中药灵芝降羊毛甾烷三萜类成分研究

研究灵芝Ganoderma lingzhi子实体的化学成分。采用正相硅胶、ODS、Sephadex LH-20凝胶柱色谱和prep-HPLC等方法分离与纯化,运用NMR、MS等波谱技术鉴定化合物结构。从灵芝95%乙醇提取物中分离得到5个降羊毛甾烷三萜类化合物,分别是ethyl 20(21)-dehydrolucidenate A(1)、lingzhi-20(21)-en-24-oic acid A(2)、20(21)-dehydrolucidenic acid A(3)、赤芝酮A(4)、lucidadone H(5)。化合物1和2是两个新的降羊毛甾烷三萜化合物;化合物3~5为首次从该属真菌中分离得到。化合物1和2在白血病(HL-60)、肺癌(A549)、肝癌(SMMC-7721)、乳腺癌(MCF-7)、结肠癌(SW480)五种不同的癌细胞株上进行细胞毒活性筛选,结果显示化合物1~5在40μM时无明显的细胞毒活性。     

灵芝深层发酵生产四环三萜酸的研究

从灵芝深层发酵产物中分离得到三种四环三萜酸,命名为灵芝酸Ｍ１,Ｍ２,Ｍ３,在２５Ｌ发酵罐上研究了发酵条件对灵芝酸产量的影响,以及灵芝酸的代谢形成特征。结果表明最适发酵条件是：温度３０℃;通风量１：０．７５ｖ／ｖ／ｍ;搅拌转速１８０ｒ／ｍｉｎ;发酵时间８０ｈ,此时灵芝酸的最高产量是０．３６ｇ／Ｌ发酵液。抑菌实验表明上述灵芝酸能够抑制大肠杆菌,产气杆菌、肠炎杆菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的生长。     

9,10-环甲基十七烷酸干预下灵芝深层发酵合成三萜酸的动力学特征

利用Sigmoid模型对比研究了添加9,10-环甲基十七烷酸（9,10-CMA）前后灵芝深层发酵产三萜酸的动态变化特征。研究显示,灵芝对照组中三萜酸在4-9d大量合成,并于第9天达到最大值（268.62mg/L）;添加9,10-CMA组中三萜酸的合成量于第8天时达到最大值（343.52mg/L）。添加9,10-CMA后,灵芝菌丝体细胞对底物葡萄糖的利用速度加快,细胞比生长速率在3.2天达到最大值（Μ_max）,为0.94d ^-1,显著高于对照组的0.88d ^-1（在第3.4天获得）;葡萄糖比消耗速率在第1.7天达到最大值（Q_{S, max}）,为8.34d ^-1,显著高于对照组的6.80d ^-1（在第2.1天获得）。胞内三萜酸比合成速率显著提高,在第6.2天达到最大值（Q_{ITA, max}）13.76d ^-1,是对照组9.66d ^-1的1.42倍。两组中灵芝三萜酸的合成与细胞生长均呈现部分偶联关系,添加9,10-CMA后,没有改变细胞生长和三萜酸合成在发酵过程中的相互关系。     

两株多孔菌属担子菌菌丝体中的三萜成分

用组织分离法从采集于广东鼎湖山的2株多孔菌属担子菌子实体中分离得到2株菌丝体,并对菌丝体分别进行固体发酵培养,培养物经乙醇提取后,用柱层析分离得到4个化合物,用光谱法鉴定均为羊毛脂烷型三萜,它们分别是多孔菌酸C（polyporenic acid C）（1）、茯苓酸（pachymic acid）（2）、齿孔酸（eburicoic acid）（3）和硫磺菌酸（sulphurenic acid）（4）。其中化合物2为首次从多孔菌属中发现。     

9,10-环甲基十七烷酸诱导灵芝三萜酸合成的信号转导和基因表达分析

为探究9,10-环甲基十七烷酸（9,10-CMA）诱导灵芝三萜酸合成的相关信号机制,分析了NO信号的介导作用。结果表明,在NO信号分子介导下,9,10-CMA可有效地刺激灵芝菌丝体中三萜合成关键酶细胞色素CYP450和苯丙氨酸解氨酶（PAL）的活化以及三萜酸的合成。NO可作为灵芝菌丝体中CYP450产生和PAL活化的上游分子发挥作用。在9,10-CMA诱导下,通过荧光定量PCR分析了6个关键酶基因在灵芝三萜酸合成过程的动态表达。结果表明,在9,10-CMA诱导下与灵芝三萜酸合成相关的角鲨烯合成酶基因sqs、细胞色素P450单加氧酶CYP5150L8基因和3‐羟基‐3‐甲基戊二酰辅酶A还原酶基因hmgr的上调最显著,提示这3个酶在三萜诱导过程中具有重要作用。     

层迭灵芝子实体的体外抗肿瘤及免疫活性

【背景】层迭灵芝Ganoderma lobatum是灵芝属中的一个种,在民间有药用历史,但缺乏对其化学成分和药理活性的科学研究。【目的】以赤芝Ganoderma lingzhi子实体为参照,研究对比层迭灵芝子实体的抗肿瘤及免疫活性的强弱,探讨层迭灵芝的药用价值。【方法】采用化学分析及仪器分析的方法,比较2种灵芝子实体中三萜及多糖含量差异,并进行体外抗肿瘤及免疫活性研究。【结果】层迭灵芝和赤芝的子实体中三萜含量差异不大,分别为1.14%和1.21%,但2种灵芝中三萜化合物的种类差异较大。层迭灵芝子实体中的多糖含量较赤芝稍高,分别为3.60%和2.67%,2种子实体中多糖的重均分子量分布特征有所差别。2种灵芝醇提物对肿瘤细胞K562及SW620的增殖均具有一定的抑制活性,其中,层迭灵芝对SW620细胞具有较强的抑制活性,其IC50值达到了52.5μg/mL。2种灵芝水提物可以促进RAW 264.7细胞释放NO,说明两者均具有一定的免疫活性。【结论】层迭灵芝具有较好的抗肿瘤及免疫活性,可以作为药用开发的原料来源。     

灵芝子实体和孢子粉三萜含量的测定及体外抗肿瘤活性的评价

目的测定灵芝子实体和破壁灵芝孢子粉中的三萜含量,并评价其醇提物的体外抗肿瘤活性。方法采用高氯酸显色法测定灵芝子实体和破壁灵芝孢子粉中的三萜含量,采用磺酰罗丹明B蛋白染色法(sulforhodamine B,SRB)评价灵芝子实体和破壁灵芝孢子粉醇提物对宫颈癌He La细胞、结肠癌HCT-116细胞和乳腺癌MCF-7-ADM细胞的体外抗肿瘤活性。结果研究的灵芝子实体中三萜质量分数为0.92%,破壁灵芝孢子粉供试品中三萜质量分数实测值为2.95%,但是灵芝孢子粉中脂肪油对高氯酸显色法有极大的干扰,因此破壁灵芝孢子粉三萜的实测值可能远高于实际值。活性评价结果显示,灵芝子实体的醇提物在100μg/m L时,其对人宫颈癌He La细胞和乳腺癌MCF-7-ADM细胞表现出了较强的抑制作用,抑制率分别为94.54%和71.30%;对结肠癌HCT-116细胞表现出较弱的抑制作用,抑制率为20.68%。破壁灵芝孢子粉的醇提物在100μg/m L和10μg/m L时,其对宫颈癌He La细胞表现出了弱的抑制作用,对另外2种细胞系仅在100μg/m L时表现出较弱的抑制作用。结论灵芝子实体的醇提物含有三萜并具有较好的抗肿瘤活性,可以将其开发为辅助治疗癌症的药物或保健品。含有脂肪油的灵芝孢子粉直接采用高氯酸比色法测定会高估其三萜的含量,需要进一步开发准确、可行的测定方法。     

药用大型真菌灵芝中的三萜酸类成分研究

目的 对灵芝中的三萜类成分进行结构与活性研究。方法 通过氯仿对灵芝新鲜子实体的乙醇提取物进行萃取,进一步通过硅胶柱层析、中压液相（ODS色谱柱）、制备型HPLC对氯仿提取物中的化学成分进行分离、纯化。通过UV、ESI-MS、HRESI-MS、1H-NMR、13C-NMR、HSQC、HMBC、NOESY等光谱技术对所分离得到的化合物进行了准确的结构鉴定。通过-葡萄糖苷酶抑制模型对所分离得到的三萜类化合物进行活性评价。结果 从灵芝子实体中分离鉴定了7个三萜类成分,分别为：(1)Ganoderic acid X1,(2)Ganoderic acid C,(3)Deacetyl-ganoderic acid F,(4)Ganoderic B,(5)Lucienic acid A,(6)7-hydroxy-3,11,15-trioxo-lanosta-8-en-24→20s Lactone,(7)Methyl lucidenate D2。化合物1和6显示了一定的-葡萄糖苷酶抑制活性。结论 灵芝中的主要化学成分类型为羊毛脂烷型三萜及其降碳衍生物,其中化合物1为未见报道的新化合物。该类成分显示了一定的-葡萄糖苷酶抑制作用,具有较好的研究前景。