香蕉束顶病毒基因Ⅰ的克隆及序列分析

以中国漳州地区感染ＢＢＴＶ的香蕉组织总ＤＮＡ为模板,根据我国台湾地区ＢＢＴＶ分离物基因组Ⅰ序列,设计并合成了一对引物,通过ＰＣＲ扩增出约５００ｂｐ的片段。利用ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔⅡＳＫ Ｔ－载体获得此片段的克隆,经测序表明为ＢＢＴＶ组分Ⅰ的部分序列。由已测知的ＢＢＴＶ基因组Ⅰ序列设计一对相邻引物,以我国漳州的感染ＢＢＴＶ香蕉组织总ＤＮＡ为模板,通过ＰＣＲ坟增出约１．１ｋｂ的片段。利用ｐＢｌｕｅｓ     

香蕉束顶病毒研究进展

香蕉束顶病毒（Bananabunchytopvirus,BBTV）引起的香蕉束顶病（Ban。bu。bytoPdisease）是香蕉一种严重的病毒病害。迄今此病已普遍分布在世界许多产区,诸如：亚洲、非洲、澳大利亚、南太平洋一些岛屿以及美国的夏威夷等地区［‘－’l。在我国广东、广西、福建、云南等省的部分产区的发病率约占5—25％左右,严重地块已发展到毁灭性程度卜］。1987年Dale曾对世界香蕉种植的地理分布和BBTV的流行范围之间的关系、病株症状、病毒病原学、流行病学、病毒诊断方法以及病害的控制作过全面的综述【门。然而由于BBTV存在于寄主植物的韧皮…     

香蕉束顶病毒基因克隆和序列分析

对香蕉束顶病毒（ＢＢＴＶ）中国分离株ＤＮＡ组份Ｉ（ＤＮＡ－１）、外壳蛋白（ＣＰ）和运转蛋白（ＭＰ）基因进行了克隆和序列分析。ＢＢＴＶＤＮＡ－１含有１１０３个核苷酸,与南太平洋和亚洲分离株分别有８７％－８８％ ９６．９－９８％的核苷酸序列同源性。由ＤＮＡ－１编码的复制酶含有１８６个在酸残基。与南太平洋和亚洲分离株分别有８４．４％－９５．８％和９７．６％、９８．０％的氨基酸序列同源性。外壳蛋白基因由５     

香蕉束顶病毒DNA组分6的克隆和序列分析

香蕉束顶病(banana bunchy top disease,BBTD)是香蕉生产上重要的病害之一,它威胁着世界约1/4香蕉产区的生产[1].到1998年7月,世界上报道发生该病害的国家和地区达20多个,遍及亚洲、南太平洋地区和少数非洲国家.     

香蕉束顶病毒DNA组分4的克隆与序列分析

香蕉束顶病毒(banana bunchy top virus,BBTV)基因组中至少含有6个DNA组分,我们实验室已经对BBTV广东两个株系(NS和NSP)基因组中的DNA组分1、3、6进行了测序和报道.现又对NS和NSP的DNA组分4分别进行了克隆和序列分析.     

香蕉束顶病毒复制酶基因克隆及转基因表达

以广州市郊获得的香蕉束项病毒(BBTV)的DNA为模板,进行PCR扩增得到香蕉束项病毒复制酶基因的1.1 kb DNA.所获得的DNA序列与澳大利亚的BBTV序列的同源性达90%,这部分序列编码香蕉束顶病毒复制酶基因的羧基端.将改造的BBTV复制酶基因克隆到pBll21的CaMV 35S和NOS终止序列之间,构建表达载体,并采用基因枪轰击香蕉试管苗生长点组织的方法,经PCR检测和Westem blot分析,获得4株具有BBTV复制酶基因整合表达的To代转基因香蕉.转基因植株的抗病性正在检测之中.     

香蕉束顶病毒研究进展

香蕉束顶病毒(Bananabunchytopvirus,BBTV)是引起香蕉束顶病害(Bananabunchytopdisease,BBTD)的病毒,它严重地危害了香蕉的生产。综述了近年来香蕉束顶病毒的分离提纯方法,株系划分以及分类地位,较为全面的介绍了BBTV病毒基因组分结构和各组分编码蛋白的功能等,并提出了目前需要进一步澄清的问题。     

香蕉束顶病毒NS株DNA组分5的克隆和序列分析

本文利用PCR技术扩增得到香蕉束顶病毒(BBTV)NS株DNA组分5的全基因,该基因全长为1014nt,具有一个开放阅读框,编码146个氨基酸,蛋白质二级结构包括6个α-螺旋,7个β-折叠.NS株系与南太平洋组澳大利亚、夏威夷、埃及分离物DNA组分5核苷酸和编码的氨基酸序列相比较,核苷酸序列同源率介于88%～89%之间,氨基酸序列同源率介于80%～88%之间.NS株系与其它分离物在编码成视网膜细胞瘤蛋白(Retinoblastoma protein,Rb)的基元序列"LXCDE"附近的二级结构上表现明显的差异,推测这种差异可能影响与植物中Rb蛋白的结合效率.     

香蕉束顶病毒NS株DNA组分5的克隆和序列分析

本文利用PCR技术扩增得到香蕉束顶病毒(BBTV)NS株DNA组分5的全基因,该基因全长为1014nt,具有一个开放阅读框,编码146个氨基酸,蛋白质二级结构包括6个α螺旋,7个β折叠。NS株系与南太平洋组澳大利亚、夏威夷、埃及分离物DNA组分5核苷酸和编码的氨基酸序列相比较,核苷酸序列同源率介于88%～89%之间,氨基酸序列同源率介于80%～88%之间。NS株系与其它分离物在编码成视网膜细胞瘤蛋白(Retinoblastomaprotein,Rb)的基元序列“LXCDE”附近的二级结构上表现明显的差异,推测这种差异可能影响与植物中Rb蛋白的结合效率。     

香蕉束顶病毒的纯化及理化特性

从具有典型香蕉束顶病(BBTD)症状的香蕉病组织中提纯了香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)。电镜下可观察到直径为18nm的球形病毒颗粒。最高紫外吸收在255nm,最低紫外吸收在240nm,A_(260)/A_(280)为1.30。用标准BBTV抗体通过ECL-Western转印法测定其外壳蛋白分子量为21kDa。其核酸经DNaseI、RNaseA和Mung Bean Nuclease分析,表明是约1kb的ssDNA。结果与国外文献报道一致。     

香蕉束顶病毒研究新进展

介绍香蕉束顶病毒从发现到诊断和检测,从分子生物学研究到抗病毒基因工程,探究香蕉束顶病毒100多年的研究历程,为香蕉束顶病毒的深入研究和有效防治奠定了坚实的基础。     

利用超低温保存方法脱除香蕉束顶病毒的研究

香蕉束顶病毒(BBTV)是香蕉生产中的严重病害之一,主要通过感病材料和香蕉交脉蚜等昆虫进行传播,目前尚无有效防治方法.本研究以感染BBTV的巴西蕉(Musa AAA Cavendish)为材料,研究了感染BBTV的巴西蕉离体再生和超低温保存技术条件,表明离体茎尖在MS+6-BA 4 0 mg/L+NAA 0 4 mg/L的培养基上分化不定芽较好;采用玻璃化法超低温保存技术保存带有BBTV的香蕉茎尖,再生后植株BBTV脱除率达到60 6%,而常规的茎尖培养对BBTV的脱除率仅为26 7%.     

香蕉束顶病毒nsp酵母双杂交诱饵质粒的构建及自激活验证

香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)DNA6编码的核穿梭蛋白(nuclear shuttle protein,NSP)在病毒的侵染、复制、运输中起重要作用。为了利用酵母双杂交系统研究BBTV DNA6与寄主香蕉蛋白的互作,本实验利用两对引物的PCR扩增得到BBTV -nsp片段,混合各自PCR产物进行熔化退火可得到1/4两端含有EcoRⅠ和BamHⅠ的酶切位点序列的DNA产物,将目的片段连接到酵母双杂交系统的pGBKT7诱饵载体中,成功获得pGBKT7-nsp,并将重组质粒pGBKT7-nsp转化入Y2H Gold酵母菌株中进行毒性检测和自激活验证。结果表明,pGBKT7-nsp没有自激活活性,同时对酵母细胞也无毒性,符合酵母双杂交诱饵质粒的要求,可用于下一步的蛋白互作实验。     

马铃薯Y病毒复制酶基因的克隆和序列分析

马铃薯Ｙ病毒复制酶基因的克隆和序列分析彭学贤,项瑜,刘俊君,莽克强（中国科学院微生物研究所,北京１００００８０）ＭｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆＰＶＹＮＩｂｇｅｎｅ￥ＰｅｎＸｕｅｘｉａｎ;ＸｉａｎｇＹｕ;Ｌｉ...     

香蕉束顶病毒海口分离物核穿梭蛋白(NSP)的纯化及抗血清制备

本研究以本实验室保存的含重组载体pDEST17-NSP的原核表达菌株E.coli BL21(DE3)为材料,于25℃、0.1 mmol/L IPTG条件下诱导4 h,集菌后超声波破碎,获得以包涵体形式表达的约20 kD的融合蛋白.实验结果表明,将沉淀的融合蛋白溶于含6 mol/L尿素的Binding Buffer中,再经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,可获得高纯度的融合蛋白.将纯化融合蛋白经12%SDS-PAGE电泳,切胶回收目的带,液氮研磨并按1:1(W/V)混合佐剂,4次免疫家兔,获得BBTV病毒核穿梭蛋白的特异性抗血清.以融合蛋白作抗原,间接ELISA法测定其抗血清效价为1:5 000.田间检测样品的最佳抗血清工作浓度为1:500.Western Blot鉴定结果表明抗血清能与目的蛋白特异性结合.本研究的结果将为下一步NSP基因转录调控和蛋白功能研究奠定一定基础.     

水稻矮缩病毒基因组第六号片段编码区的cDNA克隆及序列分析

从水稻矮缩病毒中国福建分离物的基因组中分离出第六号片段的双链ＲＮＡ,根据已发表的日本分离物第六号片段ｃＤＮＡ全序列合成了两个寡聚核苷酸引物,经过逆转录合成ｃＤＮＡ,应用ＰＣＲ方法扩增了编码区的基因序列,并将扩增产物克隆到ｐＧＥＭ３Ｚｆ（－）载体上。对重组子进行限制性酶切分析和ＤＮＡ序列分析证明,得到的是ＲＤＶ第六号片段完整的编码序列,进而构建了亚克隆并进行了全序列测定。结果表明,我们所扩增和克隆的     

香蕉束顶病毒中国漳州分离物DNA 4的克隆及非编码区的启动子活性初探

应用PCR方法克隆了香蕉束顶病毒中国漳州分离物(Banana bunchy top virus Chinese Zhangzhou isolate, BBTV-ZZ) DNA 4.序列分析表明其序列全长为1 039 nt,归属于亚洲组.5′ RACE分析确定其转录起始位点是269 nt处的A.利用PCR方法亚克隆了BBTV-ZZ DNA 4非编码区序列并将其插入到植物表达载体pCAMBIA 1304中的 gfp∶∶gus 基因上游得到重组质粒pTA2.将含pTA2和pCAMBIA 1304的根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)注射进烟草(Nicotiana tabacum L. cv. Xanthi NC)叶片,3～5 d后剪下注射部位的叶片进行GUS和GFP的表达分析.pTA2(含BBTV-ZZ DNA 4非编码区)、pCAMBIA 1304(含CaMV 35S启动子)和未注射的烟草叶片的GUS活性分别为1.007 0 pmol MU*μg-1*min-1 , 2.069 0 pmol MU*μg-1*min-1和0.021 4 pmol MU*μg-1*min-1.注射含pTA2和pCAMBIA 1304植物表达载体根癌土壤杆菌以及未注射的烟草叶片的每毫克总蛋白的GFP间接ELISA在490 nm的吸光值分别为89.577、100.440和3.287.     

香蕉束顶病毒中国漳州分离物DNA4的克隆及非编码区的启动子活性初探

应用PCR方法克隆了香蕉束顶病毒中国漳州分离物 (BananabunchytopvirusChineseZhangzhouisolate ,BBTV_ZZ)DNA 4。序列分析表明其序列全长为 10 39nt,归属于亚洲组。 5′RACE分析确定其转录起始位点是 2 6 9nt处的A。利用PCR方法亚克隆了BBTV_ZZDNA 4非编码区序列并将其插入到植物表达载体pCAMBIA 130 4中的gfp∶∶gus基因上游得到重组质粒pTA2。将含pTA2和pCAMBIA 130 4的根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens)注射进烟草 (NicotianatabacumL .cv .XanthiNC)叶片 ,3～ 5d后剪下注射部位的叶片进行GUS和GFP的表达分析。pTA2 (含BBTV_ZZDNA 4非编码区 )、pCAMBIA 130 4 (含CaMV 35S启动子 )和未注射的烟草叶片的GUS活性分别为 1 0 0 70pmolMU·μg-1·min-1,2 .0 6 90pmolMU·μg-1·min-1和 0 .0 2 14pmolMU·μg-1·min-1。注射含pTA2和pCAMBIA 130 4植物表达载体根癌土壤杆菌以及未注射的烟草叶片的每毫克总蛋白的GFP间接ELISA在 4 90nm的吸光值分别为89 5 77、10 0 4 4 0和 3 2 87。