酿酒酵母嗜杀质粒(dsRNA)的提取与分离纯化

对酿酒酵母嗜杀质粒的提取、电泳检测及纯化方法进行了研究。以改进的Fried和Fink方法在不预破细胞壁的情况下,巯基乙醇在碱性条件(pH9. 3)预处理后,直接以SDS-苯酚抽提完整细胞分离到了嗜杀质粒(dsRNA) 。在此基础上, 以电泳透析方法获得了纯化的M2和L双链RNA,琼脂糖凝胶电泳测定分子大小分别为1.5kb和4.0kb。Abstract:The method of extraction and purification of the double-stranded RNA killer plasmids from Saccharomyces cerevisiae was studied.With the improved method of Fried and Fink we directly extracted the intact cells with SDS-phenol after pre-treating the cells with ß-mercaptoethanol under analkli condition.The result was detected and confirmed by the gel electrophoresis.On this basis we acquired the purified M2 and L-dsRNA by means of electrophoretic dialysis,their molecular lengths being 1.5kb and 4.0kb respectively.     

嗜杀酿酒酵母毒素蛋白及其杀伤质粒的研究

Killer toxin from %Saccharomyces cerevisiae% SK was isolated by ultrafiltration of culture supernatants and purified by poly(ethylene glycol). The toxin migrates as one single protein band on SDS-PAGE and its molecular weight is 15kD. The SK toxin has the greatest lethal effect on the sensitive yeast strain in the lat lag phase. Extraction and purification of killer heretity factor(dsRNA) from SK found that M dsRNA plasmid and L dsRNA plasmid have different molecular lengths being 1.7kb and 4.0kb.     

嗜杀酵母的生物学功能及其应用

嗜杀酵母能够分泌毒素蛋白,杀死敏感酵母。嗜杀酵母对自身分泌的嗜杀毒素具有免疫力。嗜杀酵母的嗜杀特性与两种双链线状RNA(dsRNA)有关,即编码产生毒素蛋白的M-dsRNA和编码自身和M-dsRNA外壳蛋白的L-dsRNA。嗜杀毒素破坏细胞跨膜化学质子梯度,造成ATP和钾离子泄漏,导致细胞死亡。应用嗜杀酵母可避免野生型酵母污染,净化发酵体系,改善发酵产物品质;嗜杀毒素也可作为抵制病原酵母和类酵母微生物的抗真菌剂。     

重组酿酒酵母腺苷激酶的表达、纯化和鉴定

腺苷激酶 (adenosinekinase ,AK)是控制细胞中腺苷浓度的一种关键酶 ,在许多细胞和组织中发挥着重要的生理效应子作用。从酿酒酵母 (Saccharomycescerevisiae)中克隆了腺苷激酶基因 (ak) ,并将其接入大肠杆菌pET16b表达质粒中进行表达。重组蛋白质经部分纯化后 ,测定其酶动力学常数 ,结果表明该酶对腺苷的Km 值为 (3.5± 0 .2 ) μmol L ,对ATP的Km 值为(10 0 .0± 11.0 ) μmol L ,对腺苷的kcat值为 (15 30± 2 0 )min- 1 ,对ATP的kcat值为 (14 4 8± 2 5 )min- 1 。该酶对其他核苷和脱氧核苷的Km 值测定数据表明 ,从酵母中克隆得到的该重组腺苷激酶具有较高的底物特异性。     

酿酒酵母两种不同嗜杀菌株的比较研究

以酿酒酵母两种不同类型的嗜杀菌株SK4（K1型）和ERRI（K2型）为材料,分析了不同嗜杀酵母的嗜杀特性,两株嗜杀酵母具有相互杀死作用,其嗜杀活性与菌体生长有关。SK4和ERRI的嗜杀质粒的比较表明：M1－dsRNA质粒和M2-dsRNA质粒分子量分别为1．7kb和1．5kb,两株菌的L－dsRNA质粒均为4．0kb。用高温和紫外线处理嗜杀酵母,嗜杀活性随之消失,消除菌中的M－dsRNA质粒也相应消失,嗜杀活性的消除率随菌株和消除剂的不同而变化。实验证明两株菌产生的毒素蛋白的最适嗜杀作用条件不同,最适pH和温度分别为4．8、16℃和4．0、22℃,但两种毒素蛋白均对在对数生长期的敏感细胞作用最显著。     

酿酒酵母BD101诱导产生的金属硫蛋白的分离纯化及鉴定

从酵母菌中分离出拮抗重金属、经铜诱导产生金属硫蛋白的酿酒酵母（Saccharo－mycescerevisiae）BD101。无细胞抽提液经SephadexG－50、DEAESepharoseCL－4B、SephadexG-25三次凝胶及阴离子交换柱层析分离纯化得到两个金属硫蛋白亚型。Mr约为7kD,由60个氨基酸组成,其中半胱氨酸含量占10％,每分子金属硫蛋白（Cu-MT）含6个分子Cys,可结合4个铜原子。     

一种嗜热厌氧纤维素降解细菌的分离纯化方法

根据纤维素降解细菌对不溶性纤维素底部的粘附作用,利用Ｈｕｎｇａｔｅ厌氧操作技术直接以不溶性纤维素粉为基质进行滚管,分离和纯化获得嗜热厌氧纤维素降解细菌。     

嗜热脂肪芽孢杆菌质粒的分离

从堆肥和污泥中分离到一批抗药性高温细菌,经电泳检查,发现6株高温细菌细胞中有质粒存在。其中,嗜热脂肪芽孢杆菌T653的细胞DNA提取液电泳图谱上,有三条非染色体DNA条带,用电镜直接观察,证明它们是T653细胞中的三个质粒。测得两个较小质粒的分子量分别为3.6×10~6和45×10~6道尔顿。研究了嗜热脂肪芽孢杆的T653的温度生长条件与其细胞中质粒的关系。T653细胞中三个质粒的明确功能有待进一步探讨。     

酿酒酵母胞内无机焦磷酸酶的分离纯化及性质

An inorganic pyrophosphatase (EC3.6.1.1) from Saccharomyces cerevisiae was purified to PAGE homogeneity by sonication disruption. (NH4)2SO4 fractionation and DEAE-cellulose colunm chromatography. The optimum pH and temperature of the enzyme were 7.4～7. 8 and 60℃, respectively. The Km was 19.3 mmol / L. The enzyme required Mg2+ as a cofactor for hydrolysis of pyrophosphate and was inhibited by Ca2+, Hg2+, Pb2+, Mn2+.