编码Synechococcus sp. PCC 7002 FNR 中FNR区的基因克隆及其在大肠杆菌中的表达

用ＰＣＲ的方法克隆出了编码蓝细菌Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓｓｐ．ＰＣＣ７００２ＦＮＲ中ＦＮＲ区的基因ｐｅｔＨＬ,克隆到达载体ｐＥＴ３ａ上,转化大肠杆菌ＢＬ２１（ＤＥ３）后实现了大量表达。重组ＦＮＲ区（ｒＦＮＲＤ）经ＤＥＡＥＳｅｐｈｄｅｘＡ５０离子交换层析及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００凝胶层析得到大量的电泳均一的ｒＦＮＲＤ。Ｎ末端氨基酸序列分析表明,表达产物确为ｐｅｔＨＬ所编码。且起始Ｍｅｔ翻译后未被除去。ｒＦＮＲＤ与ｒＦＮＲ的吸收光谱相同,其黄递酶活性的最适ｐＨ和最适温度也相同。ｒＦＮＲＤ能在体外催化电子从Ｐ７００到ＮＡＤＰ＋的传递     

蓝细菌Synechococcus sp.PCC7002petH基因的高效表达及其产物的纯化

铁氧还原白－ＮＡＤＰ＾＋氧还酶（ＦＮＲ）是光合电子传递中的关键酶之一。蓝细菌Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．ＰＣＣ７００２中编码ＦＮＲ的ｐｅｔＨ基因被克隆到表达载体ｐＥＴ－３ｄ上,在大肠杆菌中得到了高效表达,其表达量占大肠杆菌总蛋白的５０５％以上。高效表达的产物以可溶性和包含体两种形式存在。可溶性部分具有ＦＮＲ的酶活性,在经过离子交换和凝胶层析后产生了电泳纯的ＦＮＲ。包含体形式的部分经６．７ｍｏ     

聚球藻Synechococcus sp.PCC7942高CO2需求突变株的筛选及其超？…

以单细胞蓝藻球藻Ｓｙｎｅｃｈｏｃｏｃｃｕｓ ｓｐ．ＰＣＣ７９４２为材料,利用甲基磺酸乙酯（ＥＭＳ）进行化学诱变获得了一个高ＣＯ２需求突变株。它能在４％ＣＯ２下生长而不能在空气中生长。对突变株的初检表明：其回复突变率约为１０＾－７。该突变株从高ＣＯ２条件下转到空气中后,细胞在２～３ｄ内逐渐趋于死亡;其光合作用对外源无机碳的依赖性高于野生型细胞,碳酸酐酶活性也低于野生型细胞。在超微结构水平,突变株细胞     

蓝细菌Synechocystis sp.PCC6803中叶绿素合成调控类囊体膜重建的研究

利用ＤＮＡ体外重组技术构建了蓝细菌Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓｓｐ．ＰＣＣ６８０３突变种ＯＲＦ４６９,它的染色体ＤＮＡ缺失ＯＲＦ４６９片段,该突变种在加入５ｍｍｏｌ／Ｌ葡萄糖的ＢＧ－１１培养基中经遮光培养２周后叶绿素全部消失,细胞甲醇提取液光谱中６６５ｎｍ处叶绿互峰消失,６２９ｎｍ处出现原叶绿素酸酯峰,完整细胞光谱仅存在６２０ｎｍ的藻胆蛋白肩峰,细胞的类囊体膜消失,但藻胆体颗粒并未减少;细胞培养物重     

集胞藻Synechocystis sp.PCC6803利用葡萄生长与光合能量转？…

用ＰＡＭ叶绿素荧光仪测定了饥饿细胞、光自养细胞和混合营养细胞的叶绿素荧光,并对３种类型细胞的荧光参数：ＰＳⅡ实际光化学效率ψⅡ和还原型质醌Ｑ＾－Ａ进行了比较。用双重转盘磷光机测定了光自养细胞和混合营养细胞的毫秒延迟发光。根据叶绿纱荧光动力学分析和毫秒延迟发光的结果及光合电子传递抑制剂３,４－二氯苯基二甲脲（ＤＣＭＵ）、溴百里香醌（ＤＢＭＩＢ）对集胞藻６８０３（Ｓｙｎｅｃｈｏｃｙｓｔｉｓ ｓｐ．ＰＣ     

蓝藻Synechococcus sp.PCC 7942穿梭表达质粒的构建及胸腺素α1基因的表达

利用本实验室构建的含蓝藻Plectonema boryanum内源小质粒的穿梭质粒pPRS-1,改建成含热诱导启动子、泛素融合的胸腺素α_1(UB-Tα_1)目的基因、卡那霉素抗性选择标记、rbcs终止子的新的穿梭表达重组质粒pPRFUT。将这种重组质粒转化蓝藻Synechococcus sp.PCC7942,通过抗性筛选获得了具卡那霉素抗性的转化藻株。经Southern-blot杂交证实,穿梭表达质粒已转入蓝藻Synechococcus sp. PCC7942细胞中;在42℃热诱导30min后,目的基因UB-Tα_1得到较高水平表达,表达量约占总蛋白量的7.5%。     

具异型胞蓝细胞Anabaena sp.PCC 7120质和类囊体膜的分离纯化

利用水溶性多聚体双相法分离蓝细菌Anabaena sp.PCC 7120质膜和类囊体膜两种膜系统。吸收光谱分析表明,质膜相和类囊体膜相的主要色素分别为类胡萝卜素和叶绿素。SDS－凝胶电泳显示这两种膜系统蛋白组成有很大差别。这种分离方法容易操作,对研究蓝细菌的膜蛋白和膜脂非常有用。     

人促血小板生成素受体c—Mpl编码区全长cDNA的克隆及其稳定？…

以人ＨＥＬ细胞总ＲＮＡ为模板,采用ＲＴ－ＰＣＲ方法扩增了人促血小板生成素受体ｃ－Ｍｐｌ编码区全长１．９ｋｂ ｃＤＮＡ,测序结果表明与已报道的序列一致。然后构建了ｃ＝ｍｐｌ的ｐｃＤＮＡ３表达载体ｐｃＭＰＬ,转染不表达ｃｍｐｌ的Ｋ５６２细胞后,经Ｇ４１８抗性筛选,Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎ ｌｂｏｔ检测证实获得稳定表达ｃ－ｍｐｌ的细胞株。为进一步研究ｃ－Ｍｐｌ的生物学功能提供有用的实     

抑制消减杂交技术(SSH)及其在植物基因克隆上的应用

介绍了抑制消减杂交技术（SSH）的主要原理、基本方法、优越性及主要缺陷,并就其在植物基因克隆上的应用作一综述。     

具异型胞蓝细菌Anabaena sp.PCC7120质膜和类囊体膜的分离纯化(英文)

利用水溶性多聚体双相法分离蓝细菌Anabaenasp .PCC 712 0质膜和类囊体膜两种膜系统。吸收光谱分析表明 ,质膜相和类囊体膜相的主要色素分别为类胡萝卜素和叶绿素。SDS_凝胶电泳显示这两种膜系统蛋白组成有很大差别。这种分离方法容易操作 ,对研究蓝细菌的膜蛋白和膜脂非常有用。     

硫代硫酸钠对蓝细菌Synechocystis sp．PCC 6803生长在含葡萄糖培养基中所产生的一种新糖脂的影响

当蓝细菌Synechocystis sp.PCC 6803在添加葡萄糖的BG—11培养基中培养时,细胞出现了一种新脂。这种脂经浓硫酸／α—萘酚染色反应证实为糖脂,记为糖脂—x。这一糖脂的出现伴随着其他脂、尤其是双半乳糖甘油二酯含量的下降。此外,在添加果糖、麦芽糖、乳糖等其他碳源的培养基中生长的细胞中也检测到这一糖脂。活性氧猝灭剂硫代硫酸钠加入到培养基中能有效地抑制糖脂x的出现。当在BG—11培养基中加入0．3％硫代硫酸钠后,糖脂x仅能在培养基中添加高浓度(100mmol／L)的葡萄糖且细胞生长处于后指数期时检测到。这些结果表明蓝细菌Synechocystis sp．PCC 6803细胞在含葡萄糖的培养基中生长出现的一种新糖脂可能与活性氧有关。     

聚球藻Synechococcus sp.PCC7942高CO_2需求突变株的筛选及其超微结构观察(英文)

以单细胞蓝藻聚球藻Synechococcussp.PCC7942为材料,利用甲基磺酸乙酯(EMS)进行化学诱变获得了一个高CO2 需求突变株。它能在 4%CO2 下生长而不能在空气中生长。对突变株的初检表明:其回复突变率约为 10 -7。该突变株从高CO2 条件下转到空气中后,细胞在 2～ 3d内逐渐趋于死亡;其光合作用对外源无机碳的依赖性高于野生型细胞,碳酸酐酶活性也低于野生型细胞。在超微结构水平,突变株细胞内出现了不同类型的异常羧体:有的为棒状;有的为不规则状;有的为 空羧体",而且,类囊体周围糖原颗粒增多。进一步说明该突变株在CO2 吸收和利用功能上有缺陷。此外,对低碳条件对羧体的诱导及羧体的生物发生也作了一些探讨     

质体醌库和细胞色素b6f参与调控蓝细菌 Synechocystis sp. PCC 6803的状态转换

用调制叶绿素荧光研究了对苯醌(1,4-benzoquinone,BQ)和二溴百里香醌(2,5-dibromo-3-methyl-6-isopropyl-1,4-benzoquinone,DBMIB)对蓝细菌Synechocystissp.PCC6803状态转换的作用。BQ和DBMIB是质体醌(PQ)的类似物,两者均可充当PQ的电子受体。其中,DBMIB能够和细胞色素b6f的Qo位点特异结合。在没有作用光的情况下,BQ诱导暗适应的蓝细菌进入状态Ⅰ;相反,DBMIB诱导Syne鄄chocystis6803向状态Ⅱ转换。据此提出,在生理状态下蓝细菌根据PQ库的氧化还原状态调节状态转换;细胞色素b6f参与此调控过程。     

p185胞外区及其亚区在大肠埃希菌中的表达及与单抗的结合特性分析

目的 旨在获得p185胞外区及其亚区基因在原核系统中表达的多肽,并分析其与单抗结合特性.方法 以pGEX-4T-1为载体,克隆p185胞外区及其亚区基因,并在原核系统中表达,经变性、复性后,以亲和层析法获得纯化的多肽.进一步通过ELISA方法分析了这些多肽与抗p185单抗A18的结合特性.结果 研究获得原核系统表达的p185胞外区及其亚区多肽,GST-E3和GST-E34与单抗A18具有特异结合活性.结论 原核系统表达的p185胞外区及其亚区多肽是可行的,初步确定为与单抗结合的亚区多肽,为进一步研究单抗识别的表位及其抑瘤机制奠定基础.     

棉铃虫核型多角体病毒p35基因的PCR扩增和克隆及其在原核细胞中的 …

用苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒凋亡抑制基因ｐ３５的合成引物,从棉铃虫核型多角体病毒基因组中用ＰＣＲ扩增到１ｋｂ片段。采用ＰＣＲ－双脱氧核苷酸链终止银染法,测定了所扩增到的１０１０ｂｐ全序列,发现其开放阅读框完整,长８９７ｂｐ,编码２９９个氨基酸。