金属硫蛋白产生菌的诱变育种

采用亚硝基胍和紫外线诱变,自金属硫蛋白（ＭＴ）产生菌酿酒酵母（ｄｅｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）ＢＤ１０１－２５单倍体中获得遗传稳定的高Ｃｕ２＋、Ｃｄ２＋抗性突变株ＢＤ１０１－６９和ＢＤ１０１－３０。并对其重金属解毒、桔抗ｕ．ｖ．和６０Ｃｏ辐射效应、清除羟基自由基能力等生物学功能进行了研究。与出发菌株相比,上述生物学活性与酵母细胞对Ｃｉ２＋抗性、ＭＴ表达量表现出正相关性。两个突变株类ＭＴ表达量与生物学活性皆有所提高,为酿酒酵母ＭＴ的理论和应用研究打下了基础。     

酵母菌类金属硫蛋白的分离、纯化及性质鉴定*

经过对酵母菌的金属抗性试验和培养条件试验,确定了高产类金属硫蛋白的酿酒酵母菌株Cu-21（Saccharomyces cerevisiae Cu-21）及其最佳培养条件。对该菌株的菌体蛋白进行SephadexG-100、DEAE-52结合的两次柱分离纯化,获得了类金属硫蛋白的三个亚型,蛋白性质鉴定结果表明含三个亚型、分子量小、富含半胱氨酸和金属元素,具有典型的巯基吸收特性。     

产金属硫蛋白酿酒酵母诱变菌株的生物学功能研究

以酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)单倍体菌株SY1为出发菌株 ,通过紫外线和亚硝基胍复合诱变 ,获得 1株Cu2 高抗性突变株 ,并对其生物学功能进行了研究。结果表明 ,其拮抗紫外线 ,拮抗电离辐射 ,清除·OH自由基能力 ,Cu2 解毒能力均比出发菌株有所提高 ,经 5 0世代培养后 ,其遗传稳定性保持在 96 %以上。     

酵母金属硫蛋白对酵母和小鼠抗γ射线损伤的作用*

酿酒酵母BD101菌株的金属硫蛋白能清除羟基自由基。含金属硫蛋白的酵母菌有拮抗60Coγ射线的作用。用计数血液中血小板(PLT)、白细胞(WBC)变化来研究酵母Cu-MT在小鼠γ射线损伤中的作用。结果表明,该菌Cu-MT对PLT降低的改善和回升有作用。但未观察到其对WBC总数变化的影响。提示酿酒酵母Cu-Mr在临床放射病治疗和放疗后抗出血方面有良好的应用前景。     

曲酸生产菌的复合诱变选育*

以黄曲霉(Aspergillus flavus.)为出发菌株,经3次紫外线、1次^60Co、3次亚硝基胍多重复合诱变处理,选育获得曲酸生产菌UCN7—17,配以最佳培养条件,发酵7d,曲酸产量由原来的0．926％,提高到6．3％。实验证明采用多因子复合诱变,能有效改变菌株对诱变因素敏感性,提高变异率,逐步提高突变株的产酸水平。     

柱状田头菇(茶薪菇)金属硫蛋白的分离纯化与特性研究*

应用快速灌注色谱系统首次从经Cd2+诱导的柱状田头菇(茶薪菇)Agrocybecylindracea(DC.:Fr:)R.Maoire菌丝体中分离得到一种镉结合蛋白。通过SephadexG-75凝胶过滤层析,原子吸收光谱分析(AAS),巯基含量测定及紫外吸收光谱分析表明这种镉结合蛋白具有金属硫蛋白(metallothionein,MT)的理化性质:即分子量为6kDa、每分子MT含18个半胱氨酸残基并结合7个镉原子、具有镉硫金属簇的特征紫外吸收光谱,初步鉴定为茶薪菇Cd-MT。     

盐穗木金属硫蛋白HcMT的体外自由基清除活性及抗氧化能力*

目的: 原核表达盐穗木(Halostachys caspica C. A. Mey.)金属硫蛋白HcMT并探究其抗氧化活性。方法: 构建原核表达载体pET-32a-HcMT,转化至大肠杆菌Escherichia coli BL21,加入Zn²⁺胁迫培养(终浓度为200 μmol/L),分离纯化得到Zn-HcMT,测定Zn-HcMT自由基清除活性和总抗氧化能力,制备复合物Zn-HcMT/TiO₂并做FTIR表征。结果: 通过原核表达获得融合蛋白Zn-HcMT,对·OH、O₂·^-、DPPH自由基具有较强的清除活性,对·OH、O₂·^-的IC₅₀分别为0.386 mg/mL、0.038 mg/mL。融合蛋白浓度为0.01 mg/mL时,对DPPH清除率达(37.43 ± 0.006 8)%,浓度为0.3mg/mL时TEAC(trolox-equivalent antioxidant capacity)值为(1.023 ± 0.01)mmol/L,融合蛋白还原力A₇₀₀为0.142 ± 0.055,FTIR图谱同时表现了Zn-HcMT和TiO₂吸收特性。结论: Zn-HcMT具有良好的清除ROS活性及较强的抗氧化能力,在化妆品领域有潜在应用前景。     

酿酒酵母BD101诱导产生的金属硫蛋白的分离纯化及鉴定

从酵母菌中分离出拮抗重金属、经铜诱导产生金属硫蛋白的酿酒酵母（Saccharo－mycescerevisiae）BD101。无细胞抽提液经SephadexG－50、DEAESepharoseCL－4B、SephadexG-25三次凝胶及阴离子交换柱层析分离纯化得到两个金属硫蛋白亚型。Mr约为7kD,由60个氨基酸组成,其中半胱氨酸含量占10％,每分子金属硫蛋白（Cu-MT）含6个分子Cys,可结合4个铜原子。     

金属硫蛋白

金属硫蛋白为一类广泛地存在于生物界的低分子量、富含半胱氨酸的金属结合蛋白,尤其对Cd,Zn,Cu和Au,Ag等有较强的亲和力。它是一种诱导合成的蛋白质,在体内能被金属和糖皮质激素等所诱导。它具有广泛的生物学功能,主要是参与微量元素的储存、运输和代谢,拮抗电离辐射,清除羟基自由基和重金属解毒等多种作用。某些微量元素缺乏症等疾病也与它有一定关系。今后在某些疾病的治疗、环保中清除有毒金属以及采矿、富集贵重金属等方面有着广泛的应用前景。     

产金属硫蛋白酵母菌原生质体电融合研究

采用原生质体电融合技术,由不能水解淀粉,细胞生物量低,中抗Ｃｕ＾２＋、金属硫蛋白中ｃｙｓ含量高的酿酒酵母单倍体ＢＤ１０１－２５和具淀粉水解能力,细胞生物量高、Ｃｕ＾２＋、Ｃｄ＾２＋抗性高、金属硫蛋白中ｃｙｓ含量 异常毕赤酵母单倍体ＢＤ１０２－１３获得４个融合株。     

酵母菌类金属硫蛋白的分离、纯化及性质鉴定

经过对酵母菌的金属抗性试验和培养条件试验,确定了高产类金属硫蛋白的酿酒酵母菌株Cu-21(Saccharomyces cerevisiae Cu-21)及其最佳培养条件。对该菌株的菌体蛋白进行SephadexG-100、DEAE－52结合的两次柱分离纯化,获得了类金属硫蛋白的三个亚型,蛋白性质鉴定结果表明含三个亚型、分子量小、富含半脱氨酸和金属元素,具有典型的巯基吸收特性。     

60Co照射后小鼠肝脏金属硫蛋白含量的动态变化

小鼠经不同剂量 ⁶⁰Co照射后,用HPLC结合AAS和ELISA方法检测第1,5,15,27天小鼠肝脏中金属硫蛋白两种亚型——MT-Ⅰ和MT-Ⅱ的变化发现,照后第1,5天MT-Ⅰ增加10—20倍,MT-Ⅱ增加40—60倍;而且600Rad照射较400Rad照射增加更明显,第15天后趋于正常。     

巴西固氮螺菌Yu62 draTG基因及其下游区域的定位诱变分析*

用卡那霉素盒(Kmr-cassette)插入法,对巴西固氮螺菌(Azospirillum brasilense)Yu62的draTG基因及其下游区域进行了诱变,并获得相应的突变株。研究表明：draT变突株的固氨酶活性不再受铵抑制,而draG突变株在有铵时则丧失固氮酶活性,但当铵耗尽后却不能像野生型菌株那样恢复活性。draTG下游区域突变株YZ4(突变位点距draG约2kb)在无氮及限铵条件下,其固氮酶活性比野生型菌株的高,但其nifH-lacZ转录融合子的表达并不受影响,说明该区域可能有参与固氮酶活性水平调控的基因。     

脑金属硫蛋白GIF及其功能研究

脑金属硫蛋白ＧＩＦ及其功能研究王文清,潘宪明,刘杰（北京大学技术物理系１００８７１）（美国Ｋａｎｓａｓ医学中心）近年来在正常人脑皮层中发现了一种新的金属硫蛋白异构体,称ＧＩＦ（Ｇｆ。Ｗｔｈｌｎｈｉｂｉ－ｔｏｒｙＦａｃｔｏｒ,１９９１,Ｙｏｋ。Ｕｃｈｉ...     

酵母菌类金属硫蛋白的分离、纯化及性质鉴定

经过对酵母菌的金属抗性试验和培养条件试验,确定了高产类金属硫蛋白的酿酒酵母菌株Cu-21（Saccharomyces cerevisiae Cu-21）及其最佳培养条件。对该菌株的菌体蛋白进行SephadexG-100、DEAE-52结合的两次柱分离纯化,获得了类金属硫蛋白的三个亚型,蛋白性质鉴定结果表明含三个亚型、分子量小、富含半胱氨酸和金属元素,具有典型的巯基吸收特性。     

金属硫蛋白与肿瘤

近年来的研究发现,一些肿瘤组织的金属硫蛋白含量增加。致癌过程中ＭＴ的写表达与致癌素作用,癌基因激活和肿瘤迅速生长有关。ＭＴ的加旺表达也是细胞产生耐药的机制之一天肿瘤预防和治疗中,ＭＴ可保护细胞低抗重金属和烷化剂的致癌,致突变作用,ＭＴ还可用于肿瘤临床辅助治疗和用作肿瘤标志物。     

酵母金属硫蛋白对酵母和小鼠抗γ射线损伤的作用

酿酒酵母ＢＤ１０１菌株的金属硫蛋白能清除羟基自由基,含金属硫蛋白的酵母菌有拮抗＾６０Ｃｏγ射线的作用。用计数血液中血小板（ＰＬＴ）、白细胞（ＷＢＣ）变化来研究酵母Ｃｕ－ＭＴ在小鼠γ射线损伤中的作用。结果表明,该菌Ｃｕ－ＭＴ对ＰＬＴ降低的改善和回升有作用,但未观察到其对ＷＢＣ总数变化的影响,提示酿酒酵母Ｃｕ－ＭＴ在临床放射病治疗和放疗后抗出血方面有良好的应用前景。     

产金属硫蛋白酵母菌原生质体电融合研究

采用原生质体电融合技术,由不能水解淀粉、细胞生物量低,只抗Cu²⁺、金属硫蛋白(MT)中cys含量高的酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae,a)单倍体BD101-25和具淀粉水解能力、细胞生物量高、Cu²⁺、Cd²⁺抗性高、金属硫蛋白中cys含量低的异常毕赤酵母(Pichiaamomala,a)单倍体BD102-13获得4个融合株。融合组合有两亲株属间融合和单一亲株种内融合两类。融合株细胞体积、DNA含量均近似于两亲株细胞之和,并具有水解淀粉能力,Cu²⁺、Cd²⁺抗性高,细胞生物量高,MT中cys含量高等特点。属间融合株Cu²⁺、Cd²⁺抗性的遗传性状稳定。