用氚化胸腺嘧啶核苷测定淋巴细胞转化——Ⅰ.两种国产纤维滤片的比较

我们比较了两种国产纤维滤片,无论对小分子氚化胸腺嘧啶核苷、大分子~3H-DNA的测量效率,还是复管变异情况,均以玻璃纤维滤片优于醋酸纤维滤片。国产49型和69型玻璃纤维滤片性能相近,以49型重迭测定性能良好及经济。玻璃纤维滤片的洗涤方法,无论是分离淋巴细胞培养还是全血培养,均以蒸馏水过滤,5%三氯醋酸破坏细胞沉淀DNA,无水乙醇脱色和脱水的处理方法为佳。滤片贴在测量杯壁内测定,能提高测量效率,节约了闪烁液,避免了污染闪烁液处理的麻烦。但几何角度影响很大,需进一步研究。     

用氚化胸腺嘧啶核苷测定淋巴细胞转化——Ⅱ.影响全血培养和同位素参入的一些基本因素

我们应用氚化胸腺嘧啶核苷研究了人的全血培养时影响淋巴细胞转化和同位素参入的一些基本因素。在2毫升培养液含20万淋巴细胞,培养70小时,于收获前4或16小时加氚化胸腺嘧啶核苷以每毫克分子含5居里的比活性,每管2微居里为较好条件;在不同的培养液中,淋巴细胞对植物血凝素反应的程度不一样,以RPMI1640液效果最好;植物血凝素的浓度能明显的影响淋巴细胞转化,且个体之间反应浓度不尽相同,多数人以我们实验室粗制每毫升含40微克的PHA为宜。有条件最好做剂量反应曲线;全血培养可省略小牛血清和5%CO_2-空气的调节,此时培养液配制时以pH7.6为宜。用国产49型玻璃纤维滤片过滤和测量的方法是研究全血培养淋巴细胞转化的一个较理想的方法。     

氧瓶燃烧法制备~3H生物样品

在液闪技术中,样品的制备是很关键的一步。根据实验材料的性质,可供选择的方法很多。由于液闪的测量是在非极性溶剂中进行的,而要测定的生物样品又大多是亲水性物质,这就构成了液闪测量技术中的一对矛盾。为解决这一矛盾而提出的各种样品制备方法不外乎两大类型,一类是将样品分散悬浮在闪烁液中(悬浮法、乳化法),或沉淀吸附在滤纸片、玻璃纤维膜制成的盘片或其他固体支持物上(纸片法)的非均相测量;另一类是加入助溶剂或长脂肪链季胺类组织溶解剂,使样品与闪烁液互溶     

一种适合14C-尿素呼气试验的环境友好型闪烁液的效果评价

目的评价环境友好型闪烁液应用于14C-尿素呼气试验诊断幽门螺杆菌感染的效果。方法149例患者接受14C-尿素呼气试验,均分别采用环境友好型和传统液体闪烁液进行检测,比较两者结果。结果应用环境友好型闪烁液进行14C-尿素呼气试验诊断幽门螺杆菌感染,与应用传统型闪烁液相比,两者差异无显著性,结果符合率为97.99%。结论环境友好型闪烁液对14C-尿素呼气试验结果无明显负面影响,可替代传统闪烁液。     

固相闪烁晶体用于液闪测量的评价

本文介绍两种固相闪烁晶体制样及测量方法并与乳化剂闪烁液相比较。 ³H, ¹⁴C, ¹²⁵I及 ³⁵S其计数效率(E％)分别达34.1％,89.9％,60.3％及77.4％。液相及两种固相闪烁体间的变异系数(CV％)范围为5.1％—10.3％,同系列样品对不同厂家型号的液闪谱仪,测量效率趋一致。其测量效率、精确度、平行度等近于或优于液相测量。对数波谱分析表明无需淬灭校正并可用于双标记测量。用固相闪烁体制样不需闪烁液,故无毒、无污染、污物体积小且使用方便,克服了液体闪烁测量的不足。因此是较理想的可推广的新型样品制备与测量技术。     

应用~3H-胸腺嘧啶核苷测定血淋巴细胞转化的方法

本文介绍了应用微量血液测定DNA合成的方法:0.1毫升肝素抗凝血液灌入3毫升含PHA的Fagle’s生长培养液中,培养54小时后注入~3H-TdR 0.6微居里,再培养16小时,吸弃上清液,沉淀用生理盐水洗涤两次,5％三氯醋酸洗一次。然后沉淀加0.5毫升5％三氯醋酸置90℃水浴15分钟,离心后吸取上清液0.2毫升加到5毫升闪烁液中进行测量。闪烁液配方:PPO 3克,POPOP 0.4萘克、110克、二氧六环1000毫升。10例健康人血平均~3H-TdR掺入率为10.8％。     

乳化剂OP-115加水杨酸钠体系闪烁作用的研究

液体闪烁测量法作为一种新颖的同位素测量技术,具有效率高、样品制备简单、无自吸收等优点,应用十分广泛。闪烁液在测量中起着容纳样品,进行能量传递和转换的作用,配方种类繁多,各有特点。Thomas等曾报道:在使用Triton X-100作切仑科夫计数的波长移位剂时,加入水杨酸钠等其它波长移位剂后,该体系即由切仑科夫计数体系变为液体闪烁体系。我们在实验中使用国产乳化剂 OP-115代替Triton X-100得到类似的结果。     

~(15)N标记土壤连续培养过程中扩散法测定无机氮同位素方法改进

扩散法用于测定土壤浸提液中铵态氮和硝态氮同位素比值已被广泛应用。但是测定15N标记培养的不同生态系统土壤浸提液时,因其同位素丰度高,并且随着培养时间的延长变化较大,目前仍缺少一个系统的方法体系以确定在标记实验中扩散法的同位素分馏效应。本研究对扩散法进行了改进和评估。其中,氨气吸收液改为10μL的KHSO4、培养瓶为500 mL时,培养液体积设为100 mL,使气液比为4∶1,MgO和Devarda合金的量减少至250 mg,在培养温度统一设定为25℃条件下,分别测定了高含氮量和低含氮量的无机氮同位素丰度。结果显示,理论值和实际测量值差别不显著,说明该方法的细节改进有利于大批量测定土壤长期培养过程中铵态氮和硝态氮含量和同位素比值的不断变化。     

光密度测定法在百日咳杆菌培养菌液浓度测定中的应用

本实验通过抽取百日咳杆菌悬液样品,分别用比浊法和光密度法测量其浓度,并进行各种比较,证明在百日咳杆菌培养中使用分光光度计测量菌悬液光密度值来代替比浊法测定菌悬液浓度的方法是准确可行的,并能建立光密度值与菌悬液浓度的关系,从而提高工作效率、更好的控制培养参数。试验数据表明,利用光密度法测定的百日咳杆菌悬液浓度数据稳定,重复性好,可信度高。证明了光密度法在百日咳杆菌悬液的浓度测定中的可行性,初步建立了光密度值与菌悬液浓度之间的联系。     

魁蚶幼贝对筒柱藻滤食效应的初步研究

采用实验生态学方法和"捕食者-猎物"的捕食模型,研究了黑暗条件下魁蚶(Anadara broughtonii)幼贝对筒柱藻(Cylindrotheca fusiformis)的滤食效应,测定了5种藻液浓度(30×107~150×107cells/L)及4个温度梯度(10℃、15℃、20℃和25℃)下魁蚶对饵料生物的滤食能力、功能反应类型和滤藻效应特征,并分别建立Holling圆盘方程。同时研究了水温20℃时魁蚶个体间的滤食干扰反应,建立了藻液浓度和魁蚶自身密度的联合反应方程。实验发现,水温20℃条件下,魁蚶幼贝对筒柱藻的平均滤食速率随着藻液浓度的增加而显著增大(P0.05),且0~4 h时段内的滤食速率显著高于其他时段。魁蚶滤食筒柱藻的功能反应属Holling-Ⅱ型,拟合圆盘方程为Na=1.0195N_0/1+0.002039N_0滤食功能系数为1.019 5,极限法推出壳长30~35 mm的魁蚶对筒柱藻的日均最大滤食量约为500×107 cells/L;10~25℃条件下,魁蚶的平均滤食速率和滤食功能反应系数随温度升高呈现先升高后下降的变化趋势,并于20℃时达到最大值,推测20℃是其最佳摄食温度。魁蚶的滤食效应存在较强的个体间干扰反应,平均滤食量和滤食作用率均随幼贝密度的增加而下降,且魁蚶滤食筒柱藻的功能反应与幼贝密度的关系可用幂函数方程E=0.730 8P﹣1.068表示,由此建立了魁蚶幼贝密度与筒柱藻藻液浓度之间的联合反应方程N_a=0.7451P~(-0.0684)N_0/1+0.0020N0。结果表明,水温20℃时,魁蚶幼贝具有较强的潜在滤食能力,其平均滤食量和滤食作用率与幼贝密度间存在明显的"负密度效应"特征。     

测量培养细胞鲜重和干重的新方法

要精确测定细胞的鲜重和干重,需要最大限度地了解悬浮培养的植物细胞生长的情况。这两种重量一般通过抽滤后干燥的方法测得。然而,抽滤并不总是能除去间隙中所有的水,并且用抽滤法测出的鲜重值常有较大的差异。华盛顿州立大学的科学家Ｄ．Ｒ．Ｍｉｌｌｓ和Ｊ．Ｍ．Ｌｅｅ描述了一种测量植物培养细胞鲜重和干重的更为精确的快速方法。这个方法包括（１）向一个已知重量的微量离心管中加入１ｍｌ悬浮培养液,并称重;（２）在管的尖端切一条约３ｍｍ深的裂缝;（３）把这个管插在另一个离心管中;（４）将整个装置放入一个５０ｍｌ的离心管…     

结核分枝杆菌滤过型的初步研究

目的研究结核分枝杆菌滤过型的生物学特性与检测方法。方法菌阴肺结核患者的结核分枝杆菌及其L型的液体培养物经0.45μm滤膜过滤后,涂片观察细菌形态,滤液分别进行分枝杆菌及其L型培养,并采用荧光基因定量法进行结核菌DNA检测。培养物用免疫组化染色鉴定,并采用透射电镜观察。结果30例痰、血滤前、滤后FQ-PCR检测同时阳性为53%,同时阴性为13%,滤前、滤后FQ-PCR结果符合率为67%。滤过后液体培养9例涂片见少许抗酸颗粒或椭圆性球菌。透射电镜见细胞壁缺失的"致密体"样细菌和细胞壁缺如菌。结论菌阴肺结核痰及血培养物中存在结核菌滤过型,滤过型携带遗传信息并可自我复制,采用生物学方法可以对其进行检测。     

酿酒酵母遗传缺陷型菌株化学转化方法研究

目的:通过改善转化条件,提高缺陷型酿酒酵母DNA转化效率。方法:以醋酸锂化学转化法为基础,以酿酒酵母菌株fab1::KAN作为遗传转化受体,以敲除MZM1基因为转化目的,对影响遗传缺陷型菌株转化效率的参数(醋酸锂前处理、热激时间及转化后复苏时间)进行优化,确定适合缺陷型酵母DNA转化的最佳方法。结果:不同时间(30 min,60 min和120 min)醋酸锂的前处理均可以提高其转化效率,热激前使用醋酸锂处理酵母30 min转化效率最高;热激10 min是转化效率由高到低的转折点,30 min热激明显降低了转化效率;YPD培养基用于转化后酵母的复苏,随培养时间(30 min,60 min和120 min)的延长,酵母转化效率逐步增加,120 min作为热敏性菌株转化后的复苏时间较佳。结论:与野生型菌株类似,通过转化条件的优化,遗传缺陷型菌株的转化效率也可以满足大多数试验要求。     

国产49型玻璃纤维滤纸在同位素液体闪烁测量中的应用

当前玻璃纤维滤纸在生物样品软β射线的测量中已日益广泛应用。但国内过去尚无此类滤纸供应。我们在以前的工作中曾用酸碱消化法对组织细胞内核酸等生物大分子进行均相测量,处理样品时方法比较繁杂,实验周期长,成本也高。为此,我们与上海红光造纸厂配合,摸     

49型玻璃纤维滤纸在测定胆碱能受体中的应用

一些蛇毒的α-毒素能与烟碱样乙酰胆碱受体形成特异的、近于不可逆的复合物。因此可用这些α-毒素的放射性标记物定量测定此受体。但是,首先必须把毒素与受体的结合物和游离的标记毒素分开。Miledi等曾采用Sephadex G-50凝胶过滤法,Meunier等用硫酸铵沉淀法,其他还有超速离心法,透析法等。这些方法工作量都很大,有的敏感性差。Schmidt等用DEAE-Cellulose纸片法测定分离提取的受体,提供了一种简便快速的方法。但有的步骤仍较繁杂,并受离子强度和pH的影响,特别是纸片来源不易,需要进口。本文报道采用国产49型玻璃纤维滤纸代替DEAE-Cellulose纸片测     

地下渗滤系统处理生活污水的技术难点及对策

以土地处理系统为代表的污水自然处理技术,遵循循环再生、和谐共存、整体优化、区域分异等原理,不仅对各种污染物有极高的去除效率,并可实现污水的处理与利用相结合。本文介绍了地下渗滤系统的工艺原理、技术特征,并阐述了国内外研究的最新进展,讨论了应用中的主要技术难点和解决途径,包括选配基质、缓解土壤堵塞以及提高系统氮的去除效果和水力负荷的方法等,指出地下渗滤系统应在强化预处理的基础上,采用合理调配土壤组成以提高水力负荷的运行方式。     

恙虫病立克次体毒力变异的研究

自沟鼠分离的“49”株恙虫病立克次体,经30℃培养,于兔睾丸单层细胞中传代及加入氰化钾等综合处理,获得弱毒变异株。经多次测定对小白鼠的ILD50≤10-1.00。但转种于鸡胚或小白鼠后毒力回升。用谷酰胺、癌敌处理,或以同一方法处理其他恙虫病立克次体株,均未获得对小白鼠不致病的弱毒变异株。     

建立肠通透性改变测定方法

我们采用国产的气相色谱（ＳＰ－３４００型）建立了肠通透性改变的测定方法,主要是测定乳果糖和甘露醇的浓度,以确定肠粘膜致密结构情况,如出现甘露醇含量不变,乳果糖吸收增加,说明肠通透性增加,测定标准液中甘露醇和乳果糖,含量为５０～５００ｎｍｏｌ和１０～２００ｎｍｏｌ时,随进样量改变而呈线性改变,与ｓｈｉｐｐｅｅ报告一致。此方法结果稳定,重复性好,可用于烧伤病人及动物模型的肠通透性改变的检测。     

氮素形态对不同专用型小麦根系及氮素利用率影响的研究

采用盆栽方法研究了3种氮素形态对不同专用型小麦根系及氮素利用率的影响．结果表明,拔节期以后,强筋型小麦豫麦34在酰胺态氮处理下,根系生物量、根系活力、氮素利用率、氮收获指数和籽粒蛋白质含量最高,铵态氮处理次之,硝态氮处理最低．中筋型小麦豫麦49的各测定指标以铵态氮处理最高,其它指标在酰胺态氮和铵态氮间的趋势不同;弱筋型小麦豫麦50在酰胺态氮处理下各项指标最高,而铵态氮处理下蛋白质含量最低,符合品种优质和专用,氮收获指数与籽粒蛋白质含量之间呈现极显著正相关。     

土壤羟胺还原酶活性测定方法的改进

对传统土壤羟胺还原酶活性的测定方法进行了部分改进.用煮沸并密封冷却的蒸馏水形成3～5 cm的液封,同时用N2气流排除液面以上的空气,能够创造测定土壤中羟胺还原酶活性所需要的厌氧环境.与传统方法相比,该方法减少了厌氧程度的不确定性和试验步骤的复杂性,增加了培养试验的可操作性.以碘量法为对照,对4种不同的测量浸提液中羟胺浓度的分光光度法进行了对比筛选,结果表明,硫酸铁铵-邻菲罗啉法具有较高的准确度和精密度,是测定土壤中羟胺还原酶活性的理想方法.