枳实提取物及其药效组分对OX—LDL损伤的人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达和NO释放的影响

目的：研究枳实提取物及其药效组分橙皮苷和新橙皮苷对氧化低密度脂蛋白（oxidized lowd ensity lipoprotein,Ox—LDL）损伤的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells line,HUVEC）细胞间黏附分子-1（intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1）表达和一氧化氮（nitric oxide,NO）释放的影响。方法：体外培养HUVEC,50μg／mLOX—LDL制造HUVEC损伤模型。以MTS染色法检测细胞毒性确定用药浓度。细胞ELISA法测定细胞表面ICAM-1的含量,试剂盒测定细胞培养上清液中NO含量。结果：①枳实提取物小于等于2mg／mL时,橙皮苷浓度小于等于0．03125mg／mL时,新橙皮苷浓度小于等于0．25mg／mL时,HUVEC存活率分别大于80％。②2．0mg／mL和1．0mg／mL两个浓度的枳实提取物、15．625μg／mL的橙皮苷和0．2500mg／mL新橙皮苷对OX—LDL诱导的HUVEC的ICAM-1表达有显著抑制作用。③2．0mg／mL枳实提取物显著提高OX—LDL诱导的HUVEC和正常HUVEC培养液中的NO含量;7．813ixg／mL、15．625μg／mL和31．250μg／mL 3个浓度的橙皮苷能显著提高OX—LDL诱导的HUVEC培养液中的NO含量,31．250μg／mL的橙皮苷能促进正常HUVEC的NO释放;0．2500mg／mL和0．1250mg／mL 2个浓度的新橙皮苷能显著提高OX—LDL诱导的HUVEC培养液中的NO含量。结论：枳实提取物及其药效组分橙皮苷、新橙皮苷能抑制Ox-LDL诱导的HUVEC的ICAM-1表达,促进Ox-LDL诱导的HUVEC的NO释放。     

趋化因子CCL2对人脐静脉内皮细胞ICAM-1 表达的影响

目的:探讨CC类趋化因子配体2(C-C motif ligand 2,CCL2)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表达的影响。方法:体外分离培养HUVECs细胞,将HUVECs铺至6孔板中,待细胞融合至80-90%时,将CCL2过表达载体[pc DNA3.1(+)-CCL2]及CCL2小分子干扰RNA(si-RNA)分别转染到HUVECs中,于转染后12 h、24 h和48 h收集细胞进行RNA及蛋白提取。荧光定量PCR方法检测HUVECs中CCL2及ICAM-1基因m RNA表达。Western blotting检测HUVECs中CCL2及ICAM-1蛋白表达。结果:(1)与pc DNA3.1(+)组相比较,pc DNA3.1(+)-CCL2组中CCL2基因m RNA和蛋白水平均显著升高;与si-Control组相比较,si-CCL2组中CCL2基因m RNA和蛋白表达均明显下降。(2)与对照组比较,pc DNA3.1(+)-CCL2组明显增加HUVECs中ICAM-1的m RNA及蛋白表达,而si-CCL2组显著抑制HUVECs中ICAM-1的m RNA及蛋白表达。结论:CCL2能增加HUVECs中ICAM-1基因m RNA和蛋白表达,为深入认识动脉粥样硬化的发病机制提供了理论依据。     

MicroRNA-495对人脐静脉内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的:探讨MicroRNA-495(miR495)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)中细胞间粘附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表达的影响。方法:体外分离培养HUVECs,将HUVECs铺至6孔板中,待细胞融合至80%时,将miR495模拟物(miR495 mimics)、miR495抑制剂(miR495 inhibitor)及其相应的对照negative control(NC)、inhibitor NC分别转染到6孔板的HUVECs中,于转染后不同时间点(12 h、24 h和48 h)收集细胞进行RNA及蛋白提取。荧光定量PCR方法检测HUVECs中miR495及ICAM-1基因mRNA表达。Western blotting检测HUVECs中ICAM-1蛋白表达。结果:(1)与NC相比较,miR495 mimics组中miR495水平显著升高;与inhibitor NC组比较,miR495 inhibitor组中miR495表达明显下降。(2)与NC组比,miR495 mimics组明显降低HUVECs中ICAM-1的mRNA及蛋白表达;与inhibitor NC组比,而miR495 inhibitor组能显著增加HUVECs中ICAM-1的m RNA及蛋白表达。结论:MiR495能降低HUVECs中ICAM-1基因mRNA和蛋白表达。     

褪黑素对大鼠内毒素性肺损伤抗氧化功能及ICAM-1表达的影响

目的:探讨褪黑素(MT)对大鼠急性肺损伤(ALI)时肺脏的保护作用及其可能机制。方法:将大鼠随机分为4组:对照组;脂多糖(LPS)组;地塞米松(DEX)和MT处理组。各组动物分别于气道内滴注后3、6和12h检测肺组织髓过氧化物酶(MPO)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量;免疫组化检测细胞间黏附分子-1(ICAM-1)在肺组织的表达。结果:LPS组SOD活性较对照组明显降低(P<0.01),而MPO活性与MDA含量以及ICAM-1的表达则显著升高(P<0.01);应用MT及DEX均显著缓解上述变化(P<0.05或P<0.01)。结论:MT对ALI时的肺脏起明显的保护作用,其机制可能与MT清除自由基及抑制ICAM-1的表达有关。     

GLP-1对人脐静脉内皮细胞释放NO的影响及机制的研究

目的:观察胰高糖素样肽-1(GLP-1)对脐静脉内皮细胞(HUVECs)释放一氧化氮(NO)的影响,并探讨GLP-1受体及GLP-1(9-36)在其中的作用。方法:分别以GLP-1、艾塞那肽、GLP-1(9-36)、GLP-1+exendin(9-39)、GLP-1+西格列汀、GLP-1+西格列汀+exendin(9-39)孵育HUVECs,取培养上清以硝酸还原酶法检测NO浓度。结果:GLP-1剂量依赖性的增加HUVECs中NO释放,艾塞那肽和GLP-1(9-36)均可刺激NO释放,exendin(9-39)和西格列汀均可部分阻断GLP-1引起的NO释放。结论:GLP-1可能通过GLP-1受体及GLP-1(9-36)相关的途径刺激HUVECs NO释放,发挥直接的血管保护作用。     

三七总皂苷及单体组合对ox-LDL诱导内皮细胞ICAM-1表达的影响

目的:研究三七总皂苷及其单体组合对ox-LDL诱导的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)粘附分子ICAM-1表达的影响.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,加入100mg·L-lox-LDL刺激HUVECs,诱导单核-内皮细胞黏附,加入不同浓度的PNS及单体组合进行干预,蛋白染料法测定黏附值,RT-PCR检测HUVECs粘附分子ICAM-ImRNA的表达,Western-blotting检测HUVECs粘附分子ICAM-1蛋白的表达.结果:PNS各剂量组及单体组合组可有效降低单核-内皮细胞的黏附;ox-LDL可显著增加HUVECs的ICAM-1 mRNA及蛋白表达(P＜0.05);PNS各剂量组及单体组合组与ox-LDL组相比,均能显著降低ICAM-1的mRNA及蛋白表达(P＜0.05).结论:抑制ox-LDL诱导的内皮细胞ICAM-1mRNA及蛋白的表达,可能为PNS抗动脉粥样硬化作用机制之一.     

脱氢表雄酮对高脂诱导的兔主动脉及人脐静脉内皮细胞VCAM-1表达的影响

目的探讨脱氢表雄酮(dehydroepiandrosterone,DHEA)对高脂诱导的血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)表达的影响,以及全反式维甲酸在这一过程中的作用。方法细胞实验:将培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical ve-nous endothelial cells,HUVEC)分为6组:1.正常对照组;2.ox-LDL组;3.ox-LDL DHEA(低浓度)组;4.ox-LDL DHEA(高浓度)组;5.ox-LDL DHEA 全反式维甲酸组;6.DHEA组。各组均用相应药物作用24h,采用逆转录聚合酶链反应和ELISA法检测各组细胞VCAM-1 mRNA及蛋白的表达情况。动物实验:将大耳白兔分为5组:1.正常对照组;2.高脂组;3.高脂 DHEA组;4.高脂 DHEA 全反式维甲酸组;5.单DHEA组。各组白兔均用相应饲料喂饲2个月后,处死动物。采用逆转录聚合酶链反应和免疫组织化学等方法检测各组白兔主动脉VCAM-1 mRNA及蛋白的表达情况。结果细胞实验:①ox-LDL组VCAM-1的表达明显高于正常对照组(P<0.01)。②与ox-LDL组相比ox-LDL DHEA组VCAM-1的表达明显降低(P<0.01),并呈现浓度依赖性的特点(P<0.05)。动物实验:①高脂组主动脉VCAM-1的表达明显高于正常对照组(P<0.05)。②与高脂组相比高脂 DHEA组VCAM-1的表达明显降低(P<0.05)。结论DHEA能够抑制高脂诱导的VCAM-1的表达。这可能是其抗动脉粥样硬化的机制之一。而全反式维甲酸对DHEA的这一作用并无明显增强作用。     

ICAM-1与脑梗死关系的研究进展

炎症在脑梗死的发病机制中扮演着非常重要的角色,动脉粥样硬化是脑梗死的病理基础,动脉粥样硬化被认为是一种慢性炎症过程,这种炎症过程与黏附分子的表达有关,如细胞间黏附分子-1(ICAM-1),它能黏附循环中的白细胞,促进内皮细胞表面粥样斑块的形成,许多研究表明,ICAM-1与脑梗死密切相关,本文就二者的关系做一综述.     

药物治疗老年高血压对hs-CRP和ICAM-1 水平的影响

目的：通过比较老年原发性高血压患者使用瑞舒伐他汀治疗前后的情况, 探讨瑞舒伐他汀对老年原发性高血压患者血清超 敏C反应蛋白（hs-CRP）和细胞间黏附分子-1（ICAM-1）水平的影响。方法：选取86 例老年高血压患者随机分为对照组和治疗组, 其中对照组进行采用氨氯地平治疗,而治疗组在对照组的基础上采用瑞舒伐他汀治疗,分别检测和比较两组患者的hs-CRP和ICAM- 1 水平,并进行统计学分析。结果：与治疗前相比,治疗后对照组与治疗组hs-CRP 和ICAM-1 均明显降低,而两组的hs-CRP 和ICAM-1 差异显著（t=3.1655,P<0.01;t=9.6983,P<0.01）,具有统计学意义。结论：瑞舒伐他汀能显著降低老年高血压患者的 hs-CRP 和ICAM-1 水平,减轻患者的炎性反应,具有重要的临床应用价值。     

药物治疗老年高血压对hs-CRP和ICAM-1水平的影响

目的：通过比较老年原发性高血压患者使用瑞舒伐他汀治疗前后的情况,探讨瑞舒伐他汀对老年原发性高血压患者血清超敏C反应蛋白（hs-CRP）和细胞间黏附分子-1（ICAM-1）水平的影响。方法：选取86例老年高血压患者随机分为对照组和治疗组,其中对照组进行采用氨氯地平治疗,而治疗组在对照组的基础上采用瑞舒伐他汀治疗,分别检测和比较两组患者的hs-CRP和ICAM-1水平,并进行统计学分析。结果：与治疗前相比,治疗后对照组与治疗组hs-CRP和ICAM-1均明显降低,而两组的hs-CRP和ICAM-1差异显著（t=3.1655,P〈0.01;t=9.6983,P〈0.01）,具有统计学意义。结论：瑞舒伐他汀能显著降低老年高血压患者的hs-CRP和ICAM-1水平,减轻患者的炎性反应,具有重要的临床应用价值。     

苍耳子提取物抗类过敏作用及活性成分筛选的研究

摘要 目的：探讨苍耳子提取物抗类过敏作用及筛选出其中的活性成分。方法：采用测量小鼠脚掌肿胀和组织液渗出,检测小鼠血清中组胺、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α,TNF-α）、单核细胞趋化因子-1（monocyte chemotactic protein-1,MCP-1）和白细胞介素-8（interleukin-8,IL-8）浓度,检测肥大细胞脱颗粒的方法,观察苍耳子提取物拮抗C48/80诱发的类过敏反应的作用。建立高表达MrgX2/CMC筛选模型,从苍耳子的10种成分中筛选可作用于MrgX2受体的抗类过敏活性成分。结果：苍耳子提取物可减轻C48/80导致的小鼠脚掌肿胀和组织液渗出,降低小鼠血清中组胺、TNF-α、MCP-1和IL-8的含量,抑制肥大细胞脱颗粒（P<0.05）。10种苍耳子成分中筛选出6种有保留成分,其中槲皮素和大黄素可显著抑制肥大细胞释放组胺（P<0.05）。结论：苍耳子提取物可抑制肥大细胞脱颗粒和致敏介质的释放,其成分中槲皮素和大黄素具有潜在的抗类过敏作用。     

Identification of chemical constituents in extracts and rat plasma from Fructus Aurantii by UPLC-PDA-Q-TOF/MS

Introduction – Fructus Aurantii, as a component of several compound formulae, shows many bioactivities. As is well known, the constituents of traditional Chinese medicines are very complex and multiple constituents are responsible for the therapeutic effect. However, the concrete compounds are difficult to confirm. Therefore, studies on the constituents absorbed into serum and their metabolites are necessary. Objective – To search for the active constituents in Fructus Aurantii. Methodology – An ultra‐performance liquid chromatography–photodiode array detector–quadrupole time‐of‐flight mass spectrometry (UPLC‐PDA‐Q‐TOF/MS) method was established to analyse the aqueous extract in Fructus Aurantii and the constituents absorbed into blood. Compound identification was made by matching the empirical molecular formula with those of the reported compounds and UV spectra, and further elucidated by lower energy CID mass spectra. Results – Twelve flavonoid O‐glycosides were detected, and nine compounds were tentatively identified as polymethoxylated flavones. Six parent compounds were identified and four metabolites were observed in rat plasma, two of which were identified as naringenin glucuronide and hesperetin glucuronide, respectively. Conclusion – The approach developed has proved useful in the study of the active constituents in traditional Chinese medicines. Copyright © 2011 John Wiley & Sons, Ltd.     

Brown Pine Leaf Extract and Its Active Component Trans-Communic Acid Inhibit UVB-Induced MMP-1 Expression by Targeting PI3K

Japanese red pine (Pinus densiflora) is widely present in China, Japan, and Korea. Its green pine leaves have traditionally been used as a food as well as a coloring agent. After being shed, pine leaves change their color from green to brown within two years, and although the brown pine leaves are abundantly available, their value has not been closely assessed. In this study, we investigated the potential anti-photoaging properties of brown pine leaves for skin. Brown pine leaf extract (BPLE) inhibited UVB-induced matrix metalloproteinase-1 (MMP-1) expression to a greater extent than pine leaf extract (PLE) in human keratinocytes and a human skin equivalent model. HPLC analysis revealed that the quantity of trans-communic acid (TCA) and dehydroabietic acid (DAA) significantly increases when the pine leaf color changes from green to brown. BPLE and TCA elicited reductions in UVB-induced MMP-1 mRNA expression and activator protein-1 (AP-1) transactivation by reducing DNA binding activity of phospho-c-Jun, c-fos and Fra-1. BPLE and TCA also inhibited UVB-induced Akt phosphorylation, but not mitogen activated protein kinase (MAPK), known regulators of AP-1 transactivation. We additionally found that BPLE and TCA inhibited phosphoinositide 3-kinase (PI3K), the upstream kinase of Akt, in vitro. In summary, both BPLE and its active component TCA exhibit protective effects against UVB-induced skin aging. Taken together, these findings underline the potential for BPLE and TCA to be utilized as anti-wrinkling agents and cosmetic ingredients, as they suppress UVB-induced MMP-1 expression.     

连续摄入小球藻提取物缓解大鼠运动性心肌损伤研究

为探讨小球藻保护大鼠运动因运动造成的心肌损伤,为小球藻科学合理的应用和推广提供理论依据,本研究将60只SD大鼠随机分为5组:对照组(C组)、运动对照组(S组)、运动+低剂量小球藻组(SCL组)、运动+高剂量小球藻组(SCH组),每组12只大鼠。所有参与实验的大鼠每天自由饮水择食,小球藻的摄入采用灌胃器每日灌胃一次。小球藻各组灌胃体积为5 m L/kg,其他组灌入等量生理盐水。安静对照组(C组)笼内自由活动,不进行额外运动,运动对照组(S组)、运动+低剂量小球藻组(SCL组)、运动+高剂量小球藻组(SCH组)进行8周的跑台跑步训练,每周6次。1~4周进行中等强度训练,5~8周进行高强度训练。本研究发现,在大鼠血清谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、α-羟丁酸脱氢酶含量水平,S组较C组均显著升高(p<0.05)。血清谷丙转氨酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶含量,SCL组和SCH组显著低于S组(p<0.05),SCL组和SCH组组间无显著性差异(p>0.05),且随剂量增加而递减。鼠心肌SOD活性方面,S组显著低于C组(p<0.05);SCL组和SCH组显著高于S组(p<0.05),组间随剂量增加而递增;SCH组显著高于SCL组(p<0.05)。血清、心肌CGRP水平,S组显著低于C组(p<0.05);SCL组和SCH组显著低于S组均显著降低(p<0.05)。本研究认为摄入小球藻能够有效消除机体由于长期高强度大负荷运动下产生的过量的自由基;提高机体免疫力,增强血管原生性一氧化氮合酶活性。     

元宝枫叶中2种活性成分提取工艺研究

元宝枫叶为原料,优化槲皮素、山奈酚的提取工艺。运用正交实验法考察料液比、提取时间、提取次数对提取率的影响。结果表明,元宝枫叶提取槲皮素、山奈酚最佳工艺为：以20倍样品量的水煎煮提取2次,每次3h。该工艺可使样品中2种活性成分有效提取分离,并经济、环保。     

壳寡糖抑制脂多糖诱导的PIECs表达IL-8和VCAM-1作用的初步研究

目的：观察壳寡糖对脂多糖（LPS）诱导的猪髋动脉内皮细胞（PIECs）炎症损伤的影响以及潜在的分子机制。方法：以脂多糖（1g／mE）＊《激PIECs细胞,建立炎症损伤模型,以RT—PCR和Westernblot的方法观察壳寡糖（COS）预保护PIECs细胞24h,对白介素－8（IL－8）和血管细胞粘附分子．1（VCAM－1）表达水平的影响,以及对JNK信号蛋白磷酸化和c-Fos转录因子表达的影响。结果：壳寡糖可抑制脂多糖刺激的PIECs表达IL－8和VCAM－1,并抑制JNK信号通路的磷酸化和转录因子c-Fos的表达。结论：壳寡糖对脂多糖刺激的PIECs细胞中IL－8和VCAM—1表达的抑制作用是通过抑制上游的JNK信号通路磷酸化和转录因子c-Fos的表达实现的,从而缓解脂多糖对细胞造成的炎症损伤。     

乌梅酸枣仁提取物对人工感染鸡大肠杆菌病的防治效果

目的实验室评价乌梅酸枣仁提取物对鸡致病性大肠杆菌病的疗效。方法根据前期研究自拟乌梅酸枣仁提取物配方,以体外试管二倍稀释法测定其最小抑菌浓度（minimal inhibitory concentration,MIC）,建立鸡致病性大肠杆菌病模型,评价其预防和治疗鸡大肠杆菌病疗效。结果体外试验显示其最小抑菌浓度为12.5 mg/mL;人工感染鸡大肠杆菌病模型显示预防试验中乌梅酸枣仁提取物高、中、低剂量组、利好对照组、感染对照组的成活率分别为50%、70%、50%、60%、10%;肝脏细菌检出率均为100%。治疗试验中上述各组成活率分别为62.5%、50%、37.5%、62.5%、25%;肝脏细菌检出率均为100%。结论体外、体内试验结果表明,乌梅酸枣仁提取物能有效减少人工感染后的临床症状,保护率为50%～70%,推荐使用剂量为200 mg/kg体重,可以替代部分抗生素防治此病。     

壳寡糖诱导的烟草SKP1基因表达

壳寡糖是一种高效的植物抗性诱导剂,应用mRNA差异显示技术从经过壳寡糖诱导的枯斑三生烟草叶片中分离到了编号为5、31、37和46的4个基因片段.4个基因片段与本塞姆氏烟草(Nicotiana benthamiana)SKP1基因的mRNA同源性都达到82%,据此推断这4个片段是感病烟草品种枯斑三生烟草的SKP1基因.质粒双酶切及反向Northern分析结果表明,该基因表达在壳寡糖诱导下增强.由于SKP1基因与植物的抗病毒病相关,从而在mRNA水平上验证了壳寡糖的诱导抗性效应.