大肠埃希菌异质性耐药的研究进展

大肠埃希菌(Escherichia coli)是人类和动物中常见细菌病原体,E.coli已对多种抗菌药物产生耐药,且由于抗菌药物选择压力越来越大,致使菌株的适应性和致病性更强,耐药的传播更快、定植率更高,给全球流行病学和临床治疗带来极大的挑战。近年来,E.coli的异质性耐药(heteroresistance,HR)相关研究相继被报道,异质性耐药是指细菌中的同源亚群对某种抗菌药物表现出不同的敏感性,是敏感菌进化为耐药菌的中间阶段,不同于完全耐药,异质性耐药在临床上不易及时检出,常导致临床抗菌药物治疗失败。因此,为有效防控E.coli感染及耐药的演变,深入剖析E.coli异质性耐药的流行特征及可能的机制尤为重要,本文就E.coli的异质性耐药研究进行了梳理,并对异质性耐药从表型特征、检测方法和可能的机制等方面进行了概述。旨在加强对E.coli异质性耐药的认识和研究,以期为全面了解E.coli耐药过程及发生机制、优化抗菌药物使用策略、减缓完全耐药菌种的出现提供参考。     

大肠埃希菌耐药性监测及耐药质粒的研究

为了解医院内感染大肠埃希菌的耐药情况,探讨其耐药发生、流行及传播机制,对从临床分离的32株大肠埃希菌进行了药敏试验、质粒图谱分析以及质粒接合、转化试验,结果表明大肠埃希菌对氨苄青霉素的耐药率＞88%,对庆大霉素的耐药率＞75%,其中28株大肠埃希菌检出质粒,均含有一条分子量为5.66 Mu的质粒带,是医院内感染大肠埃希菌的流行质粒.质粒的接合、转化试验证实了质粒具有横向传播的特点,是细菌产生耐药的主要原因.     

中药抗耐药大肠埃希菌研究进展

近年来,耐药大肠埃希菌感染日趋严重,产超广谱β-内酰胺酶的大肠埃希菌株不断增加,由于细菌的多重耐药性,西药抗生素治疗效果差.医药工作者将新药物研究的方向投向中药.本研究就近年来中药抗耐药大肠埃希菌研究进展进行综述.     

急性腹泻患者致泻性大肠埃希菌流行情况及耐药性分析

目的 了解致泻性大肠埃希菌（DEC）在急性腹泻患者中的分布及对常用抗菌药物的敏感性,为疾病的防控和治疗提供依据。方法 收集2014年1月至2015年12月期间就诊于浙江大学医学院附属第一医院急性腹泻患者粪便标本,采用常规病原菌检验流程对常见肠道致病菌进行分离培养鉴定,分离到的疑似大肠埃希菌采用多重PCR和单重PCR进行鉴定、分型,采用纸片扩散法（K-B法）对各型DEC进行18种常用药物敏感试验。结果 从1 019例急性腹泻患者标本中分离到396株病原菌,其中DEC 230株,分离率为22.6%,占所有分离菌株的58.1%,居病原菌首位。230株DEC中,ETEC占56.5%,EAEC占30.4%,EPEC占8.7%,STEC占0.4%,混合型DEC占0.9%,未发现EIEC。各型DEC全年均有检出,其中夏季（6~8月）分离率最高,达24.0%,患者主要分布在19~45岁,男女检出率分别为21.8%和23.2%,差异无统计学意义。DEC对氨苄西林的耐药率最高,达49.3%,对头孢唑林、复方新诺明、氨苄西林/舒巴坦的耐药率分别为46.4%、35.7%、30.9%,其余抗菌药物耐药率均低于15.0%,未出现亚胺培南耐药株。207株DEC中,产ESBLs菌株占41.1%,多重耐药菌株占44.9%。结论 DEC是本地区急性腹泻最常见的细菌性病原,是临床肠道感染中不可忽视的病原之一,尤其是同时携带多型别毒力基因菌株及产ESBLs菌株和多重耐药菌。长期持续监测其分布及耐药趋势,对疾病的预防、治疗具有重要意义。     

质粒介导的大肠埃希菌对喹诺酮类抗菌药物耐药机制的研究

目的了解临床分离的耐环丙沙星的大肠埃希菌质粒介导的喹诺酮类耐药基因的携带情况,并进行相关耐药机制的分析。方法采用VITEK-2全自动微生物检测系统鉴定细菌,用K-B法检测细菌对16种常用抗生素的敏感性,采用聚合酶链反应检测喹诺酮类耐药基因qnrS、qnrA、qnrB、qepA和aac（6′）-Ib,并对阳性的aac（6′）-Ib结果进行测序分析。结果 30株耐环丙沙星的大肠埃希菌中,2株（6.67%）检出qepA基因,8株（26.67%）检出aac（6′）-Ib基因,经测序证实其中6株为aac（6）′-Ib-cr（20.0%）。未检出qnrS、qnrA和qnrB基因。结论对环丙沙星耐药的大肠埃希菌携带aac（6′）-Ib-cr和qepA基因,引起质粒介导的对喹诺酮类抗菌药物的低水平耐药。     

粪便中大肠埃希菌的分离鉴定

2004年4月采集大连金州湾沿岸畜禽养殖场猪、牛、鸡和某中学人粪便样品。经改良的生化鉴定方法鉴定,得大肠埃希菌(Escherichia coli)猪源75株、牛源78株、鸡源69株、人源68株,占粪大肠菌比率分别为85.23%、92.86%、80.23%、80.00%。为验证改良的生化鉴定方法准确性,从中随机选取8株E.coli,扩增16S rRNA序列并与Genebank中E.coli16S序列比对,确定这8株细菌与E.coli同源相似率达99%以上,进而验证改良的生化鉴定方法的可行性。     

大肠埃希菌耐药与抗菌药物使用量的相关性研究

目的探讨大肠埃希菌的耐药率与多种抗菌药物使用量之间的相关关系。方法计算主要抗菌药物每百床日的用药频度（DDDs）,以及温州医学院附属第一医院院内感染大肠埃希菌的耐药率,并采用多元线性回归的方法进行分析。结果大肠埃希菌对头孢他啶的耐药率与头孢哌酮和头孢克罗的用量呈负相关,与头孢他啶的用量呈正相关;对庆大霉素的耐药率与头孢他啶、哌拉西林的用量里负相关;对亚胺培南的耐药率与哌拉西林用量呈正相关,与季度呈负相关;对复方新诺明的耐药率与阿米卡星用量呈正相关;对呋喃妥因的耐药率与头孢他啶、去甲万古霉素用量呈负相关。结论在大肠埃希菌耐药水平和抗菌药物使用量之间存在相关关系。     

利用胞内代谢物变化预测大肠埃希菌耐药性

目的利用胞内代谢物量的差异达到预测大肠埃希氏菌的药物敏感性结果。方法收集临床分离大肠埃希菌120株,在头孢他啶存在条件下培养4 h。收集菌体,测定细胞内化合物然后进行多变量分析。结果 120株大肠埃希菌的聚类分析结果很好地体现了药物敏感性特征,57株耐药菌中,有5株被误判,准确率为91%;47株中敏菌株中,有8株被误判,准确率为83%;16株敏感菌中有2株被误判;准确率为88%。结论该方法能够有效预测菌株的药敏结果,而且快速可靠。     

碳青霉烯类耐药大肠埃希菌耐药机制研究

目的研究碳青霉烯类耐药大肠埃希菌的的耐药机制。方法收集本院2011年8月至2012年8月的碳青霉烯类耐药大肠埃希菌,采用琼脂稀释法进行药敏试验;改良Hodge试验筛查菌株是否产碳青霉烯酶;利用聚合酶链反应扩增KPC、IMP、VIM、NDM、SHV、TEM、CTX-M-1组、CTX-M-9组耐药基因,并对扩增产物进行测序。结果 21株实验菌均为多重耐药菌,对17种抗菌药物中耐药率60%的有11种,其中耐药率90%的有5种,分别为头孢他啶、头孢噻肟、头孢西丁、环丙沙星和氨曲南。耐药率最低的为多粘菌素B,均表现为敏感。9株改良Hodge试验阳性。6株携带碳青霉烯类耐药基因(3株NDM-1阳性、3株IMP阳性)。共有18株检出β-内酰胺类耐药基因。结论该院碳青霉烯类耐药大肠埃希菌携带的碳青霉烯酶基因以NDM-1和IMP基因较常见。     

粪便中大肠埃希菌分离方法的筛选

比较了滤膜法、涂布法和纸片法对粪便中大肠埃希菌的分离效果。通过对分离粪便大肠埃希菌的数量可知,纸片法与m—TEC培养基上滤膜法分离的大肠埃希菌数量结果基本一致。m—TEC培养基滤膜法分离的大肠埃希菌平均数量分别是伊红美蓝培养基涂布法分离大肠埃希菌平均数量的1．4倍、伊红美蓝培养基滤膜法分离大肠埃希菌平均数量的2．8倍、m—TEC培养基涂布法分离大肠埃希菌平均数量的2．25倍。分离粪便样品中大肠埃希菌选择滤膜法用m—TEC培齐基进行分离为最佳分离方法。     

合肥地区动物源性大肠埃希菌的血清型分布与耐药性分析

目的了解安徽省合肥地区动物源性大肠埃希菌的血清型分布和耐药状况,以期筛选出菌苗株和指导临床合理用药。方法对46份疑似大肠埃希菌病病料进行细菌分离培养、生化编码鉴定和致病性测定。采用玻片凝集试验对分离到的46株致病性大肠埃希菌进行血清型鉴定。同时分别采用K-B纸片琼脂扩散法和双纸片增效法检测致病性大肠埃希菌的耐药性和ESBLs阳性菌株。结果46株致病性大肠埃希菌中,除7株细菌未能定型外,其余39株细菌分布于10个血清型,O127：K63血清型为优势血清型,占定型菌株的33．33％。46株致病性大肠埃希菌对21种抗菌药物均呈现不同程度的耐药性,15个ESBLs阳性菌株表现为多重耐药,对各种抗菌药物的耐药率均高于ESBLs阴性菌株。结论O127：K63血清型为优势血清型,可作为菌苗株。合肥地区动物源性大肠埃希菌耐药性较为严重,尤其是产ESBLs大肠埃希菌多重耐药更为突出。     

血培养中病原菌的分布及其耐药状况分析

目的:了解血培养中病原菌的菌群分布及其耐药状况.方法:血培养标本用Bact/Alert-120自动血液分析系统和Vitek60鉴定仪进行血培养及鉴定,药敏用K-B法,用Whonet 5软件进行分析.结果:在3 680份血培养标本中分离出细菌348株,阳性检出率为9.4%,病原菌中以革兰阴性杆菌为主共分离出189株,占54.3%,其中主要为大肠埃希菌占15.5%,肺炎克雷伯菌占12.4%;革兰阳性菌138株,占39.7%,主要为凝固酶阴性葡萄球菌占14.9%,金黄色葡萄球菌占12.1%;链球菌占6.6%.血培养中的革兰阴性杆菌对亚胺培南、阿米卡星、头孢哌酮/舒巴坦治疗较为敏感:革兰阳性球菌对万古霉素和替考拉宁较为敏感.结论:肠杆菌科细菌和葡萄球菌是血培养中的主要病原菌,而产ESBLs菌株、MRSA、MRCNS耐药严重,提示应高度重视合理使用抗生素,减少细菌耐药性产生,以提高临床治疗效果.     

CRISPR technology: A versatile tool to model,screen, and reverse drug resistance in cancer

BackgroundDrug resistance is a serious challenge in cancer treatment that can render chemotherapy a failure. Understanding the mechanisms behind drug resistance and developing novel therapeutic approaches are cardinal steps in overcoming this issue. Clustered regularly interspaced short palindrome repeats (CRISPR) gene-editing technology has proven to be a useful tool to study cancer drug resistance mechanisms and target the responsible genes. In this review, we evaluated original research studies that used the CRISPR tool in three areas related to drug resistance, namely screening resistance-related genes, generating modified models of resistant cells and animals, and removing resistance by genetic manipulation. We reported the targeted genes, study models, and drug groups in these studies. In addition to discussing different applications of CRISPR technology in cancer drug resistance, we analyzed drug resistance mechanisms and provided examples of CRISPR’s role in studying them. Although CRISPR is a powerful tool for examining drug resistance and sensitizing resistant cells to chemotherapy, more studies are required to overcome its disadvantages, such as off-target effects, immunotoxicity, and inefficient delivery of CRISPR/cas9 into the cells.     

2009—2017年大肠埃希菌临床分布及耐药性分析

目的了解大肠埃希菌(Escherichia coli,E.coli)临床分布及耐药情况,为制定预防措施及指导临床合理用药提供依据。方法对文山州人民医院分离的8 820株E.coli菌株进行分离、鉴定和描述性流行病学分析;同时,对被检出的产超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamase, ESBLs)E.coli菌株进行药敏试验。结果 2012年产ESBLs菌株阳性率最高,达65.40%;2014年检测出E.coli株数1 721株,占19.51%;E.coli菌株科室分布,泌尿外科最多1 961株;标本类型以中段尿为主;年龄分布集中在>45~60岁组,检出2 433株,占27.59%;药敏试验显示,产ESBLs菌株对大多数抗生素耐药率明显高于非产ESBLs菌株,对抗生素的耐药性不断发生变化。结论 E.coli菌株检出率上升,产ESBLs菌株阳性率呈现先迅速上升后有缓慢下降的趋势。E.coli耐药形势严峻,医院应加强监测及耐药性分析,严格执行抗生素使用分级制度,定期反馈临床监测数据,为医生合理使用抗生素提供科学依据。     

产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的耐药性分析

目的了解杭州市第一人民医院产ESBLs大肠埃希菌的发生比例及对临床上常用的24种抗菌药物的耐药率变化.方法收集2003 2004年该院各类临床标本中分离的大肠埃希菌,采用NCCLS推荐的表型确证试验方法检测ESBLs菌株;药敏试验采用纸片扩散法.结果2003年与2004年,产ESBLs的大肠埃希菌分离率分别为46.11%（184/399）、57.44%（386/672）（P=0.0003）;2年来,ESBLs阳性菌对临床常用的24种药物表现出较高的耐药性,耐药率上升非常显著（P=0.0005）;非产ESBLs大肠埃希菌对大多数抗菌药物仍保持较高的敏感率;但2004年ESBLs阴性的大肠埃希菌的耐药性,比2003年显著上升（χ^2=37.785,P=0.0005）.结论尽早开展产ESBLs菌的监测,合理使用抗菌药物,对于有效控制产ESBLs菌的播散与流行是一项重要措施.     

ICU病区大肠埃希菌中qnr基因的分布与耐药性的研究

目的调查温州医科大学附属第一医院ICU病区分离的大肠埃希菌基因的分布以及与耐药谱的关系,并初步探讨其在分子流行病学中的作用。方法收集2012年1-9月ICU病区分离的大肠埃希菌76株进行qnr基因检测,并通过DNA直接测序确定;分析qnr基因在ICU病区分离的大肠埃希菌的分布及其与耐药性的关系。结果根据PCR产物片段大小及测序分析,76株大肠埃希菌中共有qm基因阳性菌株46株,阳性率为60. 5% ;对阳性菌株进行DNA测序、BLAST比对,其中25株为qnrB基因,17株为qnrS基因阳性,12株基因阳性,未检测到qwC和qnrD基因。在46株qnr基因阳性菌株中有38株为产ESBL菌株,而在qnr阴性菌株中仅有5株ESBL阳性。结论该院ICU分离大肠埃希菌qnr基因携带严重,呈现出多重耐药性,多伴随呈现为产ESBL菌株。     

临床标本优势菌种分布及耐药分析

目的了解临床标本中微生物分离率及其耐药性,为微生物检验教学改革提供临床依据。方法对近一年来临床标本的细菌分离情况及耐药性进行回顾性统计和分析,使用SPSS 13.0软件,采用计数资料进行统计描述分析。结果从2 989份标本中分离出644株病原菌,其中G-杆菌占67.7%,G+球菌占23.29%,真菌58株占9.01%。药敏结果显示大多细菌呈现泛耐药性。结论临床感染以G-杆菌为主,G-杆菌又以NFGNB常见,而G+球菌中肠球菌占主要地位。且这些细菌对常用抗菌药物耐药严重。     

24株鸡源丁酸梭菌的分离鉴定及耐药基因与毒力基因携带情况

[目的]旨在对鸡源丁酸梭菌进行分离鉴定与安全性评估.[方法]利用厌氧培养方法对源自汶上芦花鸡与SPF鸡粪便样品进行丁酸梭菌的分离与纯化,挑选可疑菌落进行微生物质谱鉴定,进一步通过16S rRNA基因测序进行鉴定,16S rRNA测序结果与NCBI核苷酸数据库中丁酸梭菌的16S rRNA序列进行同源性分析;同时,进行所有...     

临床分离志贺菌中CRISPR/Cas系统的分布及其与毒力基因的关系

【目的】了解临床分离志贺菌中CRISPR/Cas系统的分布特征并分析其与毒力基因的关系。【方法】以聚合酶链式反应(PCR)方法,采用10对引物分别对57株临床分离志贺菌中CRISPR1、cas2-cas1、cas6e-cas5、cas7、cse2、cse1-cas3基因和毒力基因ipaH、ial、ipaBCD、virA进行检测。对CRISPR1的PCR结果进行测序,并用CRISPR finder在线软件对CRISPR1基因座进行分析。通过卡方检验初步分析CRISPR/Cas系统与毒力基因的关系。【结果】测序结果显示,CRISPR1基因座中间隔序列数目较少且在不同菌株间一致性较高;57株志贺菌中,84.2% (48/57)的志贺菌中可检测到CRISPR/Cas系统,其中68.8% (33/48)的志贺菌中cas6e-cas5基因或(和) cse2基因中发现插入序列;毒力基因ipaH、ial、virA、ipaBCD的检出率依次为100%、100%、98.2%和87.7%;毒力基因ipaBCD的阳性率与活性CRISPR/Cas系统的分布无关(P>0.05)。【结论】CRISPR/Cas系统广泛存在于临床分离志贺菌中;部分cas基因中有插入序列;并未发现志贺菌中活性CRISPR/Cas系统与毒力基因的分布有关。     

156例尿路感染大肠埃希菌耐药性分析

目的探讨大肠埃希菌尿路感染的临床发病特点及对抗生素的耐药情况。方法对2001年1月至2005年12月尿路感染患者尿培养分离出的156株大肠埃希菌进行耐药性分析,用纸片扩散法表型确证试验检测ESBLs。结果大肠埃希菌耐药率最低的抗菌药物是亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦、氧哌嗪青霉素/他唑巴坦,分别为1.28%、1.92%、3.21%、5.13%;对氨苄西林、氟喹诺酮类、庆大霉素、复方新诺明耐药率均>70%。产ESBLs的大肠埃希菌对亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮/舒巴坦、氧哌嗪青霉素/他唑巴坦的耐药性均<10%,对氨苄西林、头孢菌素类、氟喹诺酮类均表现出很强的耐药性。结论治疗大肠埃希菌感染时,需根据药敏结果选用碳青霉烯类、β-内酰胺类/β-内酰胺酶抑制剂等。