创面耐甲氧西林金黄色葡萄球菌消毒剂研究进展

创面MRSA对消毒剂产生抗性和MRSA易形成生物膜影响了创面消毒效果。本文就近年来的相关研究进展及临床策略进行了综述。     

mecA基因PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌

目的 应用mecA基因PCR扩增法检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin resistant staphylococcus aureus,MRSA）。方法 临床分离的70株金黄色葡萄球菌,应用mecA基因PCR扩增法鉴定MRSA,并与苯唑西林纸片扩散法进行比较。结果 70株金黄色葡萄球菌用PCR扩增法和纸片扩散法有6株鉴定有差异,4株。mecA基因阳性而纸片扩散法鉴定为敏感,1株mecA基因阳性纸片扩散法鉴定为临界耐药,1株mecA基因阴性却表现为苯唑西林耐药,2种方法符合率为91．43％。结论 mecA基因PCR扩增法可以准确、快速判定MRSA,特别是对隐匿型或低水平耐药菌株的检出有重要的价值。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分子分型研究进展

近年来,耐甲氧西林金黄色葡萄球菌在全世界各地感染率和分离率不断提高,已成为目前院内感染的重要病原菌之一。运用有效、可靠、廉价的分子分型方法对分析耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的流行病学特征及来源,对制定控制院感及流行的措施非常重要的。本研究概述了各种分子分型方法的原理及比较,如SCCmec分型、脉冲场凝胶电泳分型、多位点序列分型、葡萄球菌A蛋白分型和毒力因子分型等。脉冲场凝胶电泳仍然是暴发流行中MRSA分子分型的金标准,而其他分型方法更适合用于检测菌株的变异和建立国际监测。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌消毒剂和抗生素耐药相关基因的聚类分析

目的了解解放军第98医院临床分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)抗菌药物耐药基因存在状况及菌株亲缘性。方法采用聚合酶链反应及序列分析的方法检测50株MRSA中10种耐药相关基因,采用Average法对耐药基因进行聚类分析。结果50株MRSA中m ecA、aac(6')-aph(2')、tetM和erm基因均阳性,qacA、blaTEM、aph(3')-III和ant(4',4')基因阳性率分别为92.0%、40.0%、98.0%和4.0%,vanA和vanB基因均阴性。在1号、2号、3号菌株的qacA基因序列编码区域同一位点均有1个碱基发生有义突变(G→A),相应的苏氨酸(T)被异亮氨酸(I)所取代。根据耐药基因的聚类分析该50株MRSA可分为2个亚群,为院内感染所致。结论临床分离的MRSA耐药相关基因携带率很高;qacA基因存在有义突变为新的发现;MRSA可导致克隆传播院内感染,并存在暴发性流行。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的分子流行病学研究

了解我院患者耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的分子流行病学特点,为临床抗感染治疗提供依据。收集2007年1月~2008年9月我院分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌共54株,采用PCR进行SCCmec基因分型、葡萄球菌A蛋白（SPA）分型,并检测杀白细胞毒素（PVL）基因,同时应用脉冲场凝胶电泳（PFGE）进行同源性分析。54株MRSA菌株SCCmec基因分型为SCCmecⅡ型17株,SCCmecⅢ型33株,SCCmecⅣ型2株,SCCmecⅤ型2株;SPA基因分型将28株归属为t030,9株为t002,8株为t037,5株为t570,2株为t437,t163和t796各1株;PVL毒素检测只有2株SCCmecⅣ型菌株阳性;PFGE证实院内MRSA感染主要为2种克隆株传播,同时还有其他型别出现。本院MRSA流行传播的SCCmec基因型主要以Ⅲ型占优势,同时发现有携带PVL毒素的CA-MRSA分离株流行,应引起密切关注。     

社区获得性和医院获得性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PVL基因检测

目的 调查本地区患者各种标本中分离耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的杀白细胞素(PVL)基因携带情况,为临床MRSA的治疗及流行病学调查提供合理的依据.方法 对所分离的MRSA菌株进行药敏试验分析,同时采用PCR法检测mecA基因和PVL基因,比较社区获得性MRSA (CA-MRSA)和医院获得性MRSA (HA-MRSA)之间耐药性的比较及PVL基因携带率的比较.结果 对不同来源的9l株MRSA分离株耐药性分析,CA-MRSA对环丙沙星、利福平、庆大霉素和左旋氧氟沙星的敏感性明显高于HA-MRSA.经PCR检测发现,所有菌株均携带有mecA基因,21株携带有PVL基因,其中65株HA-MRSA有仅8株携带有PVL基因,而26株CA-MRSA中有13株携带有PVL基因,携带率差异有统计学意义.结论 本地区CA-MRSA是携带PVL基因的主要菌株,HA-MRSA对抗菌药物的耐药性明显高于CA-MRSA,尚未发现对万古霉素和替考拉宁的耐药菌株.     

ICU耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因检测与感染控制

目的:研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)SCCmec基因分型情况并对其耐药谱进行分析。方法:收集临床标本522例,应用多重PCR法对MRSA进行SCCmec基因分型,采用全自动微生物鉴定药敏分析仪进行细菌的鉴定及药敏试验,部分药敏试验采用K-B法。结果:522例中分离出146例MRSA,其中10株为SCCmec I型(6.84%),29株为SCCmec II型(19.86%),103株为SCCmecⅢ型(70.55%),未分型4株(2.74%)。MRSA分离株对奎奴普汀/达福普汀、替考拉宁、复方磺胺甲恶唑、万古霉素和利奈唑胺敏感,SCC mecII型与SCC mecIII型对氯霉素的耐药率分别为27.59%和11.65%,对利福平的耐药率分别为13.79%和2.91%,存在明显的差异性(P0.05),其余均呈高水平耐药。146例MRSA患者中治愈52例,占35.62%;感染相关死亡者12例,占8.22%。结论:ICU耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的基因检测以SCC mecIII型为主,且对抗菌药物呈多药耐药。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的检测和分型方法研究进展

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 (Methcillin - resistantStaphylococcus aureus,MRSA )引起的院内感染 (nosocomialinfection)已经成为全世界一个越来越严重的问题。要想尽快获得 MRSA的相关信息从而采取适当的控制感染的措施 ,就必须依靠快速、可靠的检测和分型方法。由于 MRSA对甲氧西林耐药性的不断变化 ,故虽然目前存在检测和分型方法很多 ,但仍很难提供一种最优方法。在这里 ,我们对多种方法进行了比较 ,以便大家能从中选出既准确又省时且适合自己实验室使用的检测的分型方法。1　检测方法1.1　完整结构水平1.1.1琼脂平皿 2倍稀释法…     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药及其检测方法

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）是引起医院感染的多重耐药菌,其有效的治疗药物为万古霉素。近年已发现对万古霉素耐受的金黄色葡萄球菌,金黄色葡萄球菌一旦对万古霉素耐药,临床将面临无药可供选择的局面。由于其所造成治疗上的困难,对其耐药机制的深入研究和该菌准确、及时的检出对于寻找新的治疗靶位和防止其播散有着极其重要的意义。本文就mecA耐药决定子、调节基因、染色体上的辅助基因对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药表达的影响及其表型和基因检测方法作一综述。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌染色体盒的研究进展

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的产生是由甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌（MSSA）获得外源性的SCCmec所致。MRSA菌株可以产生一种新的青霉素结合蛋白PBP2a,PBP2a降低了与β-内酰胺类抗生素的亲合力,从而对β-内酰胺类抗生素产生耐药性。PBP2a由mecA基因编码,mecA基因存在于葡萄球菌盒式染色体（Staphylococcal cassette chromosome mec,SCCmec）中,SCCmec是一种可移动的遗传元件,该元件还携带除mecA基因外的其他抗菌药物的耐药基因,造成多重耐药（Multidrug-resistance,MDR）。SCCmec目前主要分为8型,其中又分为若干亚型。SCCmec的基因型与MRSA的流行背景有关,不同地区的SCCmec基因分型分布可能不同。     

金黄色葡萄球菌耐消毒剂基因及抗生素耐药相关基因检测

目的 了解温州地区临床分离的金黄色葡萄球菌(SA)的耐药特点,探讨SA中耐β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类药物耐药基因及耐消毒剂基因(qacA)的存在情况.方法 采用聚合酶链式反应(PCR)法对SA进行β-内酰胺酶基因、氨基糖苷类修饰酶基因、四环素类基因和耐消毒剂基因检测.结果 PCR结果显示94株SA中耐药相关基因检出率mecA 53.2％、aac(6’)/aph(2")68.1％、aph(3’)-Ⅲ 37.2％、tetM 53.2％和qacA 7.4％,其中59株MRSA的耐药相关基因检出率分别为mecA 83.1％、aac(6’)/aph(2")86.4％、aph(3 ′)-Ⅲ 42.4％、tetM 76.4％和qacA 8.5％.结论 多数SA菌株存在耐β-内酰胺类、氨基糖苷类、四环素类等多种抗生素耐药基因,具有多重耐药特征,但尚未出现明显耐消毒剂状况.     

铜绿假单胞菌耐消毒剂基因检测

目的了解深圳市人民医院临床分离的铜绿假单胞菌耐季胺盐类消毒剂基因(qac)的检出率及基因型。方法收集深圳市人民医院近几年铜绿假单胞菌临床分离菌株63株,应用PCR法检测菌株的qacA/B、qacC、qacG、qacJ和qacE△1基因。结果63株铜绿假单胞菌中,qacE△1基因阳性51株(80.9%),qacA/B基因阳性5株(7.9%),其余的基因型未检出。结论我院临床分离的铜绿假单胞菌中耐季铵盐类消毒剂基因检出率较高,主要为qacE△1型。     

鲍曼不动杆菌耐消毒剂基因检测

目的 了解深圳市人医院鲍曼不动杆菌抗季铵盐类消毒剂基因的检出率及基因型特点.方法 收集深圳市人民医院临床标本中分离鲍曼不动杆菌67株,PCR检测分离株的qacA/B、qacE△1、qacC、qacG和qacJ 5种抗季铵盐类消毒剂基因.结果 67株鲍曼不动杆菌中qacE△l基因阳性42株(62.6％),qacA/B与qacG基因各有一菌株阳性,未检测出qacC或qacJ基因阳性菌株.结论 深圳市人医院鲍曼不动杆菌中抗季铵盐类消毒剂基因检出率较高,主要为qacE△1型.     

Physical and biochemical characterization of the qacA gene encoding antiseptic and disinfectant resistance in Staphylococcus aureus

We have previously cloned a 3.5 kb fragment from the Staphylococcus aureus multiresistance plasmid pSK1 which carries the qacA determinant responsible for linked resistance to acriflavine (Acr), ethidium bromide (Ebr), quaternary ammonium compounds (Qar), propamidine isethionate (Pir), and diamidinodiphenylamine dihydrochloride (Ddr). This report presents a biochemical and physical analysis of qacA and shows the widespread carriage of this gene on S. aureus resistance plasmids. Tn5 insertion mutagenesis defined the extent of qacA to within 2.40 kb of pSK1 DNA. Examination of the expression of insertion and deletion mutants of the cloned qacA sequences in both maxicells and minicells led to the association of a 50 kDa protein, designated QacA, with the AcrEbrQarPirDdr phenotype. Based on fluorimetric and isotopic assays used to determine the extent of accumulation of ethidium bromide by S. aureus strains harbouring pSK1, we propose that the basis of AcrEbrQarPirDdr in S. aureus is a qacA-mediated efflux system.     

鸡蛋生产链中沙门氏菌对抗生素及消毒剂的耐药性研究

为研究鸡蛋生产链中沙门氏菌的污染情况及抗生素、消毒剂耐药情况,本文鉴定了鸡蛋生产链中分离得到的111株沙门氏菌(Salmonella)血清型,并测定了抗生素和消毒剂对沙门氏菌的最小抑菌浓度(Minimum inhibitory concentrations, MICs),检测了其对抗生素和消毒剂的耐药基因的表达情况。研究结果表明,沙门氏菌对甲氧苄啶(Trimethoprim, TMP)耐药率最高(N=100,P=90.09%),对阿莫西林/克拉维酸(Amoxicillin and clavulanate, AMC)、头孢噻呋钠(Sodium ceftiofur, CFS)、庆大霉素(Gentamicin, CN)敏感。沙门氏菌共产生6种不同的耐药谱型,TMP是最主要的耐药谱型(N=36,P=32.43%),52.25%的菌株(N=58)具有多重耐药性。苯扎氯铵(Benzalkonium chloride, BC)与氯化十六烷基吡啶(Cetylpyridinium chloride, CPC)对沙门氏菌的MIC的范围分别为：8~128 μg/mL、8~256 μg/mL。相对于质控菌株Escherichia coli ATCC10536,101株沙门氏菌对BC和CPC同时具有较高的耐药性(P=90.99%),109株沙门氏菌对抗生素和消毒剂具有共同耐药性(P=98.20%)。抗生素耐药基因检出率最高为blaTEM(N=49, P=44.14%),未检测出qnrA、qnrB、qepA基因,仅检测出qacEΔ1消毒剂耐药基因(N=63, P=56.76%)。抗生素耐药基因sul1和消毒剂耐药基因qacEΔ1具有显著相关性(P<0.01)。S. Derby对TMP、土霉素(Oxytetracycline, OTC)、阿莫西林(Amoxicillin, AML)、环丙沙星(Ciprofloxacin, CIP)同时表现较高的耐药性,S. Derby检出了11种抗生素耐药基因,消毒剂耐药基因qacEΔ1的检出率为81.25%(N=52)。鸡场中养殖内环境沙门氏菌对抗生素和消毒剂的耐药率以及耐药基因检出率均高于养殖外环境,鸡蛋包装、储存及销售等环节中沙门氏菌耐药率及耐药基因检出率均较高。由此可见,鸡蛋生产链中沙门氏菌对抗生素、消毒剂耐药性较严重,且存在共同耐药的现象。因此,需要进一步规范防控鸡场中沙门氏菌,规范抗生素和消毒剂的使用以及加强鸡蛋生产链条中卫生安全的监管。     

Horizontal gene transfer boosts MRSA spreading

Mechanisms triggering methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) epidemics are poorly understood. A recent study provides new evidence that horizontal gene transfer may be the culprit for the emergence of new resistant and virulent MRSA clones.     

Substrate specificity and energetics of antiseptic and disinfectant resistance in Staphylococcus aureus

The complete sequence coding for the 57-kDa major soluble antigen of the salmonid fish pathogen, Renibacterium salmoninarum, was determined. The gene contained an opening reading frame of 1671 nucleotides coding for a protein of 557 amino acids with a calculated M(r) value of 57,190. The first 26 amino acids constituted a signal peptide. The deduced sequence for amino acid residues 27-61 was in agreement with the 35 N-terminal amino acid residues determined by microsequencing, suggesting the protein is synthesized as a 557-amino acid precursor and processed to produce a mature protein of M(r) 54,505. Two regions of the protein contained imperfect direct repeats. The first region contained two copies of an 81-residue repeat, the second contained five copies of an unrelated 25-residue repeat. Also, a perfect inverted repeat (including three in-frame UAA stop codons) was observed at the carboxyl-terminus of the gene.     

Transcriptional analysis of antibiotic resistance and virulence genes in multiresistant hospital-acquired MRSA

The staphylococcal chromosome cassette mec cannot solely explain the multiresistance phenotype or the relatively mild virulence profile of hospital-acquired methicillin-resistant Staphylococcus aureus (HA-MRSA). This study reports that several multiresistant HA-MRSA strains differently expressed genes that may support antibiotic resistance, modify the bacterial surface and influence the pathogenic process. Genes encoding efflux pumps (norA, arsB, emrB) and the macrolide resistance gene ermA were found to be commonly expressed by HA-MRSA strains, but not in the archetypal MRSA strain COL. At equivalent cell density, the agr system was considerably less activated in all MRSA strains (including COL) in comparison with a prototypic antibiotic-susceptible strain. These results are in contrast to those observed in recent community-acquired MRSA isolates and may partly explain how multiresistant HA-MRSA persist in the hospital setting.