恒河猴感染SARS病毒致病模型的建立

为建立恒河猴严重急性呼吸道综合征(SARS)的模型并对其致病特点进行观察,采用病毒分离、免疫荧光、光镜及RT-PCR方法对病毒感染组和非感染组恒河猴不同时间、不同组织或分泌物进行检测.结果显示从恒河猴不同组织中分离到病毒,而且在病毒感染后第2d和第5d的血液、第7、9d的鼻咽分泌物、第3d的粪、第5d的粪尿中均检测到SARS-CoV RNA.光镜观察到病毒感染组肺组织肺泡间隔增宽,有大量淋巴细胞、单核细胞浸润,肺泡腔有渗出,甚至形成透明膜样物;多个肺泡形成机化性肺炎的表现.感染组肝组织可见较大的坏死灶,并伴有大量炎性细胞浸润.结论认为已成功建立了恒河猴SARS模型,可用于评价抗SARS药物和疫苗的研究.     

第一种鼻道SARS疫苗在猴中试验成功

Science News 2004年166卷1期3页报道：据统计,迄今为止,全球已有8000人遭受严重急性呼吸道综合征（SARS）感染,其中有774人病死。为此,SARS疫苗的研发已引起全球科学家的密切关注。     

猴免疫缺陷病毒（SIV）猴模型的建立

应用ＳＩＶｍａｃ毒株感染中国恒河猴１３只,感染剂量为病毒液的１０－１～２×１０－５;感染食蟹猴４只,感染剂量为１０－２。感染后２周出现各种症状和体征如皮疹,浅表淋巴结肿大,脾肿大,血象白细胞总数下降,出现异常淋巴细胞和中性白细胞。感染后期Ｔ４下降,Ｔ４、Ｔ８比例倒置等。从外周血淋巴细胞和血浆分离病毒阳性,血清抗体上升。淋巴结组织切片呈规律性改变,即淋巴滤泡增生－滤泡耗竭－淋巴组织耗竭或逐渐恢复。感染后２．５个月有急性死亡病例,以后呈散在死亡例,尸检还发现机遇性感染如肺寄生虫,肺、肝巨细胞病毒感染等。     

广州某医院职工SARS病毒抗体的检测

临床上有多种病原体可以引起肺炎等呼吸道疾病,较常见的有细菌、病毒、衣原体、支原体、立克次体等。一种新型冠状病毒被确认是引起传染性非典型肺炎即严重急性呼吸道综合征SARS)的病原1。广东是最早出现SARS病例的地区,而广州是发病率较高的地区,广州市某医院是收治SARS患者的重点医院,共收治了临床确诊SARS患者261例。为了解该医院职工SARS病毒的感染情况,我们对该院505例职工的血清进行了检测。1材料与方法1.1研究对象与样品收集505例研究对象均为2003年2月至6月期间在广州重点收治SARS患者的某医院的工作人员。每人抽取3ml血,…     

SARS病毒核蛋白基因的克隆及其表达研究

从一例输入性传染性非典型性肺炎病人血清中提取病毒RNA,通过RT—PCR方法扩增出SARS病毒核蛋白基因片段,克隆入质粒载体pUCm—T后,进行核苷酸序列的测定及分析,与已公布的SARS病毒基因序列进行比较,证实为SARS冠状病毒核蛋白基因。为了解该病毒核蛋白的抗原特性,将核蛋白基因插入表达载体,构建重组质粒pET28a—SN,转导大肠杆菌BL21(DE3)后,加IPTG诱导表达。产物经SDS—PAGE电泳分析,表达出相对分子量约为50kDa的蛋白,占整个菌体的45％左右。Westem—blot分析表明,表达产物仅与SARS阳性病人血清起反应,而与正常血清不起反应。间接ELISA免疫检测,抗原滴度达1：12500。表明表达的核蛋白为SARS特异性抗原,这为SARS病毒的诊断试剂的研制提供了方便而安全的抗原来源。     

冠状病毒与SARS

最近在世界部分地区流行的非典型肺炎是病毒引起的严重急性呼吸综合征,它是由一种新的冠状病毒引起的,这种病毒被称为SARS病毒。结合SARS病毒对冠状病毒的研究现状进行了简单概括,并概述了SARS的流行特点和可能的发病机理。     

就SARS谈蛇类的保护与开发

严重急性呼吸系统综合征(Severe acute respiratory Syndrome,简称SARS),我国称为"非典型肺炎",简称"非典",是21世纪最新发现的一种严重传染病,在全球快速传播,蔓延到30多个国家和地区,中国、英国、美国、法国、日本、俄罗斯、芬兰、印度、印尼、意大利、菲律宾、瑞士、南非等.主要疫区是中国内地、香港和台湾、新加坡、越南河内.欧洲地区以加拿大的多伦多疫情较为严重,美国次之.截至2003年5月27日,全世界疫情累计达到8202例,其中死亡725例.在当日,我国内地病情累计5322例,死亡321例.我国是重疫区.     

SARS冠状病毒M蛋白的生物信息学研究

针对GenBank上发布的来自不同国家地区的39条SARSCoV推测M蛋白,采用生物信息学软件分析其核酸和氨基酸序列,获得其分子生物学特征,确定突变位点,预测功能结构区、Motif及抗原决定簇,比较基因突变对这些功能结构的影响.结果表明:在39个病毒株M蛋白的666 bp中,共有18个病毒株在7个位点上发生了25次变异.在M蛋白序列上预测获得3个跨膜螺旋序列和一个可能的信号肽序列.氨基酸序列的变异主要发生在其跨膜和胞外区域,胞内区域相对较少.预测发现12个Motif和7个抗原决定簇.提示突变对M蛋白的结构功能区的影响不大,也未造成M蛋白的Motif的数量和构成发生改变.对抗原决定簇的影响也主要体现在序列成分构成的改变上,在设计疫苗时,应考虑由其导致的抗原特性改变.     

Expression and Purification of N and E Proteins from Severe Acute Respiratory Syndrome (SARS)-Associated Coronavirus: a Comparative Study

Histidine-tagged N (rNH) and E (rEH) proteins of Severe Acute Respiratory Syndrome (SARS)-coronovirus were expressed in the baculovirus/insect cell system and purified by immobilized metal affinity chromatography. rNH and rEH proteins differed markedly with respect to expression levels, cell death kinetics and subcellular localizations that led to different extraction and purification schemes. The features of both proteins are compared and the potential applications of purified rNH and rEH are discussed.     

SHIV-KB9感染中国恒河猴动物模型的建立

目的为了进一步确证SHIV-KB9感染中国恒河猴的病毒浓度范围,测试动物对病毒的适应性,明确该动物模型的可重复性。方法实验前采集猴血清并进行血清学检查。选出4只无SIV、STLV、SRV/D和B病毒感染的恒河猴,分别用10倍系列稀释的病毒液静脉感染实验猴,使用流氏细胞术、血常规、病毒分离、DNA-PCR和RT-PCR等方法确定实验猴是否被感染,以及感染后恒河猴体内病毒复制和免疫细胞损伤情况。结果实验猴的血浆病毒载量、病毒分离结果、CD4＋/CD8＋比值和CD4＋T细胞数等证实,4.8×105 copies/mL以上浓度的SHIV-KB9病毒液能成功感染中国恒河猴。结论本研究进一步明确了SHIV-KB9感染中国恒河猴的有效病毒浓度范围,确定了SHIV-KB9病毒感染中国恒河猴的病毒学、免疫学的测定指标,成功的建立了SHIV-KB9/中国恒河猴动物模型。     

单纯疱疹病毒致病模型的研究

对单纯疱疹病毒（HSV）感染小白鼠致病特点进行了观察。小白鼠感染HSV第4天后开始发病,感染后2h血液内可分离出病毒,第48小时病毒血症水平和病毒检出率较高。不同组织病毒分布不同,脑、神经节在感染后第72小时病毒滴度较高,心、肝组织在第5天达到高峰。结果说明所建立的HSV致病模型可用于评价抗HSV药物。     

裸鼠呼吸道合胞病毒感染的动物模型

呼吸道合胞病毒(RSV)是全世界婴幼儿下呼吸道感染的首位病毒病原体,免疫缺陷个体容易发生严重感染,目前尚无理想RSV感染动物模型用于研究.我们用细胞免疫缺陷裸鼠感染RSV,旨在建立理想的动物模型,为RSV感染的防治研究奠定基础.裸鼠滴鼻感染RSV后肺组织分离到病毒,直接免疫荧光检测到支气管肺泡灌洗液RSV抗原阳性,空斑形成实验检测肺组织病毒滴度在感染后第3天达高峰,并持续到第9天仍能检测到病毒.免疫组化检测RSV抗原主要分布在细支气管、毛细支气管和肺泡上皮细胞胞浆内.肺组织病理学显示RSV感染导致裸鼠淋巴细胞浸润为主的肺间质性炎症,电镜分析超微结构可见到细胞内病毒颗粒和气血屏障的破坏.支气管肺泡灌洗液白细胞计数显示裸鼠RSV感染炎症高峰在感染后第9天.裸鼠RSV感染的病毒复制和病理改变特点与人相似,病毒持续高水平复制,是客观而实用的评价抗RSV制剂效果的小鼠模型.     

裸鼠呼吸道合胞病毒感染的动物模型

呼吸道合胞病毒(RSV)是全世界婴幼儿下呼吸道感染的首位病毒病原体,免疫缺陷个体容易发生严重感染,目前尚无理想RSV感染动物模型用于研究。我们用细胞免疫缺陷裸鼠感染RSV,旨在建立理想的动物模型,为RSV感染的防治研究奠定基础。裸鼠滴鼻感染RSV后肺组织分离到病毒,直接免疫荧光检测到支气管肺泡灌洗液RSV抗原阳性,空斑形成实验检测肺组织病毒滴度在感染后第3天达高峰,并持续到第9天仍能检测到病毒。免疫组化检测RSV抗原主要分布在细支气管、毛细支气管和肺泡上皮细胞胞浆内。肺组织病理学显示RSV感染导致裸鼠淋巴细胞浸润为主的肺间质性炎症,电镜分析超微结构可见到细胞内病毒颗粒和气血屏障的破坏。支气管肺泡灌洗液白细胞计数显示裸鼠RSV感染炎症高峰在感染后第9天。裸鼠RSV感染的病毒复制和病理改变特点与人相似,病毒持续高水平复制,是客观而实用的评价抗RSV制剂效果的小鼠模型。     

机械通气与乌司他丁治疗急性呼吸窘迫综合症的疗效观察

目的:观察机械通气与乌司他丁治疗急性呼吸窘迫综合症的临床疗效。方法:回顾性分析60例急性呼吸窘迫综合症患者的资料,治疗组(30例)采取机械通气与乌司他丁治疗,对照组(30例)采取机械通气治疗,观察两组的的呼吸频率、PaO2、PaO2/FiO2、PCO2、APACHEII评分、胸片变化、VAP发生率及病死率。结果:治疗组的呼吸频率、PaO2、PaO2/FiO2、PCO2指标均优于对照组(t=6.39,6.27,24.07,9.82,P0.05);治疗组的VAP发生率20.0%明显小于对照组的36.7%(X2=5.84,P=0.0160.05);治疗组的病死率3.3%明显小于对照组的16.7%(X2=5.71,P=0.0170.05)。两组之间的APACHEII评分及胸片变化均有明显差异(t=7.14,6.33,P0.05)。结论:机械通气与乌司他丁治疗急性呼吸窘迫综合症的临床疗效较好,能够较好地改善肺功能,缓解ARDS患者症状,提高安全可靠性,控制死亡率。     

机械通气与乌司他丁治疗急性呼吸窘迫综合症的疗效观察

目的：观察机械通气与乌司他丁治疗急性呼吸窘迫综合症的临床疗效。方法：回顾性分析60例急性呼吸窘迫综合症患者的资料,治疗组（30例）采取机械通气与乌司他丁治疗,对照组（30例）采取机械通气治疗,观察两组的的呼吸频率、PaO2、PaO2／FiO2、PCO2、APACHEII评分、胸片变化、VAP发生率及病死率。结果：治疗组的呼吸频率、Pa02、PaO2/FiO2、PCO2指标均优于对照组（t=-6．39,6．27,24．07,9．82,P〈0．05）;治疗组的VAP发生率20．0％明显小于对照组的36．7％（x^2=5．84,P=0．016〈0．05）;治疗组的病死率3.3％明显小于对照组的16．7％（x^2=5．71,P=0．017〈0．05）。两组之间的APACHEII评分及胸片变化均有明显差异（t=7．14,6．33,P〈0．05）。结论：机械通气与乌司他丁治疗急性呼吸窘迫综合症的临床疗效较好,能够较好地改善肺功能,缓解ARDS患者症状,提高安全可靠性,控制死亡率。