抵触,就可以是武田独自的权利,武田可以申请专利。在使用数据库信息的基础上创造的产品也不需要支付专利使用费。 武田公司正在进行以基因信息为基础的孤独(orphan)受体／配体的研究。但是,要开发更有用的新药品必须着重使用最尖端的染色体信息数据库。 武田公司1995年与美国SmithKline Beecharm(SKB)公司和Human Genome Sciences(HGS)公司签订了 在染色体信息基础上开发新药品的合同(参见日经生物技术杂志95年7月3日号10页)。与SKB公司和HGS公司的合同是只使用cDNA数据库的信息,不完全包括整个染色体的信息。如果能利用Celera公司新的全基因染色体所有的信息,就能增加研究的范围。Celera公司致力于染色体信息解析方法一生物信息磁盘开发,武田公司也希望充实生物信息磁盘的内容。 武田药品工业公司会长藤野政彦说,“利用Celera公司所具有的染色体信息可进一步加速现在的孤独受体及其配体的探索研究,还关系到未知酶基因和有关疾病基因的表达”。孙国凤     

重组人β-干扰素的表达、纯化与鉴定

经 1 5L发酵罐制备重组人β 干扰素 (recombinanthumanIFN β,rhIFN β)。以免疫亲和层析方法纯化发酵液中rhIFN β并与蓝谱亲和层析纯化法比较 ,探索快速高效纯化rhIFN β的方法。以ELISA测定rhIFN β含量及经免疫亲和层析纯化的rhIFN β中鼠IgG残留量 ;以PAGE法鉴定rhIFN β的分子量 ;以CPEI法测定rhIFN β的生物活性。取 2L发酵液经免疫亲和层析纯化后 ,得到 3.0 3mgrhIFN β ;经蓝谱亲和层析纯化后 ,得到2 .6 5mg ;分子量为 2 2kD ;沉淀带灰度值分别为 96 .2 %和 95 .1 % ;CPEI比活性分别为 1 .4 3× 1 0 7IU/mg和 1 .6 3× 1 0 7IU/mg ;经免疫亲和层析后纯化物中鼠IgG残留量小于 5 0 μg/L。实验结果表明 ,所采用的免疫亲和层析和蓝谱亲和层析均可快速高效地从酵母菌发酵上清液中分离纯化rhIFN β基因产物     

NutraSweet公司的经营业务在扩大

NutrawSeet公司(斯科基,伊利诺州)正在努力开发糖精以外的产品,它将支持DNA植物技术公司(辛纳明森,新泽西州)的研究,目的在于开发经济的、天然的蔗糖替换物。这两家公司的协议要求DNA植物公司研究各种能生产更标准可靠热稳定性好的增甜剂植物,这种增甜剂要比糖甜。由于使用这种增甜剂只要较少的量就能获得同样的甜度,因此吸收的卡路里量也比使用糖要少。DNA植物技术公司(DNAP)将参与使之商品化的研究。这项研究计划要连续进行几年。DNAP的董事长Richard Laster说,这项研究大概要花3～     

人β-干扰素重组质粒在CHO-dhfr~-细胞中表达水平与MTX的关系

人IFNβ基因编码序列与pSC_7-dhfr~-载体重组构建的由SV_(40)早期启动子控制的组成性表达cDNA克隆,转染CHO-dhfr~-细胞,用氨甲喋呤(MTX)逐渐加压,观察其表达情况。二氢叶酸还原酶(dhfr)有一特性,其基因拷贝数可在MTX的选择压力下扩增,     

用构建的新型BmNPV载体在家蚕高效表达人β-干扰素

家蚕核多角体病毒(Bombyx mori Nuclear Polyhedrosis Virus.BmNPV)和家蚕细胞已成功地用来大量生产具有生物活性的重组蛋白。但是BmNPV的通用载体的类型较少。因此,本实验构建了BmNPV新型载体pBm92,该载体将多角体蛋白基因的起始密码ATG改变为ATT,然后在多角体蛋白基因的 12位外连接有5个外源基因的克隆位点。将HuIFN-β基因克隆在多角体蛋白基因的 12位后,构建了pBmIFN 12;同时构建HuIFN-β克隆在-3位后的转移栽体pBmIFN-3。将两种转移载体DNA分别与BmNPV基因组DNA共转染Bm-N细胞。利用重组病毒不产生多角体蛋白的特征,筛选重组病毒。用HuIFN-β基因探针与重组病毒DNA进行杂交鉴定。重组病毒BmIFN 12感染Bm-N细胞,其上清IFN活性最高时可达2.0×10~6IU/ml,将BmIFN 12注射5龄家蚕虫体,表达水平为50×10~7IU/ml,是HuIFN-β基因克隆在多角体蛋白基因的-3位后获得的重组病毒的表达量的2～4倍。家蚕体生产的rHulFN-β为糖基化蛋白具有天然HuIFN-β的抗原性。     

β-干扰素及其重组产品的基础和临床应用

β干扰素(IFNβ)是一种具有广泛抗病毒、抗肿瘤及免疫调节功能的细胞因子,随着基因工程技术的应用,已获得两种重组β干扰素并用于临床。如何对重组β干扰素进一步优化,提高其临床应用价值仍是研究的重点。本文不仅对β干扰素的结构、基因、受体、信号传导途径及生物学效应等方面,而且对目前市场上重组β干扰素的种类、来源、优缺点、临床应用及其优化方面的研究进展作一综述。     

一个“负的强化因子”调控β-干扰素

β-干扰素基因的强化因子含有负调控序列,这一新的发现是T.Maniatis(哈佛大学)在今年四月举行的第三届瓦克斯曼研究所生物技术讨论会上宣布的。 Maniatis叙述了他和S.Goodbourn及H.Burnsten合作进行的一系列实验,这些实验     

人β干扰素-血清白蛋白融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达

利用重叠PCR技术在体外拼接IFN β和HSA基因,将得到的融合基因插入到毕赤酵母分泌型表达载体pPIC9K中,置于启动子AOX1和α交配因子信号肽的作用下,分泌表达融合蛋白IFNβ-HSA。重组质粒pPIC9K-IFNβ-HSA经SalI线性化,电击转化毕赤酵母KM71,经G418筛选得到高拷贝转化子。PCR鉴定后,用甲醇诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达的融合蛋白IFNβ-HSA表明该蛋白分子量约为90kDa且具有HSA的抗原性;用细胞病变抑制法测定发酵液上清中融合蛋白的干扰素活性约为640IU/ml。     

重组人干扰素—β在大肠杆菌中的表达与活性分析

利用定点突变技术将人干扰素-β第17位半胱氨酸编码序列突变为丝氨酸(IFN-βser17),DNA序列分析证明了其核苷酸序列的正确性,并在大肠杆菌TAP106中获得高效表达,IFN-βser17表达量达20%,用Westemblot得到单一条带,细胞病变抑制法测定其比活性达(2～3)×107U/mg.INF-βser17的比活性和稳定性均超过天然人IFN-β.     

重组干扰素-τ在大肠杆菌中的表达与纯化

目的:探讨干扰素(IFN)-τ在大肠杆菌中的表达及纯化。方法:含有IFN-τ基因的pBV220表达质粒转化大肠杆菌BL21,于42℃温控诱导重组菌表达IFN-τ。经过包涵体溶解、DEAE离子交换层析、硫酸铵沉淀及梯度透析,使重组IFN-τ获得纯化和复性。结果:诱导后的表达产物经SDS-PAGE分析,有相对分子质量约21000的条带。纯化复性后目的蛋白纯度可达90%。结论:工程菌可稳定高效地表达IFN-τ。硫酸铵沉淀结合阴离子交换是一种简便高效的纯化方法,可获得较高纯度的IFN-τ。     

干扰素-β1b的高效表达、纯化及抗病毒活性研究

IFN-β1b是大肠杆菌产生的17位Cys被Ser替换的人IFN-β的类似物,为了获得高表达,使用了大肠杆菌的偏爱密码子,人工合成了IFN-β-1b基因,插入质粒pBV220中,转化大肠杆菌DH5α.IFN-β1b的制备过程,包括发酵和一系列的纯化步骤.经修饰,IFN-β1b基因在启动子PRPL控制下发酵表达,合成的蛋白质以包涵体的形式存在.培养的细菌经收集、裂解后,将包涵体释放出来,包涵体经含SDS的溶液溶解,DTT还原.纯化过程包括有机溶剂抽提、分子筛层析、脱盐、氧化复性和反相层析,并用旋转蒸发除去有机溶剂.IFN-β-1b在不同种系来源的细胞上显示不同的抗病毒活性.     

产β-淀粉酶菌株的筛选及β-淀粉酶基因在大肠杆菌中的克隆与表达

从淀粉厂附近的土壤中筛选到一株能够利用淀粉的细菌,对该细菌进行生理生化检测和16S r DNA同源性比对,分析该菌株为蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)。利用基因克隆技术得到了该菌株的β-淀粉酶基因,该基因含有一个约30个氨基酸的信号肽序列。将该β-淀粉酶基因重组进入质粒p ET-28a中,转化进入E.coli BL21(DE3)中进行表达。检测表达结果显示得到了重组后的β-淀粉酶蛋白质,重组酶的酶活力提高了53.9%。     

美国Cyanotech公司增进了藻类中β-胡萝卜素的产量

据Cyanotech公司报道,它已改进了从杜氏藻中分离胡萝卜素的方法。这个新方法在收获藻类时所用的马达小得多(特别是在离心阶段)。因此,整个过程需要的能量降低了70％。此外,这个变化增加了藻的回收,回收量达90％(而旧方法的回收率为大约60％)。     

猪β-干扰素的原核表达及其对猪流行性腹泻病毒的抑制作用研究

本研究通过PCR技术克隆了猪β干扰素全基因,设计引物亚克隆猪β干扰素成熟蛋白编码基因并对,5'端1个稀有密码子进行了大肠杆菌偏嗜性改造.构建了猪IFN-β原核单纯表达载体pRLC-poIFNβ,实现了poIFN-β在大肠杆菌中的表达,表达产物约占菌体总蛋白的17.3%.表达产物以包涵体形式存在,用含6mol/L盐酸胍的变性液溶解及含GSH-GSSG复性液复性处理,复性后的表达产物经凝胶层析纯化后,MDBK细胞-VSV病变抑制法测定结果表明,重组猪β干扰素具有良好的抗病毒活性,约为5.6x105U/mg.用重组猪β干扰素处理猪肾传代细胞PK-15后,细胞病变抑制法(CPE50)测定结果表明重组猪β干扰素可显著抑制猪流行性腹泻病毒(PEDV)的感染.     

猪β-干扰素的原核表达及其对猪流行性腹泻病毒的抑制作用研究

本研究通过PCR技术克隆了猪β干扰素全基因,设计引物亚克隆猪β干扰素成熟蛋白编码基因并对,5’端1个稀有密码子进行了大肠杆菌偏嗜性改造。构建了猪IFN-β原核单纯表达载体pRLC-poIFNβ,实现了poIFN-β在大肠杆菌中的表达,表达产物约占菌体总蛋白的17.3%。表达产物以包涵体形式存在,用含6mol/L盐酸胍的变性液溶解及含GSH-GSSG复性液复性处理,复性后的表达产物经凝胶层析纯化后,MDBK细胞-VSV病变抑制法测定结果表明,重组猪β干扰素具有良好的抗病毒活性,约为5.6x105U/mg。用重组猪β干扰素处理猪肾传代细胞PK-15后,细胞病变抑制法(CPE50)测定结果表明:重组猪β干扰素可显著抑制猪流行性腹泻病毒(PEDV)的感染。