S-腺苷蛋氨酸治疗胆汁淤积性肝病伴抑郁／焦虑的临床效果研究

目的：研究s-腺苷蛋氨酸治疗胆汁淤积性肝病伴抑郁／焦虑患者的临床效果。方法：选择2011年3月-2013年3月我院收治的51例不同病因的胆汁淤积性肝病（药物性肝损害13例、慢性乙型肝硬化14例、酒精性肝硬化11例、自身免疫性肝病6例、肝癌5例、胆管癌2例）并抑郁／焦虑的患者,予s-腺苷蛋氨酸1．0g治疗2周,应用SDS／SAS量表分别评估和比较治疗前后各组患者抑郁／焦虑程度的评分情况。结果：S-腺苷蛋氨酸治疗后,所有组别胆汁淤积性肝病肝病改善的临床总有效率94．12％,其中药物性肝损害、慢性乙型肝硬化、酒精性肝硬化、自身免疫性肝硬化总有效率均为100．00％,肝癌的有效率为60．00％,胆管癌的有效率为50．00％,药物性肝损害患者临床疗效与其他各组有差异（P〈0．05）;药物性肝病患者SDS和SAS评分均较治疗前显著降低（P〈0．05）。而慢性乙型肝硬化、酒精性肝硬化、自身免疫性肝病、肝癌、胆管癌患者SDS和SAS评分与治疗前相比均无统计学差异（P〉0．05）。结论：S-腺苷蛋氨酸可改善药物性胆汁淤积性肝病并轻、中度抑郁／焦虑患者的肝功能,并有效减轻其抑郁／焦虑情绪。     

S-腺苷蛋氨酸治疗胆汁淤积性肝病伴抑郁/焦虑的临床效果研究

目的:研究S-腺苷蛋氨酸治疗胆汁淤积性肝病伴抑郁/焦虑患者的临床效果。方法:选择2011年3月~2013年3月我院收治的51例不同病因的胆汁淤积性肝病(药物性肝损害13例、慢性乙型肝硬化14例、酒精性肝硬化11例、自身免疫性肝病6例、肝癌5例、胆管癌2例)并抑郁/焦虑的患者,予S-腺苷蛋氨酸1.0 g治疗2周,应用SDS/SAS量表分别评估和比较治疗前后各组患者抑郁/焦虑程度的评分情况。结果:S-腺苷蛋氨酸治疗后,所有组别胆汁淤积性肝病肝病改善的临床总有效率94.12%,其中药物性肝损害、慢性乙型肝硬化、酒精性肝硬化、自身免疫性肝硬化总有效率均为100.00%,肝癌的有效率为60.00%,胆管癌的有效率为50.00%,药物性肝损害患者临床疗效与其他各组有差异(P0.05);药物性肝病患者SDS和SAS评分均较治疗前显著降低(P0.05)。而慢性乙型肝硬化、酒精性肝硬化、自身免疫性肝病、肝癌、胆管癌患者SDS和SAS评分与治疗前相比均无统计学差异(P0.05)。结论:S-腺苷蛋氨酸可改善药物性胆汁淤积性肝病并轻、中度抑郁/焦虑患者的肝功能,并有效减轻其抑郁/焦虑情绪。     

川连抗癌的实验研究

目的通过对动物体内抗癌实验的观察研究,验证中药川连具有抑制和治疗肿瘤的生物学特性。方法选取80只昆明小鼠,于前肢皮下接种小鼠肉瘤细胞。将动物随机分为对照组和川连治疗组。治疗组每日给予川连汤剂稀释液（0．5mg,瘤内注射,1次／d）,连续10d;对照组注射同体积生理盐水。结果连续观察70d,治疗组小鼠存活率100％,对照组小鼠存活率为0％。结论中药川连具有抑制和治疗肿瘤作用,其抗肿瘤作用机制有待于进一步研究。     

α-荼异硫氰酸酯诱导小鼠胆汁淤积性肝纤维化及其炎症通路*

目的: 探讨α-荼异硫氰酸酯(ANIT)诱导的胆汁淤积性肝纤维化的发展及其炎症通路。方法: 将15只体重为(23±2) g的129/Sv小鼠随机分为对照组(n=5)和实验组(n=10)。对照组常规饲料喂养,实验组小鼠给予0.05% ANIT饲料食饲。实验组分别在14 d和28 d各处死5只小鼠,收集胆囊、血清、肝脏等标本。按试剂盒程序检测胆汁淤积生化指标,组织病理学评估肝细胞损伤程度,Q-PCR和WB分析肝纤维化、炎症反应等水平。结果: 与对照组相比,造模第2周ANIT -14 d组(A-D14)中的主要胆汁淤积指标总胆汁酸(TBA)从(3.2±0.9) μmol/L显著增加至(31.6±4.3) μmol/L,肝损伤指标谷草转氨酶(AST)和谷丙转氨酶(ALT)也显著升高(P＜0.05);纤维化因子金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)、单核细胞趋化因子(MCP-1)、I型胶原蛋白(Collagen I)表达高于对照组(P＜0.05);Collagen I和α-SMA纤维化蛋白表达均上调;肝脏胶原纤维大量沉积,纤维化已产生(P＜0.05)。炎症因子表达高于对照组,JNK、c-Jun、STAT3等均被激活(P＜0.05)。ANIT-28 d组(A-D28)中除AST、基质金属蛋白酶2(MMP-2),Collagen I指标稍有降低外,其余胆汁淤积、肝损伤、肝纤维化、炎症等指标继续上调或保持稳定(P＜ 0.05)。结论: 0.05%的ANIT饲料干预14 d,小鼠即发生明显的胆汁淤积性肝纤维化;28 d后,胆汁淤积性肝纤维化趋于稳定;JNK炎症通路在肝纤维化的发生发展中起着至关重要的作用。     

益生菌对急性肝内胆汁淤积大鼠肝组织NF-κB和MCP-1的影响

目的通过研究益生菌制剂对异硫氰酸萘酯（ANIT））所致的急性肝内胆汁淤积大鼠肝组织NF-κB和MCP-1表达的影响,进一步探讨益生菌防治急性肝内胆汁淤积肝损伤的作用机制。方法72只幼年雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠分为正常对照组（8只）、中毒组（32只）和干预组（32只）。中毒组及干预组幼鼠,按100mg／kg一次性灌服ANIT诱导急性肝内胆汁淤积病变,干预组于ANIT灌胃前3d开始灌服培菲康[4．2×10^8个活菌／（kg·d）]。观察各组在灌服ANIT后24h、48h、72h和96h血浆总胆红素（TB）、丙氨酸转氨酶（ALT）的浓度,同时用RT-PCR测定肝组织中MCP-1mRNA的表达,用免疫组化方法测定肝组织中NF-κB、MCP-1蛋白的表达,并在光学显微镜下观察肝脏的形态学改变。结果干预组大鼠血清ALT、TB在灌服ANIT后24h、48h、72h和96h各时间点升高的峰值较中毒组明显减低,且其肝组织MCP-1mRNA和蛋白表达水平以及NF-κB蛋白表达水平较中毒组低。结论益生菌能够改善急性肝内胆汁淤积肝脏功能,降低NF-κB、MCP-1的基因表达,对急性肝内胆汁淤积性肝损伤起到一定的防治作用。     

角叉菜胶诱导的慢性血栓小鼠模型的建立

目的 采用不同浓度的角叉菜胶溶液连续腹腔注射的方式处理小鼠,筛选慢性血栓小鼠模型的条件.方法 将70只ICR雄性小鼠随机分为7组,每组10只,即:空白组对照组、0.02％剂量组、0.04％剂量组、0.06％剂量组、0.08％剂量组、0.10％剂量组、0.20％剂量组.空白组小鼠腹腔注射生理盐水(0.01 mL/g),其...     

姜黄素对小鼠胆汁淤积性肝纤维化的改善作用及其机制研究*

目的:探讨姜黄素对小鼠胆管结扎所致的胆汁淤积性肝纤维化的保护作用,为肝纤维化治疗提供新的治疗方法。方法:42只健康成年雄性BALB/c小鼠随机分为假手术(n=6)处理组、假手术+姜黄素(n=6)处理组、胆管结扎(BDL)处理组(n=10)、BDL+姜黄素处理组(n=10),BDL+姜黄素+锌原卟啉(ZnPP)处理组(n=10)。BDL手术7 d后,假手术+姜黄素组、BDL+姜黄素组每日给予姜黄素(30 mg / kg)腹腔注射;BDL+姜黄素+ZnPP组每日给予姜黄素(30 mg / kg)以及nPP(50 μmol/ kg)腹腔注射;对于假手术组和BDL组,小鼠每天一次腹膜内注射等体积的盐水。整个给药过程持续7 d。小鼠BDL14 d后,取血和肝脏组织,检测谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)水平,观察肝组织病理形态变化、肝纤维化情况、检测肝组织中血红素加氧酶-1(HO-1)的蛋白表达。结果:与假手术组相比,BDL组小鼠肝脏胆囊肿大,血清谷草转氨酶(ALT)、谷丙转氨酶(AST)水平显著升高 (P＜0.05),同时,天狼星红染色及促纤维化相关基因的qRT-PCR结果显示肝脏出现胶原蛋白沉积,巨噬细胞及中性粒细胞免疫组化结果显示肝脏出现炎性细胞浸润;与BDL组相比,姜黄素治疗组血清ALT、AST水平明显降低(P＜0.05),胶原蛋白沉积及炎性细胞浸润情况有所改善,同时,补充姜黄素后HO-1表达升高(P＜0.05);对姜黄素治疗组给予HO-1活性抑制剂ZnPP发现,姜黄素对肝损伤的保护作用被逆转。结论:姜黄素可以改善BDL所致的肝脏炎症及肝纤维化,这种保护作用可能与姜黄素调节HO-1活性有关。     

胆汁淤积性肝硬化来源的微环境因子对肝脏干细胞分化的影响

该研究探讨了胆汁淤积性肝硬化病理微环境来源的细胞因子在胆总管结扎小鼠不同时间点的表达变化,且在体外致力寻找最优的细胞因子组合高效诱导肝脏干细胞HP14-19分化为成熟肝细胞。以Balb/c小鼠胆总管结扎(bile duct ligation,BDL)模拟胆汁淤积性肝硬化病理微环境;免疫组织化学检测胆总管结扎小鼠肝组织中细胞因子EGF、HGF及TGF-α的表达;以小鼠胚胎肝干细胞HP14-19细胞为研究对象,以不同浓度在不同时间点进行荧光素酶报告基因检测ALB-Gluc活性;qRT-PCR、Western blot检测肝细胞相关标志物表达;吲哚菁绿(indocyanine green,ICG)及过碘酸–希夫(periodicacid-schiff,PAS)染色检测肝细胞的成熟功能。结果显示,小鼠胆总管结扎能成功模拟胆汁淤积性肝硬化,并随结扎时间延长肝硬化程度加重;与对照相比,在EGF(10 ng/mL)、HGF(20 ng/mL)、TGF-α(20 ng/mL)单独诱导HP14-19细胞能有效增强ALB-Gluc活性(P0.05);且在EGF(10 ng/mL)、HGF(20 ng/mL)、TGF-α(20 ng/mL)联合诱导HP14-19细胞时显著增强ALBGluc活性(P0.05);qRT-PCR、Western-blot显示,ALB、CK18表达随时间增加而增加,而AFP表达则相反。ICG摄取及PAS染色阳性细胞数显著增加(P0.05)。因此,胆汁淤积性肝硬化病理微环境来源的细胞因子能有效促进肝脏干细胞肝向分化,将对细胞因子联合肝脏干细胞移植治疗胆汁淤积性肝硬化有一定的指导意义。     

大鼠胆汁淤积型肝病碱性磷酸酶及其同工酶的测定

建立胆汁淤积型肝病大鼠动脉模型,用麦胚凝集素（WGA）亲和色谱法分离总碱性磷酸酶（TALP）中的肝型碱性磷酸酶（LALP）和骨型碱性磷酸酶（BALP）,然后用高效液相色谱法（HPLC）定量;结果显示胆汁淤积型肝病组大鼠TALP于结扎后第5天升高,其中LALP明显升高,且出现较早,BALP基因无变化。本研究检测了大鼠胆汁淤积型肝病过程中血清TALP及LALP的变化情况,探讨LALP作为胆汁淤积型肝病早期辅助诊断灵敏指标的重要意义。     

田基黄总黄酮调节酒精性肝损伤小鼠肠道菌群及降低内毒素的研究

目的 使用中药田基黄调节酒精性肝病（ALD）小鼠的肠道菌群,降低小鼠血中内毒素（LPS）的含量,改善小鼠的肝脏功能,从而减少酒精对肝脏的损伤、降低ALD的发病率达到临床辅助治疗ALD的目的。方法 80只昆明小鼠（雌雄各半）,体质量26～37 g。正常饲养1周后,随机选取20只小鼠作为正常组,剩余小鼠作为酒精模型组,模型组小鼠灌胃56°北京红星二锅头白酒0.3 mL,2次/d,连续灌胃45 d,末次小鼠灌胃白酒后,禁食12 h但不禁水,于第46天早上随机选取模型组与正常组小鼠各10只,采用眼球采血法取小鼠血液,检测小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST)活性及血LPS水平来验证模型。造模成功后模型组余下50只小鼠随机分为自然恢复组、丽珠肠乐组以及田基黄总黄酮低、中、高剂量干预组（田基黄总黄酮剂量分别为10、20、40 mg/mL）,每组10只。分别于造模成功第0天、灌药7 d后,于无菌条件下取小鼠粪便对小鼠粪便中的大肠埃希菌、肠球菌、双歧杆菌和乳杆菌进行平板培养并计数。先称量小鼠体质量,采血检测小鼠血清ALT、AST活性及血LPS水平;最后处死小鼠取其肝脏称重,计算肝体比。结果...     

应用荧光原位杂交检测EB病毒BNLF-1基因在转基因小鼠子代染色体上的整合及其定位

应用荧光原位杂交技术研究了EB病毒潜伏膜蛋白基因(BNLF-1)在转基因小鼠子二代染色体上的整合及其定位。结果在两只子二代转基因小鼠中,分别观察80个和60个分裂相,出现杂交信号的核型分别为27和18个,检出率为33.8％和30％。转基因分别整合在14号染色体和10号染色体上。提示转基因BNLF-1已稳定整合到转基因小鼠的染色体上,并通过生殖细胞遗传给子代;推测转基因原代鼠的转基因整合可能是随机的多位点整合。     

胆汁淤积性肝损伤治疗靶点与药物治疗进展

胆汁淤积(cholestasis)是由于胆汁合成、分泌、转运、排泄等代谢功能紊乱引起的肝内胆汁淤留,肠中缺乏胆汁,血中胆汁成分过多的一种病理状态。胆汁酸信号传递过程以及胆汁淤积过程中炎症的发展和延续这些与胆汁淤积相关的肝损伤方面的分子机制已经取得重大进展。核受体作为肝脏疾病的靶标被广泛讨论,了解核受体在病理生理条件下的调节,是肝脏疾病的潜在治疗方法。本文基于中药治疗和分子免疫机制受体水平方面对胆汁淤积性肝病进行综述。     

MTA1转基因小鼠的构建及鉴定

目的将人的MTAl外源基因整合到C57BL／6J小鼠中,构建稳定高表达MTAl的小鼠模型。方法通过RT—PCR方法克隆人的MTAl编码序列,将MTAl插入真核表达载体pcDNA3．1构建pcDNA3．1-MTAl载体,回收片段后利用显微注射技术将目的基因片段注入到受精卵的雄原核中,使用MTAl特异性的引物经PCR鉴定出基因型阳性的转基因小鼠,再利用Western—blot及免疫组化方法检测MTAl在转基因小鼠全身级织表达情况。结果成功构建了MTAl转基因注射片段。在320枚显微注射受精卵中挑选出300枚存活卵移植到10只ICR小鼠假孕受体的输卵管中,10只ICR小鼠均怀孕,移植成功率为100％,共生出子代鼠80只,经PCR检测其中共有9只整合了MTAl基因,整合率为11．25％。经PCR鉴定MTAl整合阳性的F1代小鼠,再经Western—blot和免疫组化分析检测MTAl表达水平在脑、肺、肝、肠等组织中表达明显增高,肾、骨骼肌表达无差异。结论成功构建了脑、肝、肺、结肠高表达MTAl的转基因小鼠,为进一步MTAl研究奠定了良好的研究模型。     

细小病毒非结构蛋白转基因小鼠模型建立

将小鼠乳腺癌病毒启动子控制的细小病毒非结构蛋白基因(长5.7kb)氯化铯超速离心,纯化透析后用显微注射法导入C57BL/SJL F_1小鼠受精卵雄核,植入假孕母鼠输卵管,得成活小鼠15只。抽取鼠尾DNA,对其中10只小鼠作PCR和southern blot鉴定,其中4只(40％)整合有目的基因。对首建者B_6()的8只子代小鼠鉴定,3只(37.5％)整合有目的基因。说明导入的目的基因能传代。     

流行性乙型脑炎强毒株和弱毒疫苗株SA14-14-2对猴子和小鼠的致病性和病理学研究

为了解乙型脑炎 (乙脑 )减毒活疫苗弱毒株SA14 14 2神经毒力的减弱程度 ,本文对弱毒株及其原株SA14强毒株进行了猴体和小白鼠的致病性和病理学变化的比较试验。SA14强毒株病毒 (原始滴度 6 15× 10 8/ml) ,以10 -2 和 10 -4 ～ 10 -7不同稀释度于丘脑两侧合并脊髓注射恒河猴 ,每组除 10 -4 1只外其余均为 2只。另以 10 -4 和10 -6～ 10 -8不同稀释度脑内注射小鼠 ,每组 8只。结果猴子除 10 -4 1只外其余全部发病死亡 ,小鼠则全部死亡。SA14 14 2以 1∶5稀释病毒 (原始滴度为 8× 10 6/ml)按同样方法注射 4只猴和 30只小鼠 ,结果全部存活。另以SA1410 -2 病毒皮下注射 3只猴未死亡 ,而以 10 -1皮下注射 30只小鼠时则全部死亡。SA14 14 2以 1∶5稀释病毒皮下注射小鼠时则全部存活。病理组织学结果显示二种动物接种SA14株强毒后主要表现为弥散性脑脊髓炎 ,以神经细胞坏死为其主要特征和最突出的病变。猴子的病变以脊髓前角、丘脑和中脑黑质为重 ,小鼠的病变则以大脑皮质、海马部最重 ,脊髓的病变却比脑轻。接种弱毒株的动物则仅有轻微炎症反应、神经细胞坏死极少出现。以上结果表明以脑内接种时恒河猴和小鼠对乙脑病毒均高度敏感 ,以皮下接种时小鼠的敏感性高于猴子。乙脑SA14 14 2弱毒株的神经毒力包括致     

不同能量CO2点阵激光对博来霉素诱导的小鼠增生性瘢痕的作用及Hedgehog信号通路的影响

目的:探讨不同能量CO_2点阵激光对博莱霉素诱导的小鼠增生性瘢痕模型的作用及其对瘢痕组织中Hedgehog信号通路的影响。方法:于雄性C57BL/6J小鼠背部皮肤注射博来霉素(1 mg/d,4周)制作增生性瘢痕模型,另取4只小鼠背部注射PBS缓冲液作为对照。造模成功之后,随机将小鼠分为瘢痕对照组(模型组),10 mj激光治疗组(10 mj组)和20 mj激光治疗组(20 mj组),每组6只小鼠。10 mj组小鼠给予10 mj激光治疗(共3次,每次间隔2周);20 mj组小鼠给予20 mj激光治疗(共3次,每次间隔2周)。治疗结束后,处死小鼠,取瘢痕全层标本进行病理组织学染色观察(HE、Masson染色)以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、GLi1免疫荧光观察。结果:①我们成功复制出小鼠增生性瘢痕模型;②20 mj CO_2点阵激光治疗可有效修复瘢痕组织,经治疗后皮肤瘢痕程度显著减轻,同时可降低真皮层厚度和减轻瘢痕组织的纤维化程度;③免疫荧光染色结果提示,CO_2点阵激光可显著减少小鼠皮肤增生性瘢痕中α-SMA、GLi1表达。结论:于小鼠的背部皮肤注射博莱霉素可建立增生性瘢痕模型。CO_2点阵激光为治疗增生性瘢一种有效的治疗方式,其作用可能与其对Hedgehog信号通路的抑制有关。     

长爪沙鼠小鼠肝炎病毒（MHV）RT-PCR检测方法的建立及初步应用

目的建立长爪沙鼠小鼠肝炎病毒（MHV）RT-PCR检测方法,应用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。方法根据已发表的小鼠肝炎病毒（MHV）S基因序列,设计合成引物。提取MHV细胞毒RNA,以其为模板,进行PCR扩增。优化反应条件,进行特异性、敏感性、稳定性、重复性试验。并对65只长爪沙鼠及12只小鼠进行检测。结果建立的MHVRT-PCR检测方法特异、敏感、稳定。以MHVRNA逆转录产物为模板,所能检测RNA最小模板浓度为3．1pg／μL,可检测病毒最小滴度为10^-3／mL。65只沙鼠经RT-PCR检测,均为阴性,12只小鼠经RT．PCR检测,有3只MHV阳性,测序结果与Genbank中MHV核酸序列同源性均为97％。结论建立的长爪沙鼠小鼠肝炎病毒（MHV）RT-PCR检测方法可用于长爪沙鼠、小鼠等实验动物MHV的检测。     

携带IL-10基因的双歧杆菌对 溃疡性结肠炎小鼠肠道屏障功能的影响

目的观察表达IL-10基因的双歧杆菌对溃疡性结肠炎(UC)小鼠肠道屏障功能的影响,进一步探讨转基因双歧杆菌治疗UC的相关机制。方法 25只小鼠分为空白对照组、结肠炎组(UC-blank组)、双歧杆菌治疗组(UC-bacteria组)、空质粒双歧杆菌治疗组(UC-pBBAD/X-bacteria组)和表达IL-10基因双歧杆菌治疗组(UC-BL-hIL-10-bacteria组),每组5只。采用5%DSS诱导建立UC小鼠模型,利用前期研究已成功筛选出的可稳定表达hIL-10蛋白的BL-hIL-10菌株对小鼠进行治疗。采用HE染色评估小鼠结肠炎症情况;采用荧光定量PCR检测小鼠结肠组织Claudin1、2、4、5、7和8的表达水平;计算小鼠DAI。结果 (1)BL-hIL-10菌株可以降低UC小鼠DAI,减轻UC小鼠结肠组织炎症程度。(2)BL-hIL-10菌株能下调UC小鼠结肠组织Claudin2表达水平,同时能够上调Claudin1、4、5、7和8的表达水平。(3)UC-BL-hIL-10-bacteria组UC小鼠的治疗效果明显优于UC-bacteria组和UC-pBBAD/Xbacteria组。结论 BL-hIL-10菌株能改善UC小鼠结肠黏膜的通透性,其机制可能与其能上调Claudin1、4、5、7和8的表达水平,同时降低Claudin-2的表达水平有关。     

β片层阻断肽H102对双转基因AD小鼠海马脑区APP代谢酶的影响

目的:探讨β片层阻断肽H102对APP/PS1双转基因小鼠(AD小鼠)海马脑区β淀粉样蛋白前体蛋白(APP)代谢分泌酶以及学习记忆能力的影响。方法:将6月龄大小的30只AD模型小鼠随机分为AD组和H102组,相同月龄、数量和背景的C57BL/6J小鼠作为对照组(n=15)。H102组每日经鼻腔给予H102溶液(5.8 mg/kg)5μl,对照组及AD组每日给予辅料溶液5μl。给药30 d后,使用Morris水迷宫的方法检测各组小鼠的空间记忆能力变化,采用免疫组织化学方法及Western blot技术测定海马脑区α分泌酶(ADAM10和ADAM17)、β分泌酶(BACE1)及γ分泌酶(PS1,APH1a,PEN2)在小鼠海马中的表达。结果:与对照组比较,AD组小鼠海马脑区BACE1、PS1、PEN-2、APH1-a蛋白表达显著升高,ADAM10、ADAM17蛋白表达显著降低(P0.05);与模型组相比,H102能够明显提高AD小鼠的空间学习记忆能力,明显降低海马脑区BACE1、PS1、PEN-2、APH1-a蛋白的表达,明显提高ADAM10、ADAM17蛋白的表达(P0.05)。结论:β片层阻断肽H102能够减少海马脑区Aβ的生成,提高海马脑区α分泌酶的活性,降低β和γ分泌酶的活性,改善AD小鼠的学习记忆能力。     

软骨组织特异性表达Cre重组酶转基因小鼠的研制和鉴定

构建了含有软骨组织特异性Ⅱ型胶原A1启动子和Cre重组酶基因的转基因载体pcol2Al-Cre。323枚小鼠受精卵经显微注射引入转基因片段后,分别移植至14只假孕母鼠的输卵管使其发育。共得到仔鼠52只,PCR结果显示其中10只小鼠基因组上有Cre基因的整合,整合率为19．2％。用整合有Cre基因的转基因小鼠与基因组上携带LoxP位点的条件基因打靶小鼠交配,以检测Cre酶介导的重组及其组织特异性。PCR结果表明：col2Al-Cre转基因小鼠软骨组织中表达的Cre重组酶成功地介导了LoxP之间的重组。此结果通过Southern杂交得到了进一步的证实。