双通道TaqMan实时荧光PCR应用于别嘌呤醇不良反应相关基因HLA-B*58:01的检测与验证

摘要 目的：建立一种双通道TaqMan实时荧光PCR方法,应用于别嘌呤醇不良反应相关基因HLA-B*58:01的快速基因检测,并验证该方法的灵敏度、特异性、重复性及可靠性等性能指标。方法：针对HLA-B*58:01 等位基因序列设计引物和Taqman 探针,建立一种双通道TaqMan实时荧光PCR检测方法,收集陕西省人民医院、浙江大学医学院附属第二医院、浙江大学医学院附属邵逸夫医院三家医院收治的1158例临床诊断为痛风或血清尿酸高患者的外周血标本,采用双盲对照实验,分别采用双通道TaqMan实时荧光PCR法与已获审批的商业试剂盒共同检测所有标本,对比两种方法的检测结果进而评价该TaqMan实时荧光PCR方法的临床性能。结果：双通道TaqMan实时荧光PCR法特异性高,稳定可靠,可检测低至1 ng/?滋L的阳性样本;采用双通道TaqMan实时荧光PCR法与已获审批的商业试剂盒在1158份患者标本中检出的HLA-B*58:01阳性及阴性标本均相同,阳性标本147例,阴性标本1011例,该组患者HLA-B*58:01基因携带率为12.69%,两种方法符合率为100%（1158/1158）,两组实验结果数据采用SPSS分析P=1.000,差异无统计学意义。所有受检者HLA-B* 58:01携带率为12.69 % （147 /1158）。结论：双通道TaqMan实时荧光PCR可以作为一种快速、特异、灵敏的HLA-B*58:01的基因检测方法,用于别嘌呤醇用药前的相关不良反应风险评估。     

中国新疆维族人群HLA-B等位基因与HIV-1感染易感性或抗性

通过对中国维吾尔族人群HLA-B等位基因的分布频率的研究,探讨HLA-B等位基因与HIV感染的易感 或抵抗性的相关性。本研究用PCR-SSP的方法对新疆维吾尔族110例无相关的健康对照者(HIV阴性)和128例 HIV阳性感染者进行HLA-B等位基因分型。用POPGEN软件对健康对照者人群进行Hardy-Weinberg平衡检 测,用卡方检验分析HLA-B等位基因在健康对照者和HIV阳性感染者频率分布的差异。在HIV-1阳性感染者 中,B*4901等位基因频率显著性增加(B*4901:P=0．02．OR=3．06,95%CI=1．16～8．10)。而在健埭对照者 中,B*40等位基因顿率增加具有统计意义(B*40:P=0．02．OR=0．39．95％CI=0．07～0．92)。由此可见,B* 4901等位基因可能与HIV-1感染的易感性有关,而B*40等位基因可能与与HIV-1感染的抵抗性有关。     

中国新疆维族人群HLA-B等位基因与HIV-1感染易感性或抗性

通过对中国维吾尔族人群HLA-B等位基因的分布频率的研究,探讨HLA-B等位基因与HIV感染的易感/或抵抗性的相关性.本研究用PCR-SSP的方法对新疆维吾尔族110例无相关的健康对照者(HIV阴性)和128例HIV阳性感染者进行HLA-B等位基因分型.用POPGEN软件对健康对照者人群进行Hardy-Weinberg平衡检测,用卡方检验分析HLA-B等位基因在健康对照者和HIV阳性感染者频率分布的差异.在HIV-1阳性感染者中,B*4901等位基因频率显著性增加(B*4901P=0.02,OR=3.06,95%CI=1.16～8.10).而在健康对照者中,B*40等位基因频率增加具有统计意义(B*40P=0.02,OR=0.39,95%CI=0.07～0.92).由此可见,B*4901等位基因可能与HIV-1感染的易感性有关,而B*40等位基因可能与与HIV-1感染的抵抗性有关.     

人白细胞抗原HLA-B27在强直性脊柱炎中的临床意义

目的:探讨人白细胞抗原HLA-B27在强直性脊柱炎(AS)中的临床意义,及联合检测HLA-B27、C反应蛋白(CRP)和红细胞沉降率(ESR)的意义。方法:对18例AS患者、24例腰背痛患者和21健康体检者的血液标本进行HLA-B27、CRP、ESR检测,并比较其HLA-B27阳性率。结果:与健康对照组比较,AS组的3项指标均高于对照组(P0.05),且AS组HLA-B27阳性率均高于另外2组(P0.05)。结论:HLA-B27在强直性脊柱炎诊断中具有重要意义,与其具有高度疾病相关性,联合检测HLA-B27及CRP比联合检测HLA-B27及ESR更有利于疾病诊断。     

用组合肽库技术分析HLA-B27的抗原提呈模式

HLA分子抗原表位提呈模式的分析,在自身免疫病和肿瘤的病因与治疗研究方面有重要意义。本研究采用组合肽库的策略合成19组ORX7型肽亚库,通过与荧光素标记肽的竞争结合试验,分析了与强直性脊柱炎有强相关的HLA-B27分子的抗原提呈模式。结果显示HLA-B27与P1为不同氨基酸残基的19种肽亚库有相近的结合率,提示P1为非锚定残基;中国人群最常见的二种HLA-B27亚型B*2704和B*2705,在提呈肽表位的P1模式方面存在一些小差异,P1为D或E的肽亚库与HLA-B*2704的结合能力要强一些,而P1为K的肽亚库则与HLA-B*2705的结合能力强一些。本研究为HLA-B27与强直性脊柱炎关联机制的研究提供了线索,为开展HLA分子的抗原提呈模式分析打下了基础。     

中国北方HLA-B27阳性强直性脊柱炎患者同乙型肝炎表面抗原阳性率无相关性

目的:评测中国北方人群HLA-B27阳性的强直性脊柱炎(AS)患者同乙型肝炎表面抗原(HBSAg)阳性率之间的相关性。方法:对我院2013年1~12月149例HLA-B27阳性的AS患者组和281例健康人组,以及264例HLA-B27阳性样本组和239例HLA-B27阴性样本组进行研究,外周血淋巴细胞HLA-B27阳性率的检测使用BeckmanCoulter公司的FC500流式细胞仪和BD公司的HLA-B27检测试剂盒(流式细胞法)。结果:149例HLA-B27阳性的AS患者中仅有2例为HBs Ag阳性(1.34%),281例健康人对照组中有9例为HBs Ag阳性(3.20%),二者之间无统计学差异(P0.05,卡方检验)。进一步检测发现264例HLA-B27阳性样本组和239例HLA-B27阴性样本组中HBSAg阳性样本分别为7(2.65%)和5例(2.09%),二者之间无统计学差异(P0.05,卡方检验)。结论:中国北方HLA-B27阳性强直性脊柱炎患者同乙型肝炎表面抗原阳性率无相关性。     

HLA-B2704重链胞外功能区基因片段的克隆表达及其生物学功能的初步鉴定

目的:克隆及可溶性表达 HLA-B*2704重链胞外功能区,并对其生物学功能进行初步鉴定.方法:以HLA-B 位点全长 cDNA 为模板,用 PCR-SSP 方法扩增 HLA-B*2704重链胞外区 cDNA,经测序鉴定后与 pET32a 可溶性核表达载体构建其重组核表达系统,并在大肠杆菌 BL21中表达,采用 Western 印迹及微量淋巴细胞毒阻断实验初步鉴定该蛋白的特异性及其生物学特性.结果:扩增出 HLA-B*2704重链胞外功能区 cDNA 片段,构建的HLA-B*2704 cDNA-pET32a 可溶性核表达载体可在大肠杆菌 BL21表达系统中得到较好表达,表达量约占菌体总蛋白的40%;通过 Western 印迹鉴定了表达蛋白的特异性;通过微量淋巴细胞毒阻断实验发现该重组蛋白具有生物活性并可特异性阻断 HLA-B27阳性细胞的微量淋巴细胞毒反应.结论:在大肠杆菌中表达了具有生物学活性的HLA-B*2704重链胞外功能区,为强直性脊柱炎的机理研究及特异性阻断药物的筛选提供了实验基础和新的靶标.     

四川彝族和新疆维族HLA-B位点基因多态性分析

应用PCR-SSP(Polymerase Chain Reaction-Sequence Specific Primer) 方法对无亲缘关系的106位四川彝族样品和110位新疆维族样品进行HLA-B基因分型。在彝族样品中共检出20个等位基因,其中高频率的等位基因为B*40（0.2028）、B*15（0.1604）、B*51(0.1274),低频率的等位基因为B*47 (0.0189)、B*27(0.0142)、B*44(0.0142)、B*18(0.0094)和B*78(0.0047)。在维族样品中共检出27个等位基因,其中高频率的等位基因为B*35 (0.1136)和B*51（0.1136）,低频率的等位基因为B*41（0.0045）、B*56（0.0045）和B*78（0.0091）。经χ2检验,两个民族群体的基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡。经遗传分析,四川彝族群体HLA-B基因座杂合度(H)、个体识别率(DP)和非父排除率(EP)分别为0.8977、0.9661和0.8009;维族群体的H、DP和EP分别为0.9372、0.9857和0.8732。本研究获得了四川彝族和新疆维族HL A-B基因座基因频率数据,为临床器官移植配型、人类学、法医学及疾病关联性研究提供了重要的群体遗传学资料。     

HLA-B27分子及其与强直性脊柱炎关联的研究进展简

HLA-B27是MHCI类分子,因而具有MHCI类分子的相关生物学特性。在正常免疫状态下,HLA-B27分子执行对内源性抗原如肿瘤及病毒的免疫监视及杀伤功能;但在机体免疫状态出现异常的情况下,它又可能成为引发自身免疫性疾病的主要相关因素,其中最为著名的是其与强制性脊柱炎（As）的关联研究。我们首先概述了HLA—B27分子正常免疫学功能的研究进展,然后对其在AS相关性研究中的进展进行了总结和分析。通过对上述两方面的综述与分析,全方位展示HLA-B27在执行免疫学功能和引发免疫病理性改变方面的作用,为全面认识和深入研究HLA-B27分子的生理与病理学作用提供坚实的基础。     

内蒙古地区蒙古族HLA-A、B、DRB1基因座多态性分析

应用序列特异性寡核苷酸探针反向斑点杂交技术对内蒙古地区蒙古族106名无关健康个体的HLA-A、B和DRB1 基因座进行基因分型, 以研究内蒙古地区蒙古族人群HLA-A、B、DRB1基因座的等位基因及其组成的单倍型频率分布特征。 采用最大数学预期值算法计算HLA基因座的等位基因频率和单倍型频率。106 名内蒙古地区蒙古族个体的HLA-A、B、DRB1基因座分别检出13、29、13个等位基因。高频单倍型分别为 HLA-A*02-B*46 (0.0510); HLA-A*02-B*13(0.0495); HLA-A*02-B*51(0.0442); HLA-B*13-DRB1*07 (0.0555); HLA- B*46-DRB1*09(0.0378); HLA-B*35-DRB1*13(0.03300); HLA-A*02-B*13-DRB1*07(0.033019); HLA-A*02-B*46- DRB1*09(0.031985)。研究表明: 内蒙古地区蒙古族人群HLA基因座的等位基因和单倍型具有较高的遗传多态性。HLA- A*24-B*14, HLA-A*32-B*63在该民族具有极强的连锁不平衡。