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1.
PARP酶抑制剂未引起整合的外源LacZ基因的丢失 总被引:2,自引:0,他引:2
使用聚ADP核糖聚合酶(PARP)NAD位点抑制剂苯甲酰胺(BA)研究了降低PARP酶活性对外源LacZ基因整合稳定性的影响,利用DNA体外重组技术将LacZ基因全序列插入到真核表达载体载体PSV2neo的HindⅢ位点,构建了一个具有真核细胞neo基因筛选标记和LacZ基因的真核表达重组体PSV2neo-beta-gal将该重组体导入HeLa细胞,经G418筛选获得了能稳定表达β-半乳糖苷酶的H 相似文献
2.
表达LacZ基因重组火鸡疱疹病毒(HVT)的构建 总被引:3,自引:0,他引:3
将不含任何启动子的E.coli LacZ基因,插入火鸡疱疹平素FC-126株胸苷激酶编码区末尾的NheⅠ位点,构建成转移载体质粒pTKLacZ。用此质粒和HVT感染的细胞基因组总DNA共感染鸡胚成纤维细胞,在X-gal存在下,通过蓝斑筛选,分离到重组体HVT。rHVT与野生型HVT-FC-126株在CEF中的生长特性完全相似,且在连续传代过程中能稳定表达LacZ基因。 相似文献
3.
中国疫苗株鸡痘病毒插入载体的构建与MDV糖蛋白B的表达 总被引:15,自引:1,他引:15
在对中国鸡痘病毒疫苗株282E4基因组DNA进行克隆与亚克隆的基础上,进一步插入P11-LacZ标记基因,根据蓝斑选择原理筛选出3个病毒在细胞培养物上生长所不必需的片段,为了便于外源基因的插入,特将P7.5-P11-LacZ基因框转移至BLUESCRIPTSKM13-的Apal将MCS-P7.5-P11-LacZ框切下,置入一个亚克隆的非必需片段中,构建成中国鸡痘病毒插入载体pFG1175-1,以 相似文献
4.
痘苗病毒天坛株非必需区TA25R…TA36L的两步重组表达载体的构建 总被引:1,自引:1,他引:0
针对痘苗病毒天坛株非必需区TA25R-TA36L,构建了可去除TA26R至TA35L的10个ORFs,并同时表达LacZ的两步重组表达载体pA2427LacZ。通过两种方法(一步重组和两步重组)获得了在该区域表达LacZ基因的重组痘苗病毒RVA2427Ldisplay status 相似文献
5.
为探索组织化学方法检测标志基因在正常骨髓细胞及白血病细胞的表达,本研究利用脂质体介导将NeoR基因和LacZ基因共转移正常人及白血病人骨髓细胞。然后,采用X-gal染色的方法,我们观察了LacZ基因在转导细胞的表达。结果显示:LacZ基因在正常人及白血病人骨髓细胞表达的阳性率分别为13.33%±2.68%和15.39±3.69%。经G418筛选后,转导阳性细胞率达到46.06%±3.47%和48.22%±4.47%。提示:经脂质体介导LacZ基因在正常骨髓细胞及白血病细胞可获得高效的转移率。同时表明,利用组织化学方法可有效地检测标志基因的表达。 相似文献
6.
酵母PH081基因的克隆和表达 总被引:4,自引:3,他引:1
从酵母染色体DNA中获得1个约3.0kb的BamHI的克隆片段和1个约5.0kb的PstI片段,前者包含1745bp的PHO81基因编码序列及1244bp的上游列,后者包含2236bp的编码序列及约2.8kb的下游序列,经拼接得完整的PHO81基因。以URA3基因取代部分PHO81的编码序列,通过体内同源重组,获得PHO81基因缺陷的酵母细胞株。构建PHO81-LacZ融合基因,以β-半乳糖苷敏的 相似文献
7.
重组抗体—尿激酶导向溶栓剂的基因构建及表达 总被引:5,自引:0,他引:5
为了获得高效、高特异性溶栓药物,应用基因工程技术,成功的表达了由人源化抗人活化血小板单抗和单链尿酶组成的抗体导向溶栓剂(SZ51Hu-scuPA)。通过基因重组PCR方法将scuPA全长cDNA的N末端连接在SZ51重链恒区CH3末端,构建了含有目的蛋白融合基因的真核表达载体αlys30-SZ51VH/Hu-scuPA。采用脂转染法将表达载体导入分泌SZ51VK/Hu轻链的小鼠骨髓瘤细胞中,筛选出 相似文献
8.
棉铃虫核型多角体病毒凋亡抑制基因对p35基因失活病毒的功能拯救 总被引:3,自引:0,他引:3
野生型苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒(AcNPV)能感染棉铃虫细胞,不引起细胞凋亡,用LacZ基因使AcNPV凋亡抑制基因p35插入失活,得到缺陷病毒Acp35Z能迅速引起棉铃虫细胞凋亡,但缺陷病毒本身不能复制。用AcNPV即早期基因IE1启动子带动棉铃虫杆状病毒(HaNPV)p35基因在棉铃虫细胞中瞬时表达,能拯救p35基因失活病毒Acp35Z复制。通过X-gal显色反应和dotELISA分别检测到了半乳糖苷酶的活性和p35基因的表达,证明了所克隆的HaNPVp35基因不仅是一个凋亡抑制基因,也是一个与杆状病毒复制相关的基因,它的瞬时表达能支持Acp35Z在棉铃虫细胞中复制。 相似文献
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单纯疱疹病毒Ⅰ型扩增子质粒载体的构建及LacZ基因的表达 总被引:1,自引:0,他引:1
从单纯疱疹病毒Ⅰ型HSV-1基因组中分离出其包装信号序列,与含HSV-1复制起点及IE-68基因启动子的DNA序列、β半乳糖苷酶基因和大肠杆菌质粒骨架,构建了一种HSV-1扩增子质粒载体pHSL,其中LacZ基因置于IE-68基因启动子控制下。将此质粒转染已感染了HSV-1温度敏感株tsK株的Vero细胞,pHSL可在HSV-1tsK的辅助下包装成假病毒颗粒,这样就可得到同时含有假病毒和HSV-1tsK的混合毒株dvHSL。将此混合毒株感染传代细胞和神经细胞,可在其中表达LacZ基因,而在生理温度(37℃)下,混合毒株的复制受到抑制。提示这种缺陷型疱疹病毒载体有用于向神经系统基因转移的可能性。 相似文献
10.
汉滩病毒A9株M基因片段在重组痘苗病毒中的表达及鉴定 总被引:7,自引:0,他引:7
为发展国产化肾综合征出血热(HFRS)病毒基因工程疫苗,选择了汉滩病毒A9株M基因片段为目的基因,构建转染质粒pJSBA9M。以携带Lac基因的重组病毒为亲本,使表达载体pJSB-A9M上的M片段与痘苗病毒内的Lac基因重组,将Lac置换成A9M片段。用蓝白斑法筛选重组痘苗病毒,经PCR扩增证实A9M片段重组入痘苗病毒基因组内。重组痘苗病毒感染的Vero E6细胞,用抗糖蛋白单克隆抗体(HCO2、 相似文献