基于液氮研磨法的流式细胞术检测马铃薯倍性的研究

染色体组倍性鉴定是马铃薯种质资源评价的重要内容,流式细胞仪能够快速、准确地对细胞核DNA含量进行测定,从而广泛用于检测植物染色体组倍性。建立适于马铃薯倍性鉴定的高通量流式细胞术体系,对马铃薯育种工作提供依据。以20份马铃薯合作88孤雌诱导后代为材料,用液氮研磨法制备叶片细胞核悬液,并将其与传统刀片切碎法制备的细胞核悬液进行比较,对已知四倍体马铃薯合作88和二倍体马铃薯IVP101进行染色体倍性测定,结果发现这两种方法在倍性测定结果之间无明显差异,但是液氮研磨法操作简单、耗时少。基于液氮研磨法的流式细胞术可快速、准确检测其倍性。另外,在液氮研磨法中,对细胞核悬液染色时间的长短(从15 min到12 h)并不会影响倍性测定结果,从而方便研究人员在实际操作中灵活选择染色时间。     

兔骨组织总蛋白的提取和在免疫印迹法中的应用

探讨快速有效的骨组织总蛋白提取法和利用该方法进行免疫印迹研究.采用单纯研磨法、单纯锤击法和锤击研磨法分别对兔骨组织蛋白进行提取,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳对蛋白进行分离,利用免疫印迹法检测骨组织中beta-actin的表达,比较3种骨组织蛋白提取法.发现3种蛋白提取法均可满足免疫印迹研究要求,但是锤击研磨法提取的蛋白含量比单纯锤击法高,并能更好的保留49 kDa以下的蛋白,而且该操作法比传统的单纯研磨法更为方便、快捷,还能节省液氛用量.锤击研磨法可作为提取骨组织蛋白的一种理想方法.     

叶绿体中色素的提取和分离实验的改进

把剪碎的叶片放于研钵中加少许二氧化硅和碳酸钙,研磨,基本磨碎后再加1毫升丙酮,再迅速充分研磨。取干燥的定性滤纸剪成长10厘米、宽1厘米的条。在滤纸条的一端对称地剪去两小角,使两斜角边长1.5厘米,下端宽1.5毫米。此纸条插入层析液中不会因纸端太窄、湿软而难于     

应用CTAB法对砂梨品种DNA提取效果的研究

为了获得质量较好的DNA,我们采用CTAB法对11个砂梨品种的叶片DNA提取情况进行了研究,发现参试样品中一些样品的蛋白质含量较多,而另外一些样品的多糖、酚类物质含量较高。对于蛋。白质含量较多的这类材料,适当增加24：1的处理次数能够使蛋白质沉淀下来;对于多糖、酚类物质含量较高的材料,用5mol／L的NaCl和3mol／L的NaAc等处理能够有效的降低多糖含量。另外,对研磨样品的加入量和PVP的加入时间进行了对比,最后用双酶切、电脉检测等不同的分析方法对所得到的DNA提取物的浓度和纯度进行检测,发现加入样品量在0．3g左右、在研磨后的粗提液中加入PVP,所得到的DNA质量较好.     

海藻预处理工艺研究

大型海藻是中含有大量的糖分,能被微生物利用进行发酵作用来生产乙醇。为了提高乙醇的产率,优化预处理方法是必要的。本课题主要通过物理研磨法、蒸煮法、酸解法和酶解法处理海藻以优化出糖类溶出量最大的预处理条件。物理研磨法条件为固液比1:20,温度28℃,处理2h;蒸煮法条件为固液比1:30,温度90℃,处理1.5h;酸解法条件为固液比1:30,温度为80℃,处理1h;酶解法条件为酸解液残渣在温度40℃下酶解3h。且酸解后进行酶解的处理方法是糖类溶出量最大的处理方法,条件为80℃的酸解残渣在纤维素酶的作用下40℃酶解3h。     

新型淀粉基全生物降解薄膜的研究

以玉米淀粉为主要原料,研究了蚋米SiO_2改性淀粉薄膜的最佳分散处理工艺,并通过测定样品的红外吸收光谱、X-射线衍射图和扫描电镜照片对该膜的结构进行了分析。结果表明:纳米SiO_2的最佳分散工艺为向2g纳米SiO_2的分散液中加入0.015g聚丙烯酰胺(PA)后,先用机械力研磨分散1h,然后置入淀粉-聚乙烯醇(ST-PVA)共混液中;纳米SiO_2在淀粉和聚乙烯醇分子间形成了均一致密的交联网状结构;所制备薄膜的各项性能均得到大幅度提高,其中拉伸强度可达34.82Mpa,断裂伸长率为331%,达到国标GB 4456—84所规定的标准。     

落叶松球果花蝇头胸和腹部粗提液阻碍与引诱作用的试验

将雌性落叶松和黑松球果花蝇头胸和腹部充分研磨 ,加入溶剂正己烷得到粗提液。应用该粗提液进行了球果花蝇产卵阻碍信息素和性引诱信息素的野外试验。初步结果显示球果花蝇有产卵阻碍信息素作用的存在 ,但还需进一步试验证明 ;同时结果未显示有性引诱效果。     

龙虾胃肠神经系统的数值分析

利用抑制神经系统的WinnerLess Competition(WLC)模型,通过数值方法分析Mulloney型龙虾胃肠神经系统神经元的电位发放,得到胃研磨囊和幽门神经系统中各个神经元的电位发放和系统的节律变化。结果表明,胃研磨系统内神经元的发放规律显示两侧牙齿和中间牙齿出现切断、挤压和研磨食物等状态,幽门系统内神经元的发放规律显示幽门节律出现依次发放的三个部分。两个神经系统的数值结果,不仅解释了龙虾胃肠神经系统中神经元电位发放与肌肉运动的关系,而且理论再现了龙虾胃肠神经系统的节律变化和实验结果。     

烟草花粉管生长信号转导研究中一种简单的RNA提取方法

液氛研磨是一种从具有坚韧细胞壁的植物细胞中提取RNA的常规方法．然而．对于那种不易得到的少量的植物材料如花粉,这种方法的操作显得尤为困难。针对这一问题．本论文描述了一种不涉及液氮研磨的一种简单的RNA提取方法：改变萌发花粉管的渗透压使其破裂而释放RNA。这一方法减少了RNA抽提材料的用量并且提高了RNA的抽提效率．用于RNA抽提的花粉的量可以少至一个花药。后续的RNA分析需要的花粉可以少至10毫克．这一用量相当于从50个烟草花药中得到的量．这一RNA提取方法的可靠性和可操作性为研究花粉管生长过程中对细胞外信号响应的基因时空表达提供了有益的参考。     

“叶绿体中色素的提取和分离”实验改进

本实验是高中生物必做实验之一。根据我地区的实际情况 ,为了使学生更好、更快、更安全节约地做好实验 ,我们做了一些改进 ,取得了较好效果。现介绍如下。1　改进的内容1.1　提取色素　取校园草坪中青草 5 g剪碎放于研钵中 ,加二氧化硅和碳酸钙各 1/ 4牛角匙 ,充分研磨后再加入无水酒精 2 ml迅速研磨。然后用一块干净的细纱布叠成 2～ 4层 ,铺于直径 6cm的培养皿上 ,将研磨后的叶片匀浆倒在纱布上 ,收拢纱布用力挤捏 ,即可在培养皿中收集到色深液浓的色素滤液 ,盖好培养皿盖待用。1.2　制备滤纸条　将干燥处理的滤纸顺纸纹方向剪成10 cm× 1…     

"叶绿体中色素的提取和分离"实验方法

１　提取色素　为了得到墨绿色的色素滤液,于实验前２～３天,取质地柔软、深绿色的草本植物的叶片放在通风处阴干。研磨时,所取叶片要除去粗的叶脉和叶柄。向研钵中加入少量二氧化硅和碳酸钙,进行研磨。待研磨充分后,再加入少量氯化钠和适量丙酮,就出现了深绿色的液体,液体经脱脂棉过滤后就得到了墨绿色的色素滤液。２　划滤液细线　用毛细吸管吸取色素滤液,采用毛笔的执笔方式握住毛细吸管,悬腕,沿滤纸条上的铅笔划线作快速的划动,重复２～３次,就可以得到细、匀、齐的滤液细线。３　分离色素３．１　采用小试管法　取长１５ｃ…     

油气田土壤DNA提取方法及油气指示菌基因定量结果的比较

采用4种提取方法对油田上方6个土壤样品微生物总基因组DNA进行提取,并比较了其纯度和浓度。利用定量PCR技术定量分析各土壤中甲烷单加氧酶基因（pmoA）和丁烷单加氧酶基因（brnoX）。与DNA试剂盒法相比,玻璃珠击打法、液氮研磨法、反复冻融法得到DNA纯度较低,需纯化才能进行后续的PCR扩增。液氮研磨法得到的DNA完整性、纯度和得率较其他提取方法均较好,尤其对于生物量较少的深层油田土壤DNA提取较为实用,成本较低。甲烷单加氧酶基因（pmoA）和丁烷单加氧酶基因（bmoX）的定量PCR结果表明,液氮研磨法提取DNA样品的定量结果在气区和油区均出现一定的高值。液氮研磨法较其他方法更适合于油田土壤DNA的提取。下一步研究可以把丁烷氧化茵作为油气指示茵研究中的重点检测对象。     

瘤胃微生物RNA提取中样品前处理方法的优化

通过优化瘤胃液前处理方法,提高瘤胃微生物RNA提取数量与质量。试验优化4个前处理条件,共组合形成5个处理组。前处理完成后,利用Trizol进行RNA提取,检测RNA浓度和完整度(RIN)。结果显示,提取瘤胃内容物和瘤胃菌体RNA浓度和完整度的影响没有显著差异(P0.05)。液氮保存的样品提取的RNA浓度和完整度均显著(P0.05)高于RNA保护液保存的样品。解冻处理对RNA浓度的影响无显著差异(P0.05),但是不解冻处理提取的RNA完整度显著高于解冻处理(P0.05)。液氮冷冻研磨提取的RNA浓度(P0.05)显著高于常温研磨,但是对RNA完整度的影响没有显著差异(P0.05)。瘤胃内容物、液氮速冻、不解冻处理结合冷冻研磨方法所提取RNA的RIN值为9.43,完整度最高。瘤胃内容物、液氮速冻、解冻离心收集菌体结合冷冻研磨方法所提取的RNA浓度为1 048 ng/μL,为最高浓度。因此,瘤胃内容物直接液氮速冻并在不解冻条件下冷冻研磨,所提取的RNA效果最好,可用于后续宏转录组学试验。     

对谷物种子萌发时淀粉酶活性测定方法的一点改进

多年来我们教学中使用的实验教材是华东师范大学生物系植物生理教研组主编的《植物生理学实验指导》（高等教育出版社,1985）。现对书中“实验83——谷物种子萌发时淀粉酶活性测定”步骤中淀粉酶溶液的制备方法和酶活力的计算公式谈谈个人的一些看法,正确与否,希同行们指教。关于淀粉酶的制备方法。严格来说,淀粉酶被提取后,用滤纸过滤得到澄清的酶液,进一步定容至一定体积是欠妥的。过滤后再走容会造成物质的损失,淀粉酶溶液浓度变小。因此以采用离心方法为好。离心之前,先将研磨好的混合酶液（残渣与酶提取液）一并定容到所需体积…     

光声光谱法测定植物叶片中的叶绿素含量

在植物生理学研究中常用Arnon法比色测定植物叶片中的叶绿素含量,但该法要通过研磨、提取、定容、比色和计算等一系列步骤。特别是测定样品数量较多时费时较长;同时由于研磨、提取过程中的光照,破坏了部分叶绿素,以致叶绿素含量偏低,各对照组之     

一个新的粗糙脉孢霉基因组DNA制备方法

粗糙脉孢霉基因组DNA的制备多数费工费时,并且需要液氮研磨。而一般实验室没有液氮设备。本文提供了一个不需要液氮研磨就可以快速制备粗糙脉孢霉基因组DNA的方法,使用裂解液、石英砂和苯酚振荡裂解细胞壁,然后用苯酚／氯仿抽提DNA。利用PCR从基因组扩增出粗糙脉孢霉Ⅰ号染色体右臂上的校孔转运蛋白基因片段。     

一种高效提取真菌总DNA的方法

<正>在真菌的分子生物学研究中,快速高效地提取质量优良的DNA有着重要意义。目前使用的真菌DNA提取方法步骤大体相似,主要差别在于采用何种方法来打破细胞壁这一关键环节。常用的破壁方法主要有冷冻干燥研磨法、玻璃珠机械破壁法、酶解法和氯化苄法等(吴志红2001)。通常冷冻干燥研磨法多用液氮来处理,一般是直接在液氮中研磨     

蛇类浸制标本,剥制标本和骨骼标本的制作方法

(一)、蛇类浸制标本制作蛇类动物整体浸制标本是最简单的,整体浸制即是整个动物体、不作解剖,按原来的外部形态整理好姿态,直接浸渍在固体液中保存供教学和陈列展览之用.1、工具、器材和药品量具、注射器、标本瓶和标签。药品需用乙醚[(C2H6)20]作为麻醉剂、福尔马林(CH_2O)作固定保存液。2、标本的选择和处理蛇类的标本材料主要是从野外采集而来,在     

考马斯亮蓝G-250染色法测定柠条锦鸡儿种子中可溶性蛋白含量

目的:建立快速、灵敏的蛋白质含量测定方法,对柠条锦鸡儿种子中可溶性蛋白质含量进行测定;方法:运用超声与研磨两种方法提取柠条锦鸡儿种子中的可溶性蛋白,采用考马斯亮蓝G-250染色法对其进行测定;结果:超声提取与研磨提取得到可溶性蛋白含量分别为6.91%、6.87%,RSD分别为0.72%,0.67%;结论:考马斯亮蓝G-...     

基因工程菌里氏木霉染色体DNA的提取方法

研究基因工程菌株里氏木霉(Trichoderma Teesei)染包体DNA的提取方法。采用冷冻研磨CTAB法、氯化苄SDS法和冷冻研磨SDS法三种提取DNA的力法。通过琼脂糖凝胶电泳埘提取的DNA进行检测。结果表明：冷冻研磨CTAB法更适合此类DNA的提取。对冷冻研磨CTAB法提取条件进行了优化。用该法提取的DNA上的外源基因t—PAcDNA部分片段进行PCR扩增,获得良好结果。用本实验冷冻研磨CTAB法提取的DNA完全适用于PCR和其它的分子生物学操作的要求。