血清ANXA2、ANXA3与转移性结直肠癌患者化疗疗效的关系

摘要 目的：探讨血清膜联蛋白（ANX）A2、ANXA3与转移性结直肠癌（mCRC）患者化疗疗效的关系。方法：选取2019年1月～2020年10月徐州医科大学附属医院收治的90例mCRC患者,根据mFOLFOX6化疗联合西妥昔单抗治疗后的疗效分为未缓解组和缓解组。采用酶联免疫吸附法检测血清ANXA2、ANXA3水平。分别采用单因素、多因素Logistic回归分析和受试者工作特征（ROC）曲线分析mCRC患者化疗未缓解的影响因素和血清ANXA2、ANXA3对mCRC患者化疗未缓解的预测价值。结果：90例mCRC患者客观缓解率为58.89%（53/90）。单因素分析显示,两组年龄、回盲部肿瘤、TNM分期、Zubrod-东部肿瘤协助组-世界卫生组织（ZPS）评分、治疗目标、ANXA2、ANXA3组间比较存在统计学差异（P＜0.05）。多因素Logistic回归分析显示,回盲部肿瘤、TNM分期Ⅳ期、ZPS评分1～2分和ANXA2、ANXA3升高为mCRC患者化疗未缓解的独立危险因素（P＜0.05）。ROC曲线分析显示,血清ANXA2预测mCRC患者化疗未缓解的曲线下面积（AUC）为0.787,ANXA3预测mCRC患者化疗未缓解的AUC为0.791,血清ANXA2、ANXA3联合预测为0.904,二者联合预测的AUC最大（P＜0.05）。结论：血清ANXA2、ANXA3水平升高为mCRC患者化疗未缓解的独立危险因素,可影响mCRC患者的化疗疗效,二者联合预测mCRC患者化疗未缓解的价值较高。     

A Comprehensive Analysis of Symmetric Arginine Dimethylation in Colorectal Cancer Tissues Using Immunoaffinity Enrichment and Mass Spectrometry

Protein arginine methyltransferase 5 (PRMT5) is a major enzyme responsible for generating monomethyl and symmetric dimethyl arginine in proteins. PRMT5 is essential for cell viability and development, and its overexpression is observed in a variety of cancers. In the present study, it is found that levels of PRMT5 protein and symmetric arginine dimethylation in colorectal cancer (CRC) tissues are increased compared to those in adjacent noncancerous tissues. Using immunoaffinity enrichment of methylated peptides combined with high‐resolution mass spectrometry, a total of 147 symmetric dimethyl‐arginine (SDMA) sites in 94 proteins are identified, many of which are RNA binding proteins and enzymes. Quantitative analysis comparing CRC and normal tissues reveals significant increase in the symmetric dimethylation of 70 arginine sites in 46 proteins and a decrease in that of four arginine sites in four proteins. Among the 94 proteins identified in this study, it is confirmed that KH‐type splicing regulatory protein is a target of PRMT5 and highly expressed in CRC tissues compared to noncancerous tissues. This study is the first comprehensive analysis of symmetric arginine dimethylation using clinical samples and extends the number of known in vivo SDMA sites. The data obtained are available via ProteomeXchange with the identifier PXD015653.     

辣椒R2R3-MYB转录因子家族的全基因组鉴定与比较进化分析

MYB转录因子作为植物中最大的转录因子家族之一,参与植物的生长、代谢、抵御生物和非生物胁迫等多种生理生化过程。R2R3-MYB是MYB转录因子家族的主要存在形式。辣椒是具有重要经济价值的蔬菜作物,其R2R3-MYB转录因子缺乏系统的研究。从一年生辣椒(Capsicum annuum)、浆果状辣椒(C. baccatum...     

Comparison of Next-Generation Sequencing and Polymerase Chain Reaction for Personalized Treatment-Related Genomic Status in Patients with Metastatic Colorectal Cancer

Personalized treatments based on the genetic profiles of tumors can simultaneously optimize efficacy and minimize toxicity, which is beneficial for improving patient outcomes. This study aimed to integrate gene alterations associated with predictive and prognostic outcomes in patients with metastatic colorectal cancer (mCRC) with polymerase chain reaction (PCR) and in-house next-generation sequencing (NGS) to detect KRAS, NRAS, and BRAF mutations. In the present study, 41 patients with mCRC were assessed between August 2017 and June 2019 at a single institution. The overall concordance between NGS and PCR results for detecting KRAS, NRAS, and BRAF mutations was considerably high (87.8–92.7%), with only 15 discrepant results between PCR and NGS. Our companion diagnostic test analyzes KRAS, NRAS, and BRAF as a panel of CRC molecular targets; therefore, it has the advantages of requiring fewer specimens and being more time and cost efficient than conventional testing for separate analyses, allowing for the simultaneous analysis of multiple genes.     

结直肠癌组织ANP32A、Ataxin-3、FHL1的表达及其与肝转移的关系研究

摘要 目的：探讨结直肠癌组织中酸性核磷蛋白32A（ANP32A）、Ataxin-3及4个半LIM结构域蛋白1（FHL1）的表达及其与肝转移的关系。方法：对120例结直肠癌患者癌组织和癌旁组织中ANP32A、Ataxin-3及FHL1蛋白水平进行检测,分析其阳性表达率。其中44例发生肝转移作为肝转移组,76例无肝转移作为无肝转移组,比较两组癌组织中ANP32A、Ataxin-3及FHL1蛋白阳性表达率,分析结直肠癌肝转移的影响因素,分析ANP32A、Ataxin-3、FHL1蛋白之间的相关性。结果：结直肠癌患者癌组织中ANP32A蛋白阳性表达率高于癌旁组织,Ataxin-3、FHL1蛋白阳性表达率低于癌旁组织（P<0.05）。经单因素分析显示肝转移组患者癌组织中ANP32A蛋白阳性表达率显著高于无肝转移组,Ataxin-3、FHL1蛋白阳性表达率显著低于无肝转移组（P<0.05）,肝转移组患者原发癌中低分化、原发癌浸润深度T3~T4、原发癌有淋巴结转移者构成比显著高于无肝转移组（P<0.05）。多因素Logistic回归分析显示,ANP32A蛋白阳性表达、原发癌中低分化、原发癌浸润深度T3~T4、原发癌有淋巴结转移是结直肠癌肝转移的危险因素（P<0.05）,Ataxin-3、FHL1蛋白阳性表达是结直肠癌肝转移的保护因素（P<0.05）。Spearman相关分析显示,结直肠癌患者癌组织中ANP32A阳性表达率与Ataxin-3、FHL1阳性表达率呈负相关（P<0.05）,Ataxin-3蛋白阳性表达率与FHL1蛋白阳性表达率呈正相关（P<0.05）。结论：ANP32A蛋白高表达,Ataxin-3、FHL1蛋白低表达与结直肠癌发生及肝转移有密切关系,且以上指标间具有一定相关性。结直肠癌肝转移受多种因素影响,临床诊治中可根据相关因素为患者制定针对性治疗方案。     

ANXA2对人结直肠癌caco2细胞行为及细胞骨架结构的调节

ANXA2是Annexin蛋白家族中的重要成员,研究证实,其在多种肿瘤组织中异常表达,且在细胞功能及命运的调节中扮演重要角色。为了准确研究ANXA2对细胞行为及细胞骨架结构的调节以及该调节对肿瘤发展过程中的影响,该实验室构建了敲除ANXA2基因的人结直肠癌细胞系（ANXA2-/-caco2）,研究ANXA2对细胞的生物学行为及结构的调节。结果显示,ANXA2表达的祛除明显抑制caco2细胞的增殖和迁移能力（P〈0．05）,但对其凋亡没有显著影响;敲除ANXA2显著降低F—actin的表达,且抑制caco2细胞伪足和微绒毛的发育,这也进一步验证了ANXA2的敲除影响caco2细胞的增殖与迁移能力。该研究结果在靶基因敲除的条件下从更加客观的形态学角度进一步支持了ANXA2对caco2细胞癌发展有关特性的重要调节作用,以及其作为癌基因治疗靶基因的重要潜在性。     

ATAD3A在结直肠癌组织中的表达及其对细胞生长的影响

目的:探讨三磷酸腺苷酶家族蛋白3A(ATAD3A)在结直肠癌组织中的表达情况,并验证其对结直肠癌细胞RKO和HCT116生长的影响。方法:收集结直肠癌患者配对癌与癌旁组织115例,通过免疫组化方式验证ATAD3A在结直肠癌组织与癌旁的表达差异。采用慢病毒转染和si-RNA干涉的方式构建ATAD3A过表达和敲低肠癌细胞系,并采用MTS,流式检测细胞周期和细胞凋亡等方法验证ATAD3A对结直肠癌细胞系RKO和HCT116的影响。结果:ATAD3A在结直肠癌组织中表达较癌旁组织显著升高(P0.001)。在结直肠癌细胞系RKO和HCT116中过表达ATAD3A后,细胞增殖能力明显增强,处于S期的细胞比例明显增加,而且细胞凋亡数量明显减少。反之,在上述肠癌细胞中干涉ATAD3A后,细胞增殖能力减弱,细胞大部分停滞于G1期,而且凋亡细胞数量明显增多。结论:ATAD3A在结直肠癌组织中表达升高,且ATAD3A通过促进细胞增殖、细胞周期进程和抑制细胞凋亡等方式促进肠癌细胞的生长。     

弓形虫RH株SAG1基因序列体外扩增及生物信息学分析

根据sAG1基因序列,自行设计一对寡核苷酸引物,利用PCR技术从弓形虫RH株基因组DNA中成功扩增出编码SAG1抗原的基因片段,扩增出的基因片段大小与预期长度（1006bp）相符,结果经测序验证,并利用生物信息学方法对SAG1蛋白理化性质、结构和功能进行了预测．     

剪接因子异质核糖核蛋白A2B1在癌细胞和衰老细胞中的相反表达趋势及其对癌细胞衰老的调控

剪接因子异质核糖核蛋白A2/B1(HNRNPA2B1)与人类及小鼠的寿命相关,并在多个癌症的病程进展中发挥重要的作用.然而,HNRNPA2B1能否在细胞衰老这一与个体衰老和抑制癌症密切相关的生物学过程中发挥作用尚不清楚.本研究发现,HNRNPA2B1在多个癌症体系中呈显著上调表达趋势,而在多个细胞衰老体系中则呈显著下调...     

大肠癌患者血清和组织中sIL-2R 和sICAM-1 水平 的变化及意义

目的：探讨可溶性白细胞介素2 受体（sIL-2R）和可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1）的水平在大肠癌患者血清和组织中的 变化及临床意义。方法：选择本院于2010 年1月-2012 年12 月收治的55例大肠癌患者作为观察组,选取同期收治的41 例大肠 息肉患者作为对照组,38例健康志愿者作为健康组,应用双抗体夹心ELISA法对上述三组血清和组织中的sIL-2R 和sICAM-1 水平进行检测,对比分析上述指标的变化情况及其临床意义。结果：观察组血清和组织中sIL-2R 水平分别为（210.3 ± 128.5） pmol/L、（235.8 ± 172.4）pmol/L,明显高于对照组与健康组,比较差异均有统计学意义（P<0.05）,且sICAM-1 平均水平为（392.4± 133.3）p/ug/L,显著高于对照组和健康组,比较差异亦有统计学意义（P<0.05）;观察组术后sIL-2R和sICAM-1 水平分别为（85.1± 41.7）pmol/L、287.3 ± 106.1（p/ug/L）,均显著低于术前,比较差异有统计学意义（P<0.05）。结论：大肠癌患者机体中sIL-2R 及 sICAM-1 的水平与疾病的发生和存在有密不可分的关系,故临床中,测定两指标的含量对大肠癌的诊断有一定的临床意义,可将 其作为一个较为客观的指标进行检测。     

乳腺癌转移中的磷脂酰胆碱和溶血磷脂酰胆碱分析

我们以前曾报道花生四烯酸（arachidonic acid,AA)代谢产物可以促进乳腺癌细胞增殖和迁移。为了进一步寻找维持高转移乳腺癌细胞中AA高水平代谢的内源机制,深入探求AA代谢促进乳腺癌细胞转移的分子机理,我们应用HPLC/ESI/MSⁿ技术检测和分析了乳腺癌MCF-7和高转移乳腺癌LM-MCF-7细胞中溶血磷脂酰胆碱（lysophosphatidylcholines,LysoPCs）和磷脂酰胆碱（phosphatidylcholines,PCs）的成分和含量。我们发现了10种LysoPC的含量在LM-MCF-7细胞中显著高于MCF-7细胞,有6种PC可水解产生AA,它们在LM-MCF-7细胞中的含量显著低于MCF-7细胞,提示这些溶血磷脂含量的升高和磷脂含量的降低可能与乳腺癌转移相关。在LM-MCF-7细胞中,COX-2抑制剂吲哚美辛（indomethacin,Indo）和LOX抑制剂（nordihydroguaiaretic acid,NDGA）共同作用可明显下调cPLA2的活性,应用HPLC-ESI-MSⁿ技术比较cPLA2活性下调前后LM-MCF-7细胞中LysoPC和PC含量的变化,发现其中4种PC可被cPLA2水解产生AA。我们还发现,细胞内LysoPC与PC的比值可以反映cPLA2的活性。通过以上研究我们进一步证实了由cPLA2活性调节的AA释放及代谢对乳腺癌转移具有重要作用。     

大肠癌患者血清和组织中sIL-2R和sICAM-1水平的变化及意义

目的：探讨可溶性白细胞介素2受体（sIL-2R）和可溶性细胞间粘附分子1（sICAM-1）的水平在大肠癌患者血清和组织中的变化及临床意义。方法：选择本院于2010年1月-2012年12月收治的55例大肠癌患者作为观察组,选取同期收治的41例大肠息肉患者作为对照组,38例健康志愿者作为健康组,应用双抗体夹心ELISA法对上述三组血清和组织中的sIL-2R和sICAM-1水平进行检测,对比分析上述指标的变化情况及其临床意义。结果：观察组血清和组织中sIL-2R水平分别为（210．3±128．5）pmol／L、（235．8±172．4）pmol／L,明显高于对照组与健康组,比较差异均有统计学意义（P〈0．05）,且sICAM-1平均水平为（392．4±133．3）p/μg／L,显著高于对照组和健康组,比较差异亦有统计学意义（P〈0．05）;观察组术后sICAM-2R和sICAM-1水平分别为（85．1±41．7）pmol／L、287.3±106．1（p／ug／L）,均显著低于术前,比较差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：大肠癌患者机体中sIL-2R及sICAM-1的水平与疾病的发生和存在有密不可分的关系,故临床中,测定两指标的含量对大肠癌的诊断有一定的临床意义,可将其作为一个较为客观的指标进行检测。     

共刺激因子B7-H3 在非小细胞肺癌中的表达研究

目的:探讨共刺激椅子B7-H3在人不同非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系和组织中的表达及其临床意义。方法:实时定量反转录-聚合酶链式反应及蛋白印迹法检测B7-H3在5种人NSCLC细胞系中的表达量,利用免疫组化法检测121例NSCLC、33例癌旁组织及36例良性病变组织中B7-H3的表达量,并收集患者临床资料,分析B7-H3与临床参数的关系。结果:5个NSCLC细胞系中均见B7-H3的表达,A549及SPAC-1中表达较H466、H1299及H460中表达较低;B7-H3在NSCLC组织中高于癌旁组织及良性病变组织(P0.001);分化程度高者平均IOD高于分化程度中、低的患者(P0.05)。发生淋巴结转移和未发生淋巴结转移的患者B7-H3的平均IOD之间存在显著性差异(P0.05)。结论:B7-H3在NSCLC组织中高表达,可能是疾病治疗或诊断的靶因子。     

香菇C_(91-3)转录本Unigene14872基因Pkinase结构域的克隆表达及其生物信息学分析

旨在克隆香菇C91-3转录本Unigene 14872基因中的Pkinase结构域,并对其进行生物信息学分析。提取香菇C91-3菌丝体中总RNA,根据转录组测序结果,用3'-Full RACE、5'-Full RACE方法获得Unigene 14872基因全长。用NCBI对其进行生物信息学分析,预测其具有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(Pkinase)结构域。设计引物PCR扩增Pkinase结构域,然后克隆至pET32a(+)载体,再热转化至JM109中保存并进行质粒测序。重组质粒pET32a(+)-Pkinase构建成功,并成功诱导表达重组蛋白,初步鉴定该蛋白具有抗肿瘤活性,为进一步研究重组蛋白的活性及作用机制奠定基础。     

Effects of Oral Anorexiant Sibutramine on the Expression of Cytochromes P450s in Human Hepatocytes and Cancer Cell Lines

Sibutramine is a serotonin–norepine‐phrine reuptake inhibitor that was used for weight‐loss management in obese patients. Even though it was officially withdrawn from the market in 2010, it is still present in some tainted weight‐loss pills (as reported by US Food and Drug Administration). Thus, it is still reasonable to study the effects of this compound. The aim of this work was to investigate the potential of sibutramine to induce CYP1A1/CY3A4 in human cancer cell lines and CYP1A1/2, CYP2A6, CYP2B6, and CYP3A4 in human hepatocytes, a competent model of metabolically active cells. The levels of mRNA and protein of CYP1A1/1A2/3A4/2A6/2B6 were compared with the typical inducers, 2,3,7,8‐tetrachlorodibenzo‐p‐dioxin (TCDD) and rifampicin (RIF) for CYP1A1/2 and for other CYPs, respectively. The mRNA and protein levels of all genes in either cancer cell lines or human hepatocytes were induced when treated with typical inducers but not with sibutramine.